氟化钠对成骨样细胞功能表达影响的研究

目的探讨氟对成骨样细胞功能表达的影响.方法用细胞生长曲线和四唑盐比色(MTT)法测定细胞增殖,对硝基苯基磷酸二钠盐比色(PNPP)法检测碱性磷酸酶(ALP)活性及放免法测定骨钙素分泌量,研究不同浓度(10-7mol/L～10-3mol/L)氟化钠(NaF)对成骨样细胞UMR106增殖和分化功能的影响.结果NaF对UMR106细胞增殖及早期分化呈双向调节作用,主要表现为低浓度促进,高浓度抑制.染氟一定时间后,与对照组相比10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L NaF组细胞增殖及ALP活性均增加(P＜0.05),而10-4mol/L、10-3mol/L NaF组则表现为抑制细胞增殖及ALP活性(P＜0.05).但是,NaF对UMR106细胞晚期分化呈单一作用,上述不同浓度的NaF均可促进骨钙素分泌,与对照组相比有统计学意义(P＜0.05).而且,随NaF浓度升高骨钙素分泌量增加.结论NaF对成骨样细胞的增殖呈双向调节,但对其分化因暴露时间和浓度不同而呈多样性.

塞隆骨提取物对成骨样细胞增殖及凋亡作用的研究

目的:研究塞隆骨提取物对体外培养成骨样细胞代谢功能的调节作用及对其凋亡的影响.方法:采用超临界萃取法制备塞隆骨的脂、醇、水提物、水煎提取液及骨胶提取物,以大鼠成骨样细胞ROS 17/2.8为细胞模型,添加塞隆骨各提取物至大鼠成骨细胞培养体系中,MTT法测定成骨样细胞的增殖情况,以流式细胞术检测成骨样细胞凋亡比例.结果:1×10-2 g·mL-1塞隆骨脂和水提物对大鼠成骨样细胞ROS 17/2.8有显著的促进增殖作用(P＜0.01);与空白组相比,各塞隆骨提取物使成骨细胞的亚二倍体峰比例明显减少,琼脂糖凝胶电泳结果表明这些提取物能够降低成骨样细胞的凋亡率,推迟凋亡的发生.结论:塞隆骨通过促进成骨样细胞的增殖,降低成骨样细胞的凋亡率和推迟其凋亡的发生,来发挥健骨的作用.

从骨髓和脐血造血干细胞中诱导成骨样细胞

骨髓有2个重要的功能:造血和成骨.骨髓中存在造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSCs)(CD34+细胞)和间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs).这2种干细胞共同存在于骨髓腔中,MSC对HSC不仅有空间位置的机械支持作用,还分泌多种造血因子支持其造血功能,有助于HSC未分化状态的维持.这2种干细胞之间是否存在着某种联系或交叉呢?我们分离了脐血CD34+细胞,并在体外培养扩增,探讨其中是否含有成骨细胞的前体细胞.

2β-(3羟丙氧)-骨化三醇对OS-732人成骨样细胞增殖与分化的影响

目的观察2β-(3羟丙氧)-骨化三醇(ED-71)对体外培养人成骨样细胞增殖与分化的影响,进一步探讨ED-71治疗骨质疏松的机制.方法采用塞唑蓝(MTT)分析法检测ED-71对体外培养OS-732人成骨样细胞增殖作用与效价.采用培养细胞匀浆测单位蛋白碱性磷酸酶活性,培养基中骨钙素含量分析及原位杂交方法检测ED-71对OS-732人成骨样细胞分化的影响. 结果培养第4天,10-7mol/L ED-71显著抑制成骨样细胞增殖(P＜0.05),而10-8mol/L、10-9mol/LED-71对成骨样细胞的作用不明显.培养4 d后培养基中骨钙素水平在10-7mol/L ED-71组变化不大,在10-8mol/L、10-9mol/L ED-71组骨钙素水平显著增高(P＜0.05或P＜0.01).原位杂交转化生长因子-β(TGF-β1)表达明显增加,而碱性磷酸酶比活性无明显变化. 结论ED-71抑制成骨样细胞增殖高剂量作用显著,促进成骨样细胞分化较低剂量显著

辛伐他汀对成骨样细胞MC3T3-E1增殖功能的影响

目的 从细胞、蛋白及基因水平探讨辛伐他汀对成骨样细胞MC3T3-E1增殖的影响.方法 辛伐他汀选取10-6、10-7、10-8和10-9mol/L4个浓度组,同时设溶剂对照组.含血清细胞培养条件下,连续细胞计数8 d,描绘生长曲线;无血清培养条件下,分别于24、48及72 h进行细胞计数、四唑盐比色试验(MTY)、蛋白质含量测定和DNA含量荧光测定.结果 含血清细胞培养条件下,辛伐他汀各浓度组与溶剂对照组的生长曲线相比较,无明显差异;无血清培养条件下,辛伐他汀各浓度组与溶剂对照组24、48及72 h时细胞计数、MTY比色试验及DNA含量荧光测定各组间未见明显差异;蛋白质含量测定24及72 h时各组问无明显差异,然而48 h时10-6mol/L辛伐他汀组蛋白含量明显高于对照组并差异有显著性(P＜0.05).结论 辛伐他汀促进了成骨样细胞MC3T3-E1细胞的蛋白合成功能,但对其增殖无明显影响.

红车轴草总异黄酮含药血清对MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响

目的 研究红车轴草总异黄酮含药血清对MC3T3-E1成骨样细胞增殖、分化和矿化的影响.方法 大鼠灌胃红车轴草总异黄酮一定时间后,制备含药血清,并分别采用MTT法、碱性磷酸酶活性测定法、ELISA法和茜素红染色测定矿化结节的方法考察不同浓度红车轴草总异黄酮含药血清对MC3T3-E1成骨样细胞的增殖率、碱性磷酸酶活性、骨钙素生成以及矿化结节形成的影响.结果 不同浓度的红车轴草总异黄酮含药血清都能显著促进MC3T3-E1成骨样细胞的增殖并显著提高MC3T3-E1成骨样细胞碱性磷酸酶的活性,且佳的含药血清浓度为5％;5％的红车轴草总异黄酮含药血清处理MC3T3-E1成骨样细胞6d和9d可显著促进骨钙素的分泌;5％的红车轴草总异黄酮含药血清处理MC3T3-E1成骨样细胞6d、12d和18d,形成的矿化结节均显著高于对照组.结论 红车轴草总异黄酮含药血清可以显著促进MC3T3-E1成骨样细胞的增殖、碱性磷酸酶活性、骨钙素分泌和矿化,说明红车轴草总异黄酮含药血清确实可以促进MC3T3-E1成骨样细胞的分化成熟,该药物具有开发为抗骨质疏松症新药的潜力.

人成骨样细胞和前破骨样细胞ER亚型、OPG/RANKL/RANK系统、IL-6及其受体以及破骨细胞标志基因表达的研究

目的 分析比较两种人成骨样细胞系(U2-OS、MG-63)和两种人前破骨样细胞系(U937、HL-60)ER亚型、OPG/RANKL/RANK系统、IL-6及其受体以及破骨细胞标志基因表达的差异,为今后研究雌激素与IL-6等细胞因子在骨组织中相互关系提供适宜的细胞模型.方法 RT-PCR和免疫印迹法检测ERα、ERβ的表达,ELISA法测定IL-6的分泌.OPG、RANKL、RANK及IL-6受体的表达采用免疫印迹法进行检测,TRAP、MMP-9则采用RT-PCR技术进行分析.结果 (1)转录水平及蛋白水平证实四种细胞均表达ERα和ERβ;(2)四种细胞不同程度地表达OPG和RANKL,而RANK则仅见于U937细胞表达;(3)四种细胞均表达IL-6受体(IL-6Rα、gp130),除U2-OS细胞外其余三种细胞均组成型分泌IL-6;(4)破骨细胞标志基因TRAP在两种人前破骨样细胞U937、HL-60中均表达,且表达水平相近;而MMP-9仅在U937细胞中弱表达;两种人成骨样细胞U2-OS、MG-63未见有这两种基因表达.结论 筛选出用于研究雌激素与IL-6等细胞因子在骨组织中相互关系的细胞模型,同时也为今后深入阐明骨靶向和其他新型抗骨质疏松雌激素的分子机制研究奠定基础.

利塞膦酸钠对人成骨样细胞MG63 OPG及TNFα表达的影响

目的 研究利塞膦酸钠对人成骨样细胞MG 63护骨素(OPG)及肿瘤坏死因子α(TNFa)表达的影响,以阐明利塞膦酸钠发挥骨保护作用的机制.方法 以不同浓度(10-10 mol/L;10-9 mol/L;10-8 mol/L;10-7 mol/L)的利塞膦酸钠干预MG 63细胞72 h;EkLISA法测定细胞条件培养液中OPG及TNFa的含量.结果 利塞膦酸钠可下调MG 63细胞TNFa的表达;上调OPG的表达;并提高碱性磷酸酶(ALP)活性.结论 利塞膦酸钠可通过调节成骨样细胞MG 63 OPG、TNFa的表达,从而发挥其抗骨吸收的作用.

流体剪切力抑制肿瘤坏死因子α诱导鼠成骨样细胞MC3T3-E1凋亡的实验研究

目的 研究流体剪切力(fluid shear stress,FSS)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导鼠成骨样细胞MC3T3-E1凋亡的影响.方法 将MC3T3-E1分为TNF-α干预组(实验组)和无TNF-α干预组(对照组),TNF-α(10 ng/ml)×4 h诱导MC3T3-E1凋亡后,四个实验组分别加载12 dyn/cm2 FSS作用0,15,30,60 min.应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、荧光显微镜和流式细胞技术(FΑCS)检测细胞的增殖能力和凋亡,免疫印迹法检测半胱氨酸蛋白激酶9(caspase 9)和凋亡蛋白酶活化因子1(Αpaf-1)蛋白的表达.采用SPSS16.0软件包对数据进行单因素方差分析.结果 TNF-α(10 ng/ml)×4 h能诱导明显的凋亡信号,FSS(12 dyn/cm2)能明显抑制这种凋亡,而且随着刺激时间的增加,从0 min逐渐延长至60 min,细胞活性逐渐增加,凋亡细胞数逐渐减少,实验组与对照组单因素方差分析及各组间LSD两两比较有显著性差异(P＜0.05),同时caspase 9和Αpaf-1蛋白的表达也逐渐增加.结论 生理范围的FSS能够抑制TNF-α诱导的MC3T3-E1细胞的凋亡,作为线粒体通路的关键蛋白,caspase 9和Αpaf-1在凋亡时增加而FSS后表达减少,说明FSS抑制这种凋亡至少部分是减弱了凋亡的线粒体通路.

组织工程骨修复兔颅骨缺损的实验研究

目的探讨组织工程化骨修复骨缺损实用价值。方法将自体成骨样细胞即刻种植在胶原包埋的聚羟基乙酸（PGA）基质材料上，然后将该复合体或单纯基质材料移植到兔颅骨的一侧全层骨缺损区，作为实验侧Ⅰ或实验侧Ⅱ。对侧设对照，不作任何植入。将40只新西兰兔分别于术后2、6、8、12 w处死，标本行大体组织学检查，X线摄片及灰量测定检查。结果术后2w实验侧I缺损区可见骨小梁形成，且各期成骨面积明显优于实验侧Ⅱ及对照侧，另外，植入材料内的灰量测定结果及X线摄片结果也表明实验侧I成骨量明显大于实验侧Ⅱ（p<0.01），而对照侧为纤维组织修复。结论应用胶原包埋PGA加成骨样细胞复合体移植可修复自体的兔颅骨缺损，为组织工程化骨在颅面外科及整形外科领域的临床应用奠定了基础。

rhBMP-2和IGF-I联合作用对兔成骨样细胞增殖的影响

目的:研究人重组骨形成蛋白(recombinant human bone morphogenetic protein,rhBMP),胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-I)单独及联合应用对兔成骨细胞增殖的影响.方法:采用细胞培养技术及噻唑蓝比色法,对2种生长因子对兔成骨样细胞增殖的调节作用进行观察.结果:在培养基中含1%胎牛血清(FBS)条件下,100ng/ml rhBMP-2对兔成骨样细胞增殖作用不显著.IGF-I(5,25,50ng/ml)有一定促增殖作用.两者联合应用各浓度组对细胞增殖有促进作用(P＜0.05).结论:rhBMP-2和IGF-I联合应用对兔成骨样细胞增殖有协同效应.

rhBMP-2/rhTGF-β1联合应用对兔成骨样细胞增殖及分化的影响

目的:探讨转化生长因子β(transforming growth factors beta,TGF-β)、与骨形成蛋白(bone morphogenetic proteins,BMP)联合应用对兔成骨样细胞增殖及分化的影响.方法:体外培养兔成骨样细胞,采用四唑盐比色法和碱性磷酸酶试剂盒检测两种生长因子对兔成骨样细胞增殖及分化的影响.结果:100ng/mlrhBMP-2促进兔成骨样细胞的分化,对增殖无明显作用.不同浓度的rhTGF-β1均可促进成骨样细胞的增殖,对分化无明显作用.二者在同时应用时,其作用部分或完全抵消.结论:在本实验条件下,rhBMP-2、rhTGF-β1联合应用时无协同效应.

比较间歇性和持续性牵张力对人牙周膜细胞成骨样细胞分泌活性的影响

目的本研究比较间歇性和持续性牵张力对体外培养的人牙周膜细胞成骨样细胞分泌活性的影响.方法第3～7代人牙周膜细胞,传代至附着膜上,选择以3周/分的频率间歇加力2、4、6小时和持续加力2、4、6小时,附着膜受牵张大小为1%,收集条件培养基放射免疫检测骨钙素(OCN),生化检测碱性磷酸酶(ALP).结果间歇和持续牵张力的作用对牙周膜细胞的影响不同,有一定的规律.ALP、OCN的分泌,两种力作用下都有短暂和小幅的升高,间歇力组升高幅度更大,随加力时间的延长,细胞表达这几种分子的能力下降,持续力组下降早于间歇力组,下降幅度也较后者大.结论间歇牵张力对牙周膜细胞的作用较持续力组明显和持久,提高人牙周膜细胞成骨样细胞的分泌活性.

体外培养的人牙周膜细胞成骨样细胞表型特征的研究

目的对体外培养的人牙周膜细胞成骨样细胞的表型特征进行研究探讨.方法组织块法培养人牙周膜细胞,放射免疫法检测条件培养基中碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OCN)的分泌活性,免疫组化法检测非分泌型的ALP和OCN的表达,原位杂交方法检测二者的mRNA水平的表达.结果人牙周膜细胞具有成骨细胞的部分表型,碱性磷酸酶在蛋白水平包括分泌和非分泌型及基因转录水平都有一定的表达,随培养时间的变化不大;而不具有成熟的成骨细胞的表型特征--骨钙素的表达,其无论是在基因和蛋白水平都没有表达.这一结果为进一步研究人牙周膜细胞在机械力作用下参与骨改建打下基础.

机械牵张力对人牙周膜细胞成骨样细胞功能的影响

α-玉米赤霉醇对成骨细胞增殖、分化以及 OPG 和RANKL mRNA 表达的影响

目的:探讨α-玉米赤霉醇(α-zearalanol,α-ZAL)对小鼠成骨样细胞MC3T3-E1增殖、分化及护骨素( osteoprotegerin,OPG)和NF-κB受体活化配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)mRNA表达的影响.方法:传代培养小鼠成骨样细胞株MC3T3-E1,采用不同浓度的α-ZAL作用于细胞72 h后,MTT法检测细胞增殖活性,PNPP法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,RT-PCR法检测ALP,OPG及RANKL mRNA的表达水平.结果:10-6～10-12 mol· L-1的α -ZAL可显著抑制成骨细胞的增殖(P＜0.05)；显著增加ALP活性(P＜0.05),但不同剂量间存在作用时间差异；并且可显著上调成骨细胞内OPG/RANKL mRNA的比值(P＜0.05).结论:α-ZAL可抑制成骨细胞的增殖、促进其分化,并可通过上调OPG/RANKL mRNA表达比值抑制破骨细胞的形成,有望作为骨质疏松症的治疗药物.

补肾法对酒精干预人成骨样细胞OS-732蛋白质表达的影响

目的 观察成骨样细胞在酒精干预后的变化和补肾中药对其的治疗作用.方法 首先用新西兰兔14只,随机分配成中药六味地黄丸治疗组和生理盐水空白对照组.依据人与兔关系换算出治疗组每日用药5.4 g,用温生理盐水10 mL融解灌胃;空白对照组灌胃等量生理盐水,1次/d,连续3 d,末次双倍量灌胃2 h后采血制备含药血清.然后将含药血清与RPMI 1640 细胞培养基配成浓度为5%、10%、20%培养液,对细胞进行培养,通过观察细胞生长曲线,得出佳含药血清浓度为10%.后将人成骨样细胞OS-732分为酒精干预组、药物治疗组、空白对照组进行培养并收集细胞.每组细胞提取总蛋白后进行双向凝胶电泳技术分离,得出蛋白质点电泳凝胶图谱,利用计算机图像分析软件分析找出差异蛋白质点.结果 酒精干预组、药物治疗组、空白对照组比较,表现明显差异的蛋白点有5个(即SSP1002、SSP1401、SSP1602、SSP8501、SSP8504),酒精干预组与空白组比较蛋白点表达均降低;药物治疗组与酒精干预组比较,这5个蛋白点表达均得到不同程度的逆转.结论 补肾中药可能能够提高受损成骨细胞的蛋白表达.

骨髓干细胞分化的成骨样细胞与可降解镁合金体外相容性的研究

目的 探讨SD大鼠骨髓间充质干细胞诱导分化的成骨样细胞在可降解镁合金支架材料表面的生长情况,为研究镁合金与成骨样细胞的体外相容性提供实验数据.方法 原代培养大鼠骨髓干细胞,并诱导其分化为成骨样细胞,行碱性磷酸酶(ALP)染色鉴定;将成骨样细胞支架材料复合培养,扫描电镜观察细胞形态;观察材料浸提液培养下细胞的形态,及增殖情况,ALP活度检测细胞的成骨分化情况.结果骨髓干细胞呈长梭形,可分化为成骨样细胞,碱性磷酸酶染色阳性.成骨样细胞与镁合金材料复合培养后,扫描电镜显示细胞生长旺盛,镁合金材料浸提液可促进大鼠成骨样细胞生长、增殖和分化.结论 可降解植骨材料镁合金与骨髓干细胞来源的成骨样细胞具有良好的组织相容性,有利于细胞黏附、生长增殖和成骨分化.

塞隆骨提取物对体外大鼠成骨样细胞ROS17/2.8的影响

目的研究塞隆骨提取物对体外培养大鼠成骨样细胞ROS17/2.8代谢功能的调节作用,从而在细胞水平上阐述塞隆骨防治骨质疏松的作用机制及药效成分的筛选.方法采用超临界萃取法制备塞隆骨的脂、醇、水提液及水煎提取液,用MTT法测定塞隆骨脂、醇、水提液及水煎液对成骨样细胞的增殖作用;测定碱性磷酸酶(ALP)活性,观察上述提取液对细胞分化的影响.结果10 mg/mL塞隆骨脂提液和水提液对大鼠成骨样细胞ROS17/2.8有显著的增殖作用(P＜0.01)ALP检测结果显示,10 mg/mL脂提液能极显著增强成骨样细胞内ALP活性(P＜0.01),1.0、0.1 mg/mL能提高ALP活性(P＜0.05);10 mg/mL水提液能使ALP活性升高(P＜0.05).结论塞隆骨脂和水提取液中分别存在有较高活性的促成骨样细胞增殖、分化的物质,可作为虎骨的替代中药.

周期性单轴张、压应力对成骨样细胞增殖的影响

目的 观察张应力与压应力两种不同应力形式对成骨样细胞增殖的影响.方法 本研究应用Forcel四点弯曲体外细胞力学加载仪(ZL01256849. X)对人成骨样细胞株MG63加载,使用倒置相差显微镜观察不同力学加载强度对细胞贴壁生长的影响,应用流式细胞计量术检测生理水平周期性单轴张、压应力刺激下成骨样细胞MG63细胞周期及增殖指数的变化,揭示不同应力形式对成骨样细胞增殖的影响.结果 细胞贴壁生长与应力水平相关,生理水平应力刺激下细胞贴壁及形态良好,超生理水平应力刺激不利于细胞贴壁生长.生理水平应力2000μstrain,0.5Hz加载1小时张力组细胞增殖指数上调,压力组变化不显著.结论 力值大小与细胞贴壁生长密切相关;不同形式的应力对成骨样细胞增殖的影响不同,应力加载早期,张应力促进成骨样细胞增殖,压应力影响不明显.