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1-02 塞替派诱发永生化人支气管上皮细胞的恶性转化*
目的研究塞替派对人类上皮细胞的致癌转化效应.方法利用永生化人支气管上皮细胞(BEAS-2B)为基本细胞模型,首次进行了塞替派诱导BEAS-2B细胞的恶性转化实验;平行于细胞的转化进程研究了塞替派转化细胞(BEAS-TE)的增殖动力学、细胞周期和锚着独立生长能力等转化表型特征.结果经传代和软琼脂培养基筛选BEAS-TE已具有较为稳定的转化表型和细胞生物学特性,可能是具有较强裸鼠致瘤性的恶性转化细胞.结论塞替派对人支气管上皮细胞具有较强的恶性转化效应.
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Ⅲ型登革病毒D9964株在人胚肺二倍体细胞KMB17上适应株选育纯化及其增殖动力学研究
选育出Ⅲ型登革病毒中国株在人胚肺二倍体细胞KMB17上的适应株并对其生物学特性和增殖动力学进行研究,为研究登革病毒减毒活疫苗奠定基础.Ⅲ型登革病毒中国株D9964经RT-PCR鉴定型别正确后,进行毒种扩增和滴度测定;以4.0 MOI接种KMB17细胞,反复传代直至病毒能在细胞中适应和增殖;连续传10代,选育出KMB17细胞适应株,经三轮噬斑纯化筛选适应株,微量滴定法检测10代病毒培养液的感染性滴度;免疫荧光法检测纯化病毒株的抗原性;将病毒纯化株接种KMB17细胞,取第3~7 d细胞提取RNA,以Real-time PCR检测病毒适应株在细胞中的增殖动态.结果显示,经适应性培养后Ⅲ型登革病毒中国株D9964能在KMB17细胞中稳定增殖,经噬斑纯化获得了高纯度的细胞适应株,病毒保持了原始毒株良好的抗原性;增殖动力学研究显示第5~6 d为病毒在细胞内的增殖高峰期.
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介绍WHO(2000)神经系统肿瘤新分类
新分类涵盖了各种组织起源的神经系统肿瘤以及各自的病理类型和亚型,既有肿瘤的组织学分型又有肿瘤恶性度的分级.新分类丰富了神经影像学、肿瘤遗传学、增殖动力学、免疫组化和分子生物学的内容,并配备随访资料和影响患者预后因素的分析.新分类突出了低级别、分化较好的星形细胞瘤(WHOⅡ级)弥漫浸润生长的特点.在新分类操作中,必须密切联系临床、神经影像学和病理检查,培养一套正确的诊断思路.规范的病理报告应包括肿瘤的解剖部位、肿瘤的生长形式、组织学分型和恶性度分级.病理诊断以常规的HE染色为基础,配合特殊染色和免疫组化及标记肿瘤细胞的增殖活性(Ki-67或PCNA的LI).
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BrdU单克隆抗体的制备及鉴定
DNA的5-溴,2'-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记法近年来作为一种新的、简便、敏感特异的检测方法,在肿瘤生物学、遗传学、分子生物学特别是细胞增殖动力学等领域得到广泛应用,在一定程度推动了相关学科的发展.为了满足广泛开展BrdU标记DNA检测对BrdU特异性单抗的需要,我们制备了一株产生BrdU单抗的杂交瘤细胞株.本文对此细胞株制备过程及单抗鉴定情况作了简单叙述.
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肝胆管结石合并肝胆管癌的病理改变及Ki-67抗原的表达
近年来,随着肝胆管结石合并肝胆管癌病例的增多,两者在病因学上的关系日益受到重视。 研究[1-3]表明,肝胆管结石与肝胆管癌之间有密切的内在联系。本组通过研究肝 胆管结石合并肝胆管癌的病理形态学特点及细胞增殖动力学的改变(Ki-67抗原表达),探 讨肝胆管癌发生与肝胆管结石的关系。材料与方法 1.材料:本组34例肝胆管结石并肝胆管癌,男女之比为1∶1.13,平均年龄50±8岁,平均 患结石病史13±6年;其中23例有胆管手术史,32例有反复胆管感染病史,仅2例无明显临床 表现。肿瘤部位:左肝24例,右肝6例,左右肝均累及4例;组织学类型:管状腺癌21例,乳 头状腺癌8例,粘液腺癌5例;分化程度:高分化22例,中分化10例,低分化2例。50例肝胆 管结石症,平均年龄51±9岁,平均病史8±6年;15例非肝胆疾病正常肝内胆管(取材包括肝 叶、段及小胆管)。所有标本均取自我院外科1989~1999年手术切除的肝组织,经常规固 定、石蜡包埋、4?μm连续切片备染。
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补虚散结胶囊对小鼠Lewis肺癌细胞增殖动力学的影响
目的:观察补虚散结胶囊对肺癌瘤株Lewis肺癌细胞增殖动力学的影响,探讨补虚散结胶囊治疗肺癌疗效机理.方法:用血清药理学方法进行增效试验,MTT法检测A590值,以每组测得光密度平均值作为药物效应值.结果:补虚散结胶囊配合替加氟组Lewis肺癌细胞存活率低于单纯替加氟组.结论:补虚散结胶囊配合化疗疗效满意,其疗效机理与补虚散结胶囊抑制肿瘤细胞增殖有关.
关键词: 补虚散结胶囊 小鼠Lewis肺癌瘤株 增殖动力学 -
子宫内膜癌39例p16蛋白细胞周期素D1 DNA倍体及S期细胞比率的检测及其临床意义
子宫内膜癌是妇科常见肿瘤,其细胞发病率逐年上升引人注目,随着人们对肿瘤增殖动力学和周期调控的认识不断提高,p16蛋白和细胞周期素D1(cyclin D1)被认为是两种重要的细胞周期调节因子,其参与肿瘤细胞的增殖调控;而DNA结构和功能的异常是肿瘤细胞增殖的分子基础.本研究采用免疫组化和流式细胞术(FCM)测定子宫内膜癌p16蛋白、cyclin D1、DNA倍体和S期细胞比率(SPF)四项与肿瘤细胞增殖周期密切相关的指标,目的在于为临床监测病情、判断预后提供可靠的依据.
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柯萨奇病毒A组16型G20分离株在不同培养条件下的增殖动力学
目的 探讨柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CA16)G20分离株在不同培养条件下的增殖动力学.方法 常规培养Vero和人二倍体KMB-17细胞,待细胞长至单层,接种G20株病毒,进行病毒蚀斑试验,以0.1MOI的感染复数分别感染此两种细胞,置不同温度和pH维持液中进行培养,每2h收样1次至第24 h,以48 h收样作为对照样,微量滴定法检测病毒滴度,并绘制增殖动力学曲线.结果 G20株病毒在Vero及KMB- 17细胞中传代适应后,均可导致细胞病变.G20株病毒在此两种细胞中培养,pH6.0、pH6.5时,不同培养温度下,病毒基本不增殖;pH7.5与pH7.0的病毒增殖基本一致,增殖速度随温度呈现37℃> 35℃> 33℃的趋势;在33℃~ 37℃、pH7.0~8.0时,病毒均有不同程度的增殖;在41℃、各pH条件下,病毒增殖均明显受到限制.结论 病毒在此两种细胞中,37℃,pH7.5培养条件下,增殖速度及滴度均较理想.
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鼻内翻性乳头状瘤及鼻腔鳞状细胞癌中PCNA的检测
PCNA(增殖细胞核抗原)作为细胞增殖力学的一个重要参数,在肿瘤研究中已广泛应用,用免疫组化法检测PCNA是一种简便、重复性好,效率高的评价细胞增殖动力学的方法.本文探讨了鼻内翻性乳头状瘤(IP)及鼻腔鳞状细胞癌(SCC)中PCNA的表达.
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柯萨奇病毒 A16在恒河猴外周血单个核细胞中的增殖研究
柯萨奇病毒A16(CA16)感染灵长类动物模型显示该病毒在猴体内可形成明显的病毒血症期,在此基础上,本研究进一步分析病毒血症形成与CA16在外周血单个核细胞(PBMC )不同组分中增殖的关系。首先用CA16感染恒河猴,检测病毒在PBMC组分CD4+、CD8+、CD20+、CD11c+、CD16+和CD14+细胞中的增殖情况和感染动力学,发现病毒仅在部分CD14+细胞中有增殖表现。然后通过刺激CD14+细胞产生一定量的树突细胞(DC),用CA16感染DC ,发现 CA16能在DC中形成具有动力学意义的增殖过程,增殖峰值出现在感染后12~36 h。这些结果可能为CA16感染发病机制提供重要信息。
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P53和PCNA蛋白在大肠癌病人中表达的意义
p53抑癌基因的突变以及由此导致的细胞异常增殖和分化,不仅与大肠癌的发生、发展有关,且与其淋巴结转移也密切相关,对判断肿瘤的恶性程度和预后有极重要参考价值.同时,检测增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白在大肠肿瘤中的含量可反映细胞增殖状况,现已成为检测肿瘤细胞增殖动力学的可靠指标,并与肿瘤的浸润、转移和复发等生物学特性有关.本研究探讨P53与PCNA蛋白表达在大肠肿瘤发生、发展中的临床意义.
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大肠腺瘤增殖核抗原表达与腺瘤复发的关系
大肠腺瘤已被公认为癌前病变,并且在内镜下或手术治疗后的病例中,仍有较高的复发率.判断其是否易复发,对指导进一步治疗很有意义,但预测复发的方法较少,特别是用有效的生物学标记来预测病变的发展.我们通过检测大肠腺瘤增殖核抗原(PCNA)增殖指数,结合随访结果,了解细胞增殖动力学与其复发的关系.
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大黄素和大黄酸对角质形成细胞体外培养细胞周期的影响
研究大黄蒽醌衍生物对细胞增殖动力学的影响已有文献报告[1],但关于大黄蒽醌衍生物对细胞周期的影响,尚未见报告.本文通过体外培养细胞的方法,采用流式细胞分析仪检测细胞周期变化,观察大黄蒽醌衍生物(大黄素和大黄酸)对角质形成细胞株colo-16的细胞周期影响,进一步探讨大黄蒽醌衍生物的药理作用.
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银屑病患者外周血CD4+、CD8+T细胞对角质形成细胞ki67、c-myc及bcl-xL蛋白表达的影响
T细胞按表面标志及功能特征的不同可分为CD4+T细胞和CD8+T细胞,两者在银屑病发病机制中的作用不尽相同.本研究将CD4+T细胞和CD8+T细胞分别与角质形成细胞(KC)共培养,探讨了CD4+T细胞及CD8+T细胞对银屑病患者表皮增殖动力学的影响.
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白血病细胞增殖动力学两项指标的对比研究
采用\+3H-TdR掺入法研究细胞增殖动力学历史悠久,实验结果可靠。用核仁组成区银染法(AgNOR银染法)研究细胞增殖情况也已开展,两种方法是否有可比性的研究报告不多,现将我科研究的初步结果报告如下。1 材料和方法1.1 \+3H-TdR掺入法取骨髓1ml或外周血2ml,置肝素抗凝小瓶内,室温自然沉淀30min~1h,取富含白细胞的上层液体,用含10%新生小牛血清的RPMI1640培养液稀释至细胞数1 ×10\+6 /ml ,每例测3孔,取平均值。在5%CO\-2 简易培养箱内37℃培养2h,然后每孔加\+3H-TdR1uci,继续培养4h 。终止培养,立即用冷生理盐水冲洗,离心,后置闪烁杯中用双道液闪仪测cpm值。
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动态观察直肠癌旁移行粘膜p53,p21ras蛋白表达及细胞增殖动力学变化与吻合口复发的关系
目的探讨直肠癌旁移行粘膜的性质及其与术后吻合口癌肿复发的关系。方法应用粘液组织化学、免疫组织化学技术和图像细胞光度计(ICM)对67例直肠癌手术切除标本及其近、远端肠管粘膜及33例术后1年、31例术后2年以上直肠粘膜病理活检标本(吻合口至其下3 cm)同步检测其p21ras、p53蛋白表达率,增殖细胞核抗原(PCNA)指数及DNA含量和倍体变化。结果 (1)高铁二胺阿辛蓝(HID AB,pH 2.5)染色:近切端中无Ⅱ级以上唾液酸粘蛋白反应,癌组织中Ⅱ级以上唾液酸粘蛋白反应占53.7%,远切端TM阳性率为14.9%,高于近切端(P<0.01),术后复查TM阳性率与远切端相比增高(1年为39.4%,2年以上为32.3%,P<0.001)。(2)p21ras蛋白表达:近切端粘膜无p21ras蛋白表达,癌组织为61.2%,远切端(13.4%)高于近切端(P<0.01),但在远切端正常粘膜和TM中表达无差异(P>0.05),术后复查与远切端相比有下降趋势(术后1年9.1%,2年以上3.2%,P<0.05)。(3)p53蛋白表达:近切端粘膜无p53蛋白表达,癌组织为59.7%,远切端(7.5%)高于近切端,但统计学意义不显著(P>0.05),术后复查与远切端相比阳性率降低,1年为6.1%,2年以上为0(0/31),p53蛋白表达在远切端正常粘膜和TM中差异无显著性(P>0.05)。(4)PCNA指数:癌组织PCNA指数显著升高(与近切端相比,P<0.001),远切端PCNA指数高于近切端(P<0.01),但在其正常粘膜和TM中差异无显著性(P>0.05),术后1年及2年以上复查病例PCNA指数与远切端相比降低(P<0.01)。(5)DNA质量和倍体:癌组织DNA平均质量显著增高,异倍体增多(与近切端比,P<0.01),远切端DNA平均质量也增高(与近切端比,P<0.05),但在其正常粘膜和TM中差异无显著性(P>0.05),术后1年及2年以上复查病例DNA质量与远切端相比降低(P<0.05). 结论直肠癌旁移行粘膜是一种继发的非特异性改变,而不是原发性癌前病变,其存在与否和直肠癌根治术后吻合口癌肿复发无关。
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生长激素对大鼠重症肝炎肝细胞增殖动力学的影响
目的探讨生长激素对重症肝炎肝细胞增殖动力学的影响.方法用四氯化碳诱导重症肝炎大鼠动物模型共120只,随机分成2组:生理盐水对照组、生长激素(GH)实验组,每组各60只.观察两组大鼠肝功能变化和细胞增殖情况.结果从第3天起,GH组ALT、AST、TBil均下降,与对照组相比明显下降(P<0.05);而GH组前白蛋白明显升高,与对照组相比有显著差异(P<0.05);GH组SPF(S期分数)较对照组明显升高(P<0.05):CyclinD1表达,随时间的延长均有增高趋势,GH组Cyclin D1蛋白表达阳性率较对照组明显升高(P<0.05).结论在重症肝炎条件下,生长激素具有维持肝细胞膜的完整性、促进蛋白合成、促进细胞增殖作用,可能为重症肝炎的内科治疗带来新的方法.
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区域性缺血对裸小鼠胰腺移植癌抑制作用的研究
目的:为缺血疗法在胰腺癌的临床应用提供基础研究资料.方法:在建立人胰腺癌细胞株裸小鼠胰腺原位移植瘤模型的基础上,结扎荷瘤裸鼠胃十二指肠动脉、胰十二指肠下动脉及背胰动脉诱导胰腺右叶区域性缺血,观察缺血对裸小鼠胰腺移植癌群体增殖动力学及细胞周期动力学的影响.结果:缺血组移植癌生长缓慢,倍增时间延长,移植癌体积、癌细胞增殖指数及蛋白质含量术后3、7、14 d均显著低于对照组(P<0.01).结论:区域性缺血能有效地抑制裸小鼠胰腺移植癌的生长,并抑制癌细胞DNA及蛋白质的合成.
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C6/SD大鼠胶质瘤模型的建立及C6胶质瘤细胞增殖动力学研究
目的建立C6/SD大鼠脑胶质瘤模型,并在其基础上研究C6胶质瘤细胞的增殖动力学.方法应用免疫组化、HE染色和流式细胞仪测定,观察C6胶质瘤细胞的增殖动力学指标,并进行相关性分析.结果肿瘤细胞接种2周后,肿瘤模型建立,HE染色见肿瘤细胞增殖活跃,各项指标显示该肿瘤增殖活性较强.
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竹红菌甲素对人Hce-8693盲肠癌细胞增殖及细胞凋亡的影响
采用流式细胞技术研究了竹红菌甲素(HA)对人Hce-8693盲肠癌细胞周期、增殖活性的影响及在细胞凋亡中的诱导作用,结果:HA主要使细胞阻断于G1期,G1期峰前出现典型的亚二倍体凋亡峰.提示:HA具有诱导细胞凋亡及抑制肿瘤细胞增殖的作用.