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丙戊酸钠联合三氧化二砷诱导多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞凋亡及其机制研究
本研究旨在探索丙戊酸钠联合三氧化二砷对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞凋亡的影响及其相关机制.利用CCK-8法检测不同浓度的丙戊酸钠、三氧化二砷单药和两药联合应用对RPMI 8226细胞增殖的抑制作用.采用流式细胞术检测细胞凋亡情况.半定量RT-PCR和Western blot分别检测各组BCL-2、BAX、caspase-8及caspase-9的mRNA和蛋白表达水平的变化.结果表明:丙戊酸钠及三氧化二砷均可抑制RPMI 8226细胞增殖,两者联合应用有协同作用(Q值大于1.15).联合用药组RPMI 8226细胞凋亡率较单药组明显增加(P＜0.05).与丙戊酸钠或三氧化二砷单药组相比,联合用药组RPMI 8226细胞BCL-2 mRNA及蛋白表达水平下降,BAX、caspase-8及caspase-9mRNA及蛋白表达水平上调.结论:丙戊酸钠和三氧化二砷有协同抑制RPMI 8226细胞增殖和诱导凋亡的作用,这可能与BCL-2表达下调,BAX、caspase-8及caspase-9表达上调有关.
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CP节律性化疗对RPMI8226细胞增殖及其Notch1/NF-κB信号通路的影响
目的:研究持续低剂量磷酰胺氮芥(phosphoramide,PM)联合泼尼松龙(predniso1one)(即CP节律性化疗方案)对骨髓瘤细胞RPMI8226增殖及凋亡的影响,并探讨其对Notch1/NF-κB信号通路的调控作用.方法:实验分DMSO对照组,磷酰胺氮芥(PM)组,泼尼松龙组,磷酰胺氮芥+泼尼松龙组(即CP组),采用不同组的药物处理骨髓瘤细胞RPMI8226,用CCK8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期及凋亡,RT-PCR检测Notch1和NFκB的mRNA表达水平.结果:与DMSO对照组相比,随着时间的延长,PM、泼尼松龙及CP组均使RPMI 8226细胞的增殖抑制率明显提高(r分别为0.994、0.996、0.999,P＜0.001),并且在相同作用时间,不同组的药物对细胞的增殖抑制率也明显不同,PM对细胞的抑制率弱,而CP组对细胞的抑制率强,泼尼松龙组次之(P＜0.01).用药处理48 h后,与DMSO对照组相比,各用药组G1/Go期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少,尤其在PM和CP组,G2/M期细胞比例在PM增加,而在泼尼松龙和CP组则减少.用药处理48 h后,与DMSO对照组相比,治疗组PM、泼尼松龙、CP组的RPMI8226细胞凋亡率依次增高(P＜0.01).用药处理48 h后,与DMSO对照组相比,泼尼松龙组、PM组、CP组RPMI8226细胞的Notch1和NF-κB mRNA表达均依次明显下降(P ＜0.001).结论:CP节律性化疗可以显著减少RPMI8226细胞增殖,促进其凋亡,使RPMI 8226细胞主要阻滞于G1/Go期,并能显著降低Notch1和NF-κB的表达水平,显示CP节律性化疗对MM的治疗作用有Notch1/NF-κB信号通路的参与.
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积雪草酸对多发性骨髓瘤细胞增殖活性的影响及其机制探讨
目的 探讨积雪草酸对多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期的影响及其机制.方法 MTT法检测积雪草酸对肿瘤细胞的抗增殖作用;Hoechest33258染色法检测细胞凋亡的形态学变化;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡及细胞周期的变化;RT-PCR法检测细胞survivin和bcl-2 mRNA表达水平的变化.结果 积雪草酸在浓度10～70μmol/L显著抑制RPMI 8226细胞的增殖,呈时间及浓度依赖性,作用24、48、72 h的IC50值分别为(42.25±4.57)、(24.88±3.51)、(19.83±2.88)μmol/L.积雪草酸可诱导细胞发生凋亡,出现典型的凋亡小体.积雪草酸诱导细胞发生早期凋亡,并呈浓度依赖性.积雪草酸25～40μmol/L,能将RPMI 8226细胞阻滞在G2期,G2期细胞比例随积雪草酸浓度增大而逐渐增高.积雪草酸使survivin和bcl-2 mRNA表达下降,并与细胞的凋亡程度呈负相关.结论 积雪草酸能通过调控细胞周期的进程和诱导细胞凋亡从而抑制RPMI8226细胞增殖,其诱导凋亡的机制可能与下调survivin和bel-2的转录水平有关.
