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1-02 塞替派诱发永生化人支气管上皮细胞的恶性转化*
目的研究塞替派对人类上皮细胞的致癌转化效应.方法利用永生化人支气管上皮细胞(BEAS-2B)为基本细胞模型,首次进行了塞替派诱导BEAS-2B细胞的恶性转化实验;平行于细胞的转化进程研究了塞替派转化细胞(BEAS-TE)的增殖动力学、细胞周期和锚着独立生长能力等转化表型特征.结果经传代和软琼脂培养基筛选BEAS-TE已具有较为稳定的转化表型和细胞生物学特性,可能是具有较强裸鼠致瘤性的恶性转化细胞.结论塞替派对人支气管上皮细胞具有较强的恶性转化效应.
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1-04 反式BPDE诱导人支气管上皮细胞恶性转化
目的探索苯并(a)芘代谢物反式BPDE诱导人支气管上皮细胞16HBE转化的理想实验方案,构建恶性转化的细胞模型,为后期进一步研究其致癌分子机制提供理想的材料.方法细胞存活率试验及克隆形成率试验确定诱导的剂量,以不同剂量反式BPDE 1次或多次处理细胞,观察培养的不同阶段转化灶出现情况,用软琼脂培养鉴定其锚着依存性生长的恶性特征,比较各组转化细胞的集落形成率.结果以0.1、0.5、1.0、2.0 μmol/L的剂量,对细胞多次间断染毒,传代15次,是反式BPDE诱导16HBE细胞恶性转化的理想方案.其集落形成率分别为2.0‰o、5.5‰、7.0‰、10.5‰,剂量-反应关系呈现良好的直线相关,r=0.974 1.结论反式BPDE能诱导人支气管上皮细胞16HBE转化,构建理想的恶性转化的细胞模型.
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1-01 c-Ha-rasV12G基因转染细胞系促癌剂检测模型
目的建立促癌剂检测模型.方法采用电穿孔的方法,将突变的c-Ha-rasV12G基因转入人胚肺成纤维细胞WI-38及人支气管上皮细胞BEAS-2B中,将获得的G418抗性(G418r)单克隆细胞株进行DNA-DOT-Bloting及RT-PCR分析后,进一步用促癌剂佛波醇酯(PMA)处理,并选用克隆形成率(CFE)、锚着独立性生长(AIG)、血清抗性及裸鼠成瘤性等表型改变对受试细胞进行了恶性程度检测.结果 c-Ha-rasV12G基因使细胞对促癌剂的促癌敏感性增强,其中,对于WI-38G418r细胞,当PMA剂量分别为0、3.125×10-5、6.25×10-5、1.25 × 10-4、2.5×10-4及0.5×10-3mol/L时,其在含体积分数为1%FBS的1640培养基中的克隆形成率分别为7、8、11、12、15及14/200 cells,在含体积分数为10%FBS的培养基中分别为76、92、106、109、127及173/200 cells,在质量浓度为0.33%的琼脂中为47、61、70、69、80及97/1 000 cells.选取0.5×10-3 mol/L剂量组处理的G418r细胞进行裸鼠成瘤性实验,结果阳性.对照非基因转染细胞,用0.5×10-3 mol/LPMA处理后,在3种培养基中相应的克隆形成情况为3、33/200 cells,0/1 000 cells,裸鼠皮下注射部位无肿瘤生长.PMA以0、2.0×10-5、1.0×10-4、5.0×10-4、1.0×10-3及1.6×10-3 mol/L分别作用24 h,结果1.0×10-4 mol/L剂量作用使BEAS-2B G418r细胞获得了高的血清抗性及CEF,表现为在含体积分数为0.8%、0%FBS的LHC-8培养基及软琼脂中的CEF分别为190%、150%及75%(对照非基因转染细胞在不含PMA及FBS的LHC-8中CEF计为100%),对照细胞在含体积分数为0.8%FBS的培养基及软琼脂中不能生长,随着PMA处理剂量的增加,其CFE逐渐降低.结论 c-Ha-rasV12G基因可使上皮细胞BEAS-2B获得对PMA的促癌作用敏感性,其中当PMA剂量≤1.0×10-4mol/L时,可发挥促癌作用,大于该剂量则有促分化作用;上皮细胞发生恶性转化的标志之一是细胞对FBS、PMA等促分化剂的促细胞分化抗性增强.
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1-05 人支气管上皮细胞对致癌物NNK的代谢
的 4-甲基硝基胺、1-(3-吡啶)、1-丁酮(NNK)是存在于烟草和烟雾中的具有潜在致肺癌作用的化合物之一,且NNK的致癌性与机体的代谢过程有关.该实验观察原代人支气管上皮细胞(HBE cells)对致癌物NNK的代谢作用.方法以10和150 μmol/L 2种浓度的[5-3H]NNK处理HBE细胞,在37℃、5%CO2条件下培养1~24 h.从5 min到24 h定时取出一定量培养液,在带有放射性检测器的高效液相色谱仪上分析其各种代谢产物的含量.结果培养1 h后约有质量分数为10%的NNK被HBE细胞代谢,而培养24 h后约有50%的NNK被代谢.主要的代谢产物为NNAL,培养1 h和24 h后分别占全部代谢产物的40%~50%和80%~90%.其他代谢产物为keto aldehyde、hydroxy acid、keto alco-hol、keto acid和NNAL-N-oxide.结论人支气管上皮细胞对致癌物NNK有直接的代谢作用,因而可能在NNK导致的肺癌发生过程中具有重要意义.
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齐多夫定对原代大鼠肝细胞的毒性评价/人支气管上皮细胞5-脂氧合酶的表达与联苯胺的活化及细胞毒性/肾上腺StAR/P450scc介导乙醇孕期暴露所致的IUGR发生机制/四氯化碳肝脏毒性机制的研究进展
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不容忽视的肺癌
导致肺癌的危险因素众所周知,吸烟是导致肺癌的主要危险因素,吸烟过程中可产生40多种致癌物质,其中与肺癌关系密切的主要有多环芳烃类化合物、苯、砷、丙烯、烟碱(尼古丁)、一氧化碳、和烟焦油等,这些致癌物质可通过不同的机制,导致支气管上皮细胞DNA的损害,某些癌基因的激活,抑癌基因的突变和失活.吸烟的定义是每天吸1支以上,连续吸烟超过6个月.
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白细胞介素18与1型糖尿病
白细胞介素18(IL-18),以往也称干扰素γ(IFN-γ)诱导因子(IGIF),是一个新近克隆成功和命名的早期致炎性细胞因子,其分子量为18~19kD[1,2].本文拟对IL-18的分子结构、生物合成、受体特性以及生物学效应等方面进行阐述,并重点讨论IL-18在1型糖尿病发病机理中的作用.一、IL-18的分子结构及其特征小鼠IL-18基因编码了由192个氨基酸组成的无生物活性的单链前体多肽即IL-18原,其中N末端含有35个氨基酸组成的非信号序列.IL-18具有3个半胱氨酸残基[1].人IL-18原由193个氨基酸组成,与小鼠IL-18原具有65%的同源性[2].人和小鼠IL-18之间的生物学效应存在种属特异性[3].通过比较氨基酸序列及其构象,发现IL-18与IL-1具有相似的构象特征,但IL-18在IL-1样构象中有三个关键性氨基酸与IL-1不同[3].二、IL-18的生物合成及其调控IL-18基因位于小鼠第9对染色体[4],由2.6万个以上的碱基对组成,含有7个外显子[5].外显子1和外显子2是5'非编码外显子.启动子1位于外显子1上游,主要控制可诱导性转录,而位于外显子2上游的启动子2可控制基础性(体质性)转录[5].另有研究表明,两个启动子均有脂多糖(LPS)可诱导性活性,只是启动子1略高于启动子2,而两个启动子的基础活性大致相等.提示两者均参与调控体质性和可诱导性的转录过程[6].现已证实,IL-18可以表达在免疫系统的巨噬细胞、树突状细胞和T淋巴细胞[1,5,6]以及非免疫细胞,如皮肤角朊细胞[7]、成骨细胞[8]、关节软骨细胞[9]、大脑星形胶质细胞[10]、垂体和肾上腺皮质细胞[11]、肠上皮细胞[12]、支气管上皮细胞和成纤维细胞[5].本文作者首次发现胰岛β细胞也可表达IL-18[13].这与IL-12仅在有限的细胞中表达[5]有显著的区别,提示IL-18比IL-12具有更广泛的细胞来源和相应的生物学效应.
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支气管哮喘患者血浆热应激蛋白60、70抗体表达及与发病的关系
当机体接触高温或其他应激因素如感染、缺氧、生理紧张等时可大量合成热应激蛋白(Hsps),而其中的一些应激因素常见于支气管哮喘(简称哮喘)的发生中.哮喘的发生与外界环境刺激和遗传因素有关,外界环境的刺激可诱导支气管上皮细胞Hsps(主要是Hsp60和 Hsp70)的表达,而当机体由于病毒或支原体等感染导致免疫异常时,机体可产生针对Hsps的抗体[1].但Hsps抗体在哮喘患者中是否存在,以及它们与哮喘发病的关系,目前国内、外尚少见报道.我们的研究拟探讨Hsp60、70抗体在哮喘发病中的作用.
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胆红素对烟雾暴露大鼠支气管上皮细胞结构和基质金属蛋白酶9表达的影响
支气管上皮细胞长期受烟雾中的氧化剂等有害物质损伤时,可产生气道及其周围组织的慢性炎症,导致气道结构改变,表现之一为细胞外基质(ECM)结构重塑.基质金属蛋白酶的表达失衡,与ECM代谢紊乱密切相关.近年来发现胆红素既是体内有潜在毒性的代谢产物,也是一种有效的抗氧化剂[1],对某些组织具有保护作用[2,3].我们在吸烟大鼠肺气肿模型建立过程中进行胆红素干预,观察胆红素对吸烟大鼠支气管黏膜的保护作用,以及对支气管上皮细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响.
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红霉素对支气管上皮细胞转录因子核因子κB、激活蛋白1活性的影响
长期小剂量应用大环内酯类抗生素在泛性细支气管炎(DPB)、囊性肺纤维化、支气管哮喘等慢性肺部炎性疾病中疗效良好[1,2],为探讨其作用机制,本实验观察了红霉素(EM)对人支气管上皮细胞核因子κB(NF-κB)、激活蛋白1(AP-1)转录活性的影响.
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9-顺维A酸对肺鳞癌细胞周期及细胞分化的生物学作用
随着对维A酸与肺癌关系的研究发现:全反式维A酸(ATRA)虽能抑制支气管上皮细胞的生长和鳞状分化[1],但这种作用在肺癌的形成过程中消失,且在体外实验的大多数人肺癌细胞株对ATRA有显著的抗性作用[2,3].近已证实,ATRA的一种立体异构体--9-顺维A酸(9-cis-RA)能与维A酸受体(RARs)和维A类X受体(RXRs)结合而发挥其生物学作用,故9-cis-RA倍受研究者的重视[4].我们的研究旨在观察9-cis-RA对肺鳞癌细胞株的细胞周期及分化作用的影响.
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氡染毒大鼠气管-支气管上皮细胞的基因差异表达
氡(Radon)及其子体的致癌效应已引起广泛的关注,被国际癌症研究机构列入室内重要的致癌物质.Meta分析结果提示,氡暴露使矿工发生肺癌的危险性增高[1].本研究通过抑制性消减杂交(supprssion subtractive hybridization,SSH)方法,筛选氡染毒大鼠模型的气管-支气管上皮细胞差异表达基因,为探讨氡及其子体致肺癌的早期分子机制提供依据.
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中华医学会第六次全国呼吸系病学术会议纪要
中华医学会第六次全国呼吸系病学术会议于2000年10月20~24日在南京隆重召开。来自全国31个省、市、自治区的1 000余名代表出席了会议,大会收到论文1 800余篇,录取1 648篇。会议交流形式多样,内容丰富,既有大会专题报告和专题研究交流,又有分组讨论、壁报展示;会议评选出优秀青年论文10篇,优秀壁报12篇。会议还邀请来自美国、英国、日本、南非等国外学者作专题演讲,国内外专家就呼吸病各领域新进展作了精辟论述。这次大会既展现了我国在呼吸系病科研和临床方面取得的长足进步,又将对将来的发展起到积极的推动作用。现将大会主要学术内容简介如下。 一、支气管哮喘 哮喘的研究仍是国内各单位研究的热点。在本次大会上进行了专题报告,主要内容有:(1)从流行病学角度介绍了近年来哮喘发病率增加的原因,介绍了哮喘发病的“卫生学说”,即小儿接触感染原或呼吸道感染越少,其变态反应疾病发生率越高。(2)哮喘的发病机理方面,认为Th1细胞和Th2细胞两种辅助性T细胞亚型的失衡是哮喘发病的重要机制,活化Th1功能有可能为哮喘的防治提供新途径;目前还认为,除嗜酸性粒细胞和肥大细胞活化外,支气管上皮细胞的剥脱和活化以及继发的气道结构的重塑也是哮喘发病的重要机制之一。(3)评价了反映气道炎症的多项指标(如呼出气一氧化氮、痰液中细胞因子水平)的临床应用价值,认为这些指标与哮喘的发作和严重性有一定关系,但能否成为哮喘气道炎症的特异性指标尚有待于进一步证实。(4)介绍了哮喘药物治疗研究的新方向,如:发展新型高效的抗炎药物、将抗炎治疗定位于炎症反应的起始环节——抗原提呈过程、调节Th1细胞和Th2细胞之间的平衡、采取多种手段抑制细胞因子及炎症介质的活性、干扰炎症细胞的粘附和抑制气道重塑、开发新型的支气管扩张剂、免疫治疗(特异性抗原脱敏、DNA免疫疗法)及中医治疗等。大会特别强调了在哮喘的防治过程中应重视中国特色的研究,尤其是中医中药。呼吁在我国应开展全国性的大协作,发挥各地区的特长,克服低水平的重复,使哮喘研究的各个方面尽快与国际接轨。
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编后语
本期刊登学术论著16篇,文献综述2篇.其中,邬堂春等的"跳伞后空降兵血浆中的生化变化"一文报道了对空降兵每天跳伞1次,连续3天训练后血液生化变化的初步观察与分析,实验中,应激反应指标测得较全,为研究跳伞的应激反应积累了宝贵的资料.重离子辐射的医学生物学效应研究是目前国际上空间辐射医学研究的热点,但我国起步较晚,袁雄等的"重离子辐射致人支气管上皮细胞的失活效应"一文的内容在国内属较新研究结果,具有一定学术价值,定会对该领域的研究工作产生促进作用.李金国等利用返回式卫星进行了绿菜花干种子的飞行实验,观察了发芽率、植株的生长势、花粉细胞的细胞学变化,结果显示,利用空间条件可诱导植物产生变异,改变其遗传性状,为植物诱变育种的研究提供了新的方法.
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肺癌猛如虎——写在世界癌症日前夕
世界卫生组织将每年的2月4日定名为"世界癌症日".癌症是人类健康的杀手,其中肺癌更是发生率高、死亡率高.那么,肺癌目前在我国的发病情况究竟如何?为什么肺癌在早期难于发现?肺癌的致病因素又有哪些?带着上述这些问题,记者日前采访了中国医学科学院肿瘤医院胸外科主任医师高树庚.吸烟是诱发肺癌的主要因素高树庚说,早在20世纪50年代就已有资料明确显示,吸烟是诱发肺癌的首要因素.香烟里含有几十种致癌物质,长期刺激支气管粘膜,使支气管上皮细胞、肺泡上皮细胞异形增生导致癌变.
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浅谈支气管哮喘的治疗和体会
支气管哮喘是由多种细胞特别是肥大细胞、嗜酸性粒细胞、T淋巴细胞,、嗜中性粒细胞、气管上皮细胞等参与的慢性气道炎症.在易感者中此种炎症可引起反复发作的喘息、气促、胸闷和(或)咳嗽等症状,多在夜间和(或)凌晨发生,多有两肺呼气相哮鸣音,具有气道高反应性和气流受限可逆性.其诱发因素多种多样,而发病机制则相当复杂.
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白细胞介素-4,-13促进人肺成纤维细胞ADAM33基因的表达
研究发现ADAM33基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms, SNPs)与哮喘的发生以及气道高反应性有显著相关[1].ADAM33基因主要在肺的平滑肌细胞、成肌纤维细胞和成纤维细胞表达,而在上皮细胞、T细胞或免疫细胞中表达较少.由于ADAM33基因在肺间充质细胞的选择性表达,因此,ADAM33基因可能与小气道重塑有关.IL-4和IL-13都是Th2型细胞因子,在哮喘的慢性气道炎症中起重要作用.近研究发现IL-4和IL-13可以通过增加支气管上皮细胞对转化生长因子-β的释放,从而促进气道重塑[2].因此,我们研究IL-4和IL-13对人肺成纤维细胞ADAM33基因表达的影响,探讨ADAM33基因表达异常在哮喘气道重塑中的作用.
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激活蛋白-1在哮喘患儿支气管上皮细胞的表达
近年的研究发现,哮喘与支气管上皮细胞表达多种炎性蛋白有关[1],但导致炎性蛋白合成的机制不明。激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)是一种转录因子,体外研究发现,活化后的AP-1可调控上述炎性蛋白的合成,因此推测在哮喘患者体内,导致炎性蛋白合成的原因可能与AP-1活化有关。我们试图通过观察AP-1的两个组成亚单位c-fos和c-jun在哮喘患儿支气管上皮细胞的表达,了解AP-1是否活化,探讨其在哮喘中的作用。 一、对象与方法 1.对象:(1)哮喘组:选取1998年1月至1998年10月在北京市儿童医院住院的哮喘患儿9例,其中2例为重度发作,6例为中度发作,1例为极重度发作,既往未用激素治疗。在病情缓解至少10 d后,经家长及本人同意做纤维支气管镜检查。哮喘的诊断依据标准[2]。(2)对照组:共6例,其中3例反复下呼吸道感染(均处于发作间歇期),为除外纤毛运动不良而行纤维支气管镜检查者;1例渗出性红斑,怀疑合并肺纤维化而行纤维支气管镜检查者;2例为先天性肺囊肿行肺切除术的正常支气管肺组织。
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Smad7基因沉默对细胞增殖的影响
TGF-β是一种多功能的细胞因子,可调节细胞的分化、增殖和凋亡.它对多种上皮细胞尤其是支气管上皮细胞的生长、增殖有很强的抑制作用[1].Smad7作为TGF-β信号转导通路的抑制分子,可以抑制TGF-β信号在胞浆内的传导[2].我们以永生化人支气管上皮细胞BEP2D,及恶性转化的BERP35T2细胞为基础所做的研究表明:Smad7基因的表达随细胞恶性度增高而增高[3],Smad7表达高的细胞增殖能力强,TGF-β对该细胞介导的生长抑制效应弱,说明Smad7表达增高同BEP2D细胞恶性转化有关[4].国外研究还表明,Smad7参与TGF-β1对前列腺癌细胞凋亡的调控[5].为了进一步调查在人支气管上皮细胞恶性转化过程中,Smad7所起的作用,我们通过RNAi技术使Smad7基因沉默后,检测细胞的增殖能力是否改变,TGF-β1对Smad7基因沉默细胞的作用有无相应变化及细胞的凋亡率有无变化.
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食物过敏与慢性咳嗽的研究
食物过敏(food allergy)是儿童期常见病。美国近的一项流行病学发现,5岁以下儿童食物过敏患病率5%,青少年和成人患病率4%[1];国内有学者研究小于2岁婴幼儿患病率为5.2%,小于1岁婴儿患病率为6.1%,其中4-6个月为食物过敏的高发年龄[2]。目前为食物过敏的治疗除饮食回避尚可口服白三烯拮抗剂,越来越多的有关食物过敏的治疗,引起注意,白细胞介素10(IL-10)是Fiorentino等1989年发现的由小鼠辅助T淋巴细胞2(T h2)分泌的一种物质,可抑制辅助淋巴细胞1(Th1)细胞因子分泌。T细胞、单核巨噬细胞、B细胞、肥大细胞、树突细胞、嗜酸细胞、角质细胞、肝细胞、星状胶质细胞、垂体和下丘脑细胞、支气管上皮细胞、肿瘤坏死因子均可产生白介素10(IL-10)。