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-80℃冰箱非程控降温冻存脐血造血干细胞
目的:为脐血造血干细胞(CBHSC)的冻存建立简便、经济且有效的方法.方法:采用5%二甲基亚砜(DMSO)加6%羟乙基淀粉(HES)为冷冻保护剂,不用程控降温装置,直接置CBHSC于-80℃冰箱中冻存1-6个月.结果:冻存6月后,单个核细胞(MNC)、粒-单系造血祖细胞(CFU-GM)和CD34+细胞的回收率及台盼兰拒染率分别为,(91.6±1.8)%、(83.1±15.6)%、(88.2±1.8)%,(77.7±2.0)%.结论:这种简便、经济的方法能很好地保存CBHSC的造血潜能,因此,能为脐血移植冻存CBHSC.
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从骨髓和脐血造血干细胞中诱导成骨样细胞
骨髓有2个重要的功能:造血和成骨.骨髓中存在造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSCs)(CD34+细胞)和间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs).这2种干细胞共同存在于骨髓腔中,MSC对HSC不仅有空间位置的机械支持作用,还分泌多种造血因子支持其造血功能,有助于HSC未分化状态的维持.这2种干细胞之间是否存在着某种联系或交叉呢?我们分离了脐血CD34+细胞,并在体外培养扩增,探讨其中是否含有成骨细胞的前体细胞.
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建立人/猪造血嵌合体模型的初步探讨
本研究目的是利用免疫系统尚未成熟的胎猪和新生猪作为人脐血造血干细胞(HSC)的移植受者,建立人/猪造血嵌合体模型,初步探讨在猪体内扩增HSC的可行性.在无菌隔离器中,通过肌肉或脐静脉(剖子宫)给胎猪移植人脐血细胞,或在断脐前通过脐静脉给新生猪移植人脐血细胞,应用流式细胞术检测移植组猪外周血中人CD45+细胞.结果表明:移植后,受试猪生长发育与对照猪一致;移植后60天时,用流式细胞术在猪的外周血中检测到一定比例的人源细胞.结论:胎猪或新生猪能耐受一定量的人源抗原的植入,建立人/猪造血嵌合体模型是可行的.
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混合移植治疗儿童血液病疗效观察
本研究探讨HLA不全相合骨髓造血干细胞及外周造血干细胞、加入第三方脐血造血干细胞混合移植治疗小儿血液病的疗效.对2012年8月至12月我院5例难治性血液病患儿进行异基因造血干细胞移植,移植方式为HLA不全相合骨髓造血干细胞、外周血造血干细胞及脐血造血干细胞混合移植,观察混合移植中的第三方脐血干细胞对于移植后造血重建时间、STR嵌合度、GVHD发生情况及移植相关近期并发症的作用.结果表明,5例患儿移植后均获得造血重建,ANC＞ 0.5×109/L的中位时间是移植后11d,Plt＞ 20×109/L的中位时间移植后10 d;外周血STR-PCR嵌合度检测显示,于移植后30 d均达到稳定嵌合;5例患儿出现轻至中度GVHD症状,表现为Ⅰ-Ⅱ皮肤GVHD,其中2例患儿发生腹泻,出现Ⅰ-Ⅱ肠道GVHD,5例患儿均无肝功能损害.随访至2013年4月30日,中位随访时间137 d(130 d-250 d),1例移植后131 d死于严重出血性膀胱炎及多部位感染,其余4例均无病生存至今,存活时间分别为130、137、193、250 d,中位生存时间134 d.结论:HLA不全相合骨髓造血干细胞、外周血造血干细胞、第三方脐血造血干细胞混合移植对提高小儿血液病的存活率、延长存活时间有一定疗效.
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脐血造血干细胞短期冻存效果的评价
为了探讨脐血造血干细胞在液氮中短期冻存复苏后的效果,分别将各自为8例冻存6个月、1年、2年的脐血干细胞进行复苏,观察造血干细胞活性.有核细胞(NC)计数采用自动血细胞分析仪测定,CD34+细胞采用流式细胞技术测定,用体外造血细胞培养技术分析粒-巨噬细胞集落生成单位(CFU-GM)产率,台盼蓝染色法判断造血细胞存活率.结果表明:脐血造血干细胞在液氮中冻存6个月、1年、2年后解冻,其有核细胞、CD34+细胞、细胞活率、CFU-GM产率在3个不同冻存时间的差异无显著性.结论:脐血干细胞于液氮中短期冻存,其干细胞数量和细胞活性没有明显的变化,冻存效果较好.
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脐血造血干细胞移植治疗急性白血病的护理
目的介绍脐血造血干细胞移植(UCBSCT)治疗,总结护理经验,为今后的移植成功起到重要的作用.方法对6例急性白血病脐血移植患者进行的全程护理,认真做好层流病房无菌环境的管理、导管的护理、口腔护理和密切观察病情的变化,采取积极有效措施,预防并发症的发生.结果 6例脐血移植患者均未发生由于护理不当造成的并发症.其中5例患者种植成功,1例移植失败,即行自体外周血干细胞移植.结论对UCBSCT患者实施有效的护理措施,可预防并发症的发生,提高移植的成功率.
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脐血造血干细胞的归巢缺陷与修复研究进展
20世纪70年代以来,从静脉输注入白细胞抗原相合的同胞骨髓造血干细胞的造血干细胞移植就已经成功开展[1],移植的成功与输入的造血干细胞是否能顺利定位于受者骨髓并增殖、分化、重构造血和免疫功能密切相关.
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脐血源性和脐带源性的间充质干细胞生物学特性的比较
间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)为中胚层发育的早期细胞,支持造血功能,在一定条件控制下可分化为骨、软骨、脂肪、肌肉、神经、肝和内皮等多种细胞[1-7].因此,作为组织工程种子细胞具有广阔的临床前景.MSC存在于身体的很多部位,目前研究较多的是骨髓和脐血.骨髓源性MSC存在高度病毒污染的可能,且随着年龄增长其细胞数量和扩┅增、分化能力出现明显下降趋势[8]:胎儿脐血MSC含量非常低,且其分离会损失脐血造血干细胞,影响脐血冻存.
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脐血造血干细胞移植的研究进展
自1980年以来,人们认识到脐血中含有丰富的造血干细胞,并用造血干细胞移植治疗血液系统疾病及其他各种相关疾病,得到了更好的效果,脐带血因其更容易广泛获取,又没有伦理道德的限制,而且有立即可用性、移植免疫耐受较低等诸多优点被广泛利用,从此在移植医学和再生医学领域获得了一席之地.脐血的收集和移植得到了很快的发展,脐血库应运而生.该文就目前脐血库的现状和脐血造血干细胞移植的应用进展进行综述.
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胎鼠血及新生鼠外周血分次移植对造血干细胞植入影响的实验研究
我们拟在建立鼠-鼠同种异体脐血移植动物模型的基础上,采用胎鼠血及新生鼠外周血(FNPB)单次或分次移植,观察移植后免疫和造血重建,试图探讨促进脐血造血干细胞(HSC)植入,提高脐血移植(UCBT)效率的新策略,为克服UCBT存在的问题和进一步开发利用提供实验和应用依据.
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-80℃冰箱非程控降温冻存脐血造血干细胞
目的:为脐血造血干细胞(CBHSC)的冻存建立简便、经济且有效的方法.方法:采用5%二甲基亚砜(DMSO)加6%羟乙基淀粉(HES)为冷冻保护剂,不用程控降温装置,直接置CBHSC于-80℃冰箱中冻存1～6个月.结果:冻存6个月后,单个核细胞(MNC)、粒-单系造血祖细胞(CFU-GM)和CD34+细胞的回收率及台盼兰拒染率分别为(91.6±1.8)%,(83.1±15.6)%,(88.2±1.8)%,(77.7±2.0)%.结论:这种简便、经济的方法能很好地保存CBHSC的造血潜能,因此,能为脐血移植冻存CBHSC.
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猪苓多糖对脐血造血干细胞体外扩增及干细胞移植后免疫重建的调节效应
目的:人脐血造血干细胞得以移植于小鼠体内,其理论基础是放射线照射使小鼠骨髓枯竭,龛位腾出,为移植的脐血造血干细胞提供空间,而猪苓多糖是从中药猪苓中提取的多糖成分,具有免疫调节抗肿瘤作用,也是一种非T细胞促有丝分裂素,对放射线照射有一定的防护作用.观察猪苓多糖埘脐血造血干细胞体外扩增及干细胞移植后免疫重建效应.方法: 实验于2004-06/2006-05在兰州大学基础医学院免疫研究所完成.①实验材料:清洁级BALB/c小鼠由兰州生物制品研究所提供,8周龄,体质耸约20g,雌雄各半,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.脐血样本由兰泰医院妇产科提供,产妇及家属对实验知情同意,并经医院伦理委员会批准.猪苓多糖由兰州大学第-医院提供.②实验方法:应用20,17.5,12.5,7.5 mg/L猪苓多糖体外扩增培养脐血造血干细胞,并测定细胞增殖率及CD34+细胞数.将BALB/c小鼠分为正常对照组:尾静脉、腹腔注射等量生理盐水:照射空白组:3.5C,y经60Coγ放射线照射联合尾静脉、腹腔注射等量生理盐水;照射药物组:3.5Gy经60Coγ放射线照射联合尾静脉注射等量生理盐水、腹腔庄射猪苓多糖;照射移植组(n=15):3.5Gy经60Coγ放射线照射联合脐血造血干细胞移植、腹腔注射等量生理盐水;照射移植药物组:35Gy经60Coγ放射线照射联合脐血造血干细胞移植、腹腔注射猪苓多糖.③实验评估:观察小鼠生存状况及血常规变化,流式细胞仪测定CD3、CD4、CD8、CD19水平.结果:57只小鼠均进入结果分析.①12.5 mg/L猪苓多糖增殖效率为显著(P＜0.01),流式细胞仪测定显示CD34+细胞数扩增了6.33倍.移植药物组小鼠死亡率低,死亡高峰集中在照射移植后7～14d左右.②移植药物组小鼠血象恢复正常,并且时间明显短于其他实验组(P＜0.05).③细胞及体液免疫恢复情况,移植药物组小鼠各项指标水平与正常小鼠无差别(P＞0.05),与其他各组小鼠比较,除CD4、CD19水平与照射移植小鼠无差别外均有差别(P＜0.05).结论:猪苓多糖对脐血造血干细胞有明显扩增作用,并能促进脐血造血干细胞移植小鼠免疫造血重建.
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异种脐血干细胞移植胶原性关节炎小鼠Bcl-2和Bax 的表达
背景:类风湿性关节炎的发生发展与滑膜细胞及淋巴细胞的增殖与凋亡不平衡密切相关,其滑膜细胞存在细胞凋亡过程的异常.目的:观察异种、异基因双份脐血干细胞移植对Ⅱ型胶原性关节炎小鼠Bcl-2 和Bax 表达的影响.方法:弗氏完全佐剂+Ⅱ型胶原诱导C57BL/6(H-2b)小鼠,建立Ⅱ型胶原性关节炎小鼠模型.小鼠二次免疫接种后第2 天,模型组、正常对照组尾静脉注射生理盐水,细胞移植组将脐血造血干细胞注入小鼠尾静脉内(其中单份剂量2×106/50 g;双份剂量:每份1×106/50 g,共2×106 /50 g).甲氨喋呤阳性对照组小鼠灌胃甲氨蝶呤,每次0.017 5 g/kg,每5 天1 次,共6 次.结果与结论:移植后第42 天全部处死动物取膝及肘以下关节组织,病理组织学显示正常对照组关节面光滑,滑膜层未见炎性细胞浸润,软骨细胞形态正常;模型组滑膜组织高度增生,大量的炎性细胞浸润,软骨面破坏;甲氨蝶呤阳性对照组、单份脐血造血干细胞移植组滑膜组织可见轻度增生,少量炎性细胞浸润,双份脐血造血干细胞移植组关节软骨表面光滑,未见破坏,有极少量炎性细胞浸润.免疫组织化学检测显示,双份脐血造血干细胞移植组Bax、Bcl-2 的表达低于单份脐血造血干细胞移植治疗组(P < 0.05);与正常对照组比较,差异无显著性意义(P >0.05).结果说明双份脐血干细胞在一定数量及作用时间内可诱导Ⅱ型胶原性关节炎小鼠滑膜细胞凋亡,对滑膜组织损伤起保护作用.
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D183.49壳聚糖对脐血造血干细胞移植小鼠免疫重建的研究
目的:探讨D183.49壳聚糖对脐血造血干细胞的体外扩增作用及其对脐血造血干细胞移植小鼠的免疫重建并初步探索对脐血造血干细胞移植有调控作用的药物筛选方法.方法:分离脐血中单个核细胞体外扩增培养,测定细胞增殖率及CD34+细胞数.60Co γ射线亚致死量照射小鼠,尾静脉注射扩增培养后的单核细胞,每日腹腔注射D183.49壳聚糖,28天.观察记录生存状况;测定血象及CD3、CD4、CD8、CD19水平;脾脏病理切片观察.结果:①体外研究:D183.49壳聚糖10 μg组体外增殖效率显著,48小时达峰值;流式细胞仪测定CD34+细胞扩增8倍,P＜0.01.②体内研究:移植药物小鼠血象恢复明显短于其他实验组;CD3、CD4、CD8、CD19水平基本恢复正常,P＜0.05.小鼠脾脏病理切片显示亦恢复正常.结论:D183.49壳聚糖对脐血造血干细胞有明显扩增作用,其能够促进脐血造血干细胞移植小鼠免疫造血重建.
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影响脐血HLA分型因素的探讨
脐血造血干细胞因其独特的生物学特性,来源丰富等特点,是一个具有潜力的造血干细胞来源,但供受体之间HLA 的配合程度仍是影响移植成功的重要因素.人们在采用外周血做HLA分型方面已积累了一些经验,但是否适用于脐血的HLA分型?为此,我们随机采集了15份足月顺产的新生儿脐血,根据脐血的特点对细胞分离等容易影响HLA分型的因素进行改进,完善脐血的HLA分型方法,结果报告如下.
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贴壁脐血细胞对造血细胞周期及CFU-Mix形成能力的影响
自1989年人们首次开展脐血造血干细胞移植治疗Fanconi's贫血获得成功之后,国内外学者对脐血生物、生理、免疫学特点及临床应用进行了广泛的研究,证明脐血可以作为骨髓外造血的来源[1,2].本实验研究了脐血造血环境因素之一--贴壁层细胞形态特点及其对脐血造血细胞细胞周期和CFU-Mix形成能力的影响,以探讨体外扩增脐血造血干细胞的适宜条件,为更好开发利用脐血奠定实验基础.
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羟乙基淀粉沉淀(HES)法分离脐血造血干细胞的临床优势分析
目的:探讨羟乙基淀粉沉淀(HES)法分离脐血单个核细胞(MNCs)的效果.方法:采集脐血31份,应用羟乙基淀粉(HES)沉淀飞和密度离心(Fieoll)法分离脐血MNCs,、纯化CD3+细胞、CD14+细胞、CD34+细胞,以台盼蓝拒染法检测细胞活力.结果:HES法MNCs回收率、CFU-GM计数高于Ficoll法(85.29±3.79 VS 47.06±4.61,t=35.67,P＜0.05;67.31±11.57/1× 105 MNCs VS28.54±6.39/1× 105 MNCs,t=16.33,P＜0.05);HES法分离的MNCs中CD3+、CD14+、CD34+细胞数均高于Ficoll法(t=5.76,t=2.51,t=6.67,P＜0.05).结论:HES法分离MNCs可获得较好的回收率,是人脐血干细胞理想的分离方法.
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小儿急性淋巴细胞性白血病微小残留病免疫治疗的初步研究
目的:研究利用体外培养的激活脐血造血干细胞(activat ed cord blood stem cell, ACBSC),对急性淋巴细胞性白血病(ALL)患儿微小残留病(MRD) 进行免疫治疗的疗效.方法:无菌枸橼酸(ACD)抗凝脐血收集,经Percoll单个核细胞分离与植物血凝素(PHA)培养,采用桥联免疫组化(APAAP)方法进行PHA激活前后CD3、CD4、CD8抗原测定 ;应用双抗体夹心ELISA法进行肿瘤坏死因子(TNF-α)检测;利用PCR方法对克隆性重排的T 细胞受体(TCR)基因进行测定,检查外周血中ALL MRD.结果:①脐血单个核细胞以一定浓度PHA(20 mg/L)培养激活后,其中表达C D3、CD4、CD8抗原的淋巴细胞数增高.②未经PHA激活的单个核细胞TNF-α分泌呈一过性, 72 h后检测＜10 pg/ml;经PHA激活48 h后,分泌维持在一个较高水平,达600 pg/ml.③6 例ALL患儿输注前骨髓和外周血中MRD测定全部阳性,4例经多次输注,半年后MRD检测为阴性,骨髓中MRD明显减少,其余2例骨髓和外周血中MRD检测均为阴性.结论:ACBSC能够分泌抗肿瘤细胞因子及可能具有细胞毒T淋巴细胞(CTL)样作用 ;可望通过利用脐血免疫治疗方法,对小儿ALL的MRD进行彻底清除;利用ACBSC移植 ,可能是治疗小儿ALL MRD安全有效的免疫治疗方法.
关键词： 脐血造血干细胞 急性淋巴细胞性白血病 微小残留病 免 疫治疗 -
无血清培养条件下脐血造血干细胞的体外扩增研究
我们用自行研制的无血清培养体系和早期作用生长因子的组合,在排除血清的干扰、以及异源血清带来的免疫反应和血源性传播性疾病的情况下,研究了脐血有核细胞和CD34阳性细胞的体外扩增,现报道如下.
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脐血造血干细胞移植治疗帕金森病5例综合护理干预
目的：探讨综合护理干预对脐血造血干细胞移植治疗帕金森病（PD）的作用。方法：对5例 PD 患者采用脐血造血干细胞移植治疗，整个过程护士要密切配合医生完成相关检查、移植和移植后支持治疗，给患者提供全方位的护理，如心理护理、并发症的预防、观察护理，健康教育等。结果：采用脐血造血干细胞治疗5例 PD，患者面部表情、吞咽功能、肌张力等症状得到改善，无并发症发生，达到治疗效果。结论：综合护理干预对保证 PD 患者脐血造血干细胞移植成功、治疗效果满意、改善患者生活质量起着重要作用。
