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RNA干扰Rac1基因表达抑制胃癌细胞增殖及促进凋亡的机制研究
目的 RNA干扰抑制Rac1基因的表达对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及机制.方法 Western blot检测胃癌组织及相应的癌旁组织中Rac1基因的蛋白表达;将NC-siRNA、Rac1-siRNA转染至人胃癌SGC-7901细胞,不经任何处理的细胞作为空白对照组,48 h后,Western blot检测各组细胞中Rac1的蛋白表达;CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测ki67、PCNA、Cleaved caspase3、Notch1、Hes1蛋白表达.结果 Rac1在胃癌组织中的蛋白表达显著高于癌旁组织(P<0.01);RNA干扰SGC-7901细胞中Rac1基因后能显著降低Rac1的蛋白表达;与对照组及NC-siRNA组比较,Rac1-siRNA组细胞存活率及ki67、PCNA、Notch1、Hes1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著升高(P<0.01).结论 Rac1基因在胃癌组织中高表达,RNA干扰抑制Rac1基因表达后能显著降低细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其机制与抑制Notch1信号通路有关.
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Rac1基因真核表达质粒的构建及其对结肠癌细胞生物学功能的影响
目的：应用分子生物学技术构建Rac1基因真核表达质粒及小分子RNA（siRNA）干扰片段，通过调控其表达，研究Rac1蛋白对结肠癌细胞生物学功能的影响。方法从结肠癌细胞中扩增Rac1基因，构建pCDNA3.1(+)-Rac1和pEGFP-Rac1真核表达质粒实现过表达Rac1基因；通过小分子RNA干扰抑制Rac1基因表达。利用侵袭实验、划痕实验研究Rac1基因对结肠癌细胞侵袭和迁移能力的改变；通过Pull-Down实验，研究调控Rac1表达对癌细胞中GTPase活性的影响。结果成功构建Rac1基因真核表达质粒。通过调控Rac1蛋白的表达证实其与结肠癌细胞中Rac1 GTPase的活化程度，以及肿瘤细胞的迁移和侵袭能力呈正性关联。结论通过抑制Rac1的表达，可以有效阻止Rac1 GTPase的激活，从而抑制肿瘤细胞的迁移及侵袭，为抑制结肠癌进展提供新的干预靶点，也为进一步免疫生物过继治疗提供了必要的实验基础。
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RNA干扰Rac1基因表达对结直肠癌LoVo细胞骨架和细胞周期的影响
目的:观察Rac1蛋白在结直肠癌细胞中的表达,并分析其与结直肠癌LoVo细胞骨架、细胞周期和细胞凋亡的相关性.方法:Western blotting测定5种结直肠癌细胞株(LoVo,SW480,SW620,SW1116,HT29)中Rac1蛋白的表达；Rac1-shRNA质粒转染LoVo细胞后,激光共聚焦显微镜观察LoVo细胞骨架的变化,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡的变化.结果:5种结直肠癌细胞株中均有Rac1蛋白的高表达.Rac1基因沉默后,LoVo细胞中交联状态的F-actin网明显减少且紊乱,G0/G1期细胞比例较对照组显著增加[(74.63 ±4.40)％ vs(56.46 ±3.09)％,P＜0.05],而S期细胞比例较对照组显著减少[(12.87±1.77)％vs(29.66±1.92)％,P＜0.05]；Rac1-shRNA转染组LoVo细胞凋亡率较对照组显著增加[(25.31±2.05)％vs(9.38±1.16)％,P＜0.05].结论:RNA沉默Rac1基因的表达影响了LoVo细胞骨架的形成和细胞周期,为以Rac1为靶点治疗结直肠癌提供了实验依据.
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Twist在宫颈癌细胞株Hela中的表达变化及其对细胞侵袭转移的影响
目的 观察扭曲因子Twist在宫颈癌细胞株Hela中的表达变化,并探讨其对Hela细胞侵袭转移的影响以及作用机制.方法 取宫颈癌细胞株Hela以及人宫颈永生化上皮细胞H8,采用Western blotting法检测细胞中Twist蛋白.常规培养宫颈癌细胞株Hela,分为对照组、过表达组、沉默组,后两组采用慢病毒转染技术分别过表达和沉默细胞中的Twist基因,采用boyden实验检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;Western blotting法检测Rac1以及MMP-2蛋白.结果 Hela细胞中Twist蛋白表达高于H8细胞(P<0.05).与对照组相比,过表达组细胞中Twist蛋白表达升高,细胞侵袭、迁移能力增强,Rac1、MMP-2蛋白表达增加(P均<0.05);与对照组相比,沉默组细胞中Twist蛋白表达降低,细胞侵袭、迁移能力减弱,Rac1、MMP-2蛋白表达降低(P均<0.05).结论 Twist 在宫颈癌细胞株Hela 中高表达,促进/抑制其表达可以显著增强/降低Hela 的侵袭转移,机制可能是通过作用于侵袭转移相关蛋白Rac1?MMP-2 的表达进而调控细胞的侵袭转移.
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Rac1表达调控对髓母细胞瘤Daoy细胞增殖与凋亡的影响
目的 探讨Rac1基因沉默对髓母细胞瘤Daoy细胞株细胞周期、凋亡的影响.方法 将Daoy细胞分为2组:Rac1-shRNA组和对照组,Rac1-shRNA组将Rac1-shRNA质粒转染Daoy细胞,对照组则转染空白质粒.分别用RT-PCR、Western blot及流式细胞仪检测2组Daoy细胞Rac1 mRNA、Rac1蛋白、细胞周期、细胞凋亡率的变化,并进行统计学比较.结果 Rac1 mRNA和Racl蛋白在髓母细胞瘤Daoy细胞株中均有高表达;Rac1基因沉默后Daoy细胞细胞周期受阻于G0～G1期,G0～G1期细胞所占比例明显增加(80.9%±4.9%),而S期所占细胞比例减少(11.8%±2.3%);Rac1-shRNA组Daoy细胞凋亡率为36.7%±3.9%,而对照组为8.5%±0.9%.2组比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 RNA干扰沉默Rac1基因可以抑制Daoy细胞增殖,促进细胞凋亡,Rac1可成为抑制髓母细胞瘤增殖并促进细胞凋亡新的靶点.
