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手足口病患儿的免疫学研究
通过对手足口病患儿相关文献的分析,了解手足口病患儿外周血中T淋巴细胞亚群(CD3+T、CD4+T、CD8+T)、B淋巴细胞、自然杀伤细胞、免疫球蛋白、补体等疾病过程中的变化情况,探讨其免疫功能改变,为手足口病患儿的疾病诊断、治疗提供实验室依据.
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湖北省2011年手足口病流行特征分析
目的 了解湖北省2011年手足口病(HFMD)流行特征,为制定防治措施提供依据.方法 采用描述流行病学方法,对2011年湖北省各地上报HFMD病例以及重症、死亡病例数据进行分析.结果 2011年湖北省共报告HFMD病例63 767例,发病率为111.41/10万；其中重症病例159例,死亡24例.高发年龄为6月龄～3岁儿童,发病时间呈4～7月和10～12月双流行高峰,重症和死亡病例主要发生在4～7月流行高峰.病原学检测结果为肠道病毒71型(EV71)阳性1 439例(占53.02％),科萨奇病毒A16型(CoxA16)阳性776例(占28.59％),其他肠道病毒阳性499例(占18.39％),EV71为重症和死亡病例绝对优势病原.结论 2011年湖北省HFMD疫情处于较高流行水平,应重点加强第一个流行高峰和高发地区的HFMD预防控制工作.
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中国2008-2009年手足口病报告病例流行病学特征分析
目的 了解2008-2009年中国手足口病流行时间、区域和人群分布以及病原构成.方法 利用2008-2009年疾病监测信息系统报告的手足口病例对其流行病学特征进行分析.结果 (1)2008和2009年全国报告手足口病例分别为488955例和1155525例,发病率为37.01/10万和87.01/10万,重症病例数为1165例和13810例,死亡126例和353例.(2)高、中、低纬度地区报告发病率分别为50.09/10万、68.47/10万和59.04/10万.(3)2009年中、低纬度地区12～24周为发病高峰期;高纬度地区23～35周为流行高峰期;第二个流行峰仅波及低、中纬度地区,高纬度地区不明显.(4)病例主要集中在5岁及以下儿童,占发病总数的92.23%,2岁组儿童发病率高,重症和死亡病例集中在低年龄组儿童的特点更为明显,0岁组儿童发生重症的比例和病死率高,随着年龄增加各年龄组重症比例及病死率依次降低.(5)不同类型病例病原构成存在差异.相对于普通病例,重症和死亡病例肠道病毒71型(EV71)检测阳性的危险度分别为1.82和2.11,且病原构成存在季节变化.(6)2008-2009年共发生聚集性病例疫情477起,幼托机构发生疫情为389起,占总起数的81.21%,村庄发生疫情47起,占总起数的9.81%;聚集性病例疫情发生时间主要集中在4-7月.结论 2009年中国手足口病流行强度增强.不同纬度地区流行强度不同,季节分布存在差异,5岁及以下儿童是发病主要人群,年龄越小发生重症和死亡的风险越高,EV71和柯萨奇病毒A16型为主要病原,聚集性病例高发场所为托幼机构和村庄.
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儿童肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型感染血清流行病学研究进展
手足口病由肠道病毒感染引起,以肠道病毒71型(EV-A71)和柯萨奇病毒A16型(CV-A16)为常见,患者和隐性感染者均为传染源.通过血清学调查,可以掌握人群中EV-A71和CV-A16抗体水平,以及不同年龄段人群的易感性和免疫水平动态变化.通过对EV-A71和CV-A16血清流行病学科研文献进行检索和回顾性研究,系统分析了不同年龄人群中的EV-A71和CV-A16抗体水平,探讨人群易感性、免疫水平动态变化及人群感染状况.研究发现新生儿EV-A71和CV-A16中和抗体水平与母亲密切相关,接近成年人水平;随着母传抗体的自然衰减,在1年之内会迅速下降至低水平;1～4岁时迅速升高,5岁之后将达到一个稳定水平.接种疫苗是预防手足口病感染的有效措施,现有研究提示6～12月龄为手足口病疫苗接种的佳年龄段.
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热毒宁注射液组分抗CoxA16和EV71病毒活性研究
目的:明确热毒宁注射液组分抗柯萨奇病毒A16(coxsackievirus A16,CoxA16)和肠道病毒71(enterovirus 71,EV71)病毒的活性.方法:考察热毒宁注射液1～19号组分(RND1～ 19)对非洲绿猴肾细胞(Vero)的毒性,明确半数中毒浓度(TC50);进一步利用病毒感染的Vero细胞模型研究各组分的抗病毒活性及量效关系.采用50倍半数组织培养感染量(TCID50)CoxA16和EV71病毒分别感染Vero细胞(1万个/孔),热毒宁注射液组分(15.625 ～500 mg·L-1)给药3d后,考察抗CoxA16和EV71病毒活性(n=3).活性组分(佳浓度)给药8h后,检测病毒载量.结果:热毒宁注射液各组分的Vero细胞毒性,TC50从＞1 000 mg·L-1到221 mg·L-1不等;抗病毒活性及量效关系研究表明,RDN7和RDN18具有较好的抗CoxA 16活性,半数有效浓度(EC5o)分别为460,92 mg·L-1,治疗指数(TI)分别为1.44,2.40;RDN6和RDN17具有较好的抗EV71活性,EC50分别为395,378 mg·L-1,TI分别为2.22,1.10;病毒载量研究表明,RDN7极显著降低Vero细胞中CoxA16病毒载量(P＜0.01),RDN6,RDN17极显著地降低Vero细胞中EV71病毒载量(P＜0.01),而RDN18则没有上述活性.结论:明确了热毒宁注射液组分的抗CoxA16和EV71病毒活性.
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EV71与CA16感染恒河猴CD1c+DC诱导IFN-Ⅰ产生途径及Th细胞分化相关分子的比较
目的 探究EV71与CA16对恒河猴CD1c+DC的感染情况,与两者感染后Ⅰ型干扰素(typeⅠinterferon,IFN-Ⅰ)产生通路中及辅助性T细胞(T helper cells,Th)分化过程中相关基因的改变.方法 本文通过采用免疫荧光、qRT-PCR、噬斑实验、流式细胞术等方法比较了EV71与CA16感染恒河猴CD1c+DC在不同的时间点内IFN-Ⅰ的产生,病毒载量、病毒滴度、病毒感染量及Th细胞分化相关的转录因子及细胞因子的表达情况.结果 研究结果显示:EV71与CA16均能感染CD1c+DC;EV71感染CD1c+DC后IFN-Ⅰ产生显著性下降,病毒载量、病毒滴度与病毒感染量上升,Th2与滤泡辅助性T细胞(Tfh)相关的转录因子及细胞因子表达显著性上升;而CA16感染CD1c+DC后IFN-Ⅰ产生显著性上升,病毒载量、病毒滴度与病毒感染量下降,Th1与调节性T细胞(Treg)相关的转录因子及细胞因子表达显著性上升.结论 这些结果提示EV71与CA16感染CD1c+DC后可能会造成固有免疫应答与适应性免疫应答显著性差异,这些差异可能与两者诱发的差异性临床症状及病理形成相关.
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手足口病病原体实时荧光RT-PCR反应体系的建立与临床应用
目的 建立一种快速、准确、特异件高的方法 检测手足口病病原体.方法 根据引起手足口病常见致病原肠道病毒71(EV71)、柯萨奇病毒A16(CA16)及肠道病毒(EV),设计相应的引物、探针对35例临床诊断的手足口病患儿及20例正常健康婴儿的粪便进行EV、EV71、CA16三种病原体实时荧光RT-PCR检测,同时对55分标本进行EV71病毒培养分离.结果 35例临床诊断手足口病患儿粪便中EV全部阳性,EV71阳性25例,CA16阳性8例,其中3例为EV71、CA16同时阳性,与临床诊断符合率为85.71%,20例健康体检婴儿粪便中EV病毒5例阳性,EV71、CA16均阴性.结论 荧光RT-PCR对手足口病病原体检测准确性高、特异性强,具有快速、廉价等特点,适合于手足口病的早期诊断.
关键词： 手足口病 肠道病毒 柯萨奇病毒A16 实时荧光RT-PCR -
手足口病临床诊疗措施初步探讨
目的 探讨手足口病的临床诊断及治疗措施,为手足口病的防治提供理论依据.方法 采用回顾性分析的方法对本院所收治的手足口病病例的相关信息进行分析.结果 手足口病多发生于3岁以下的儿童,80%以上病例有发热,100%病例皮肤出现黏膜疹,部分病例出现AST、ALT、CK-MB、LDH和血糖升高.重症病例可并发中枢神经系统损伤,导致神经源性肺水肿和循环衰竭.轻型病例多于1周内痊愈.重症病例治疗困难,病死率达25.7%(9/35).结论 手足口病是一种自限性疾病,提高诊断警惕性和及时识别出重症病例的早期临床征象是降低病死率的关键环节.重症病例应采取以脱水、降颅压、大剂量激素和静脉用丙种球蛋白冲击及呼吸循环支持治疗为主的综合治疗措施.
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2009-2013年山东省曹县手足口病流行病学特点
目的 分析山东省曹县2009-2013年手足口病流行病学特点,为预防控制手足口病提供指导.方法 登录疾病预防控制信息系统,导出曹县当地相关数据资料,汇总数据后进行分析统计.结果 共报告5 122例手足口病病例,＜4岁的婴幼儿4 674例,占91.25％;男3 407例,女1 715例.以散居儿童为主,占97.54％.手足口病的发病高峰在3-6月份,共4 145例,占全年发病数的80.53％.实验室诊断病例130例,EV71、CoxA16和其他肠道病毒分别为74、28和28例.结论 该县手足口病发病与年龄、性别、职业、季节有关,EV71感染的比例相对较大.为进一步控制手足口病的流行,应继续采用综合性的预防措施.
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广州市2008-2012年手足口病疫情分析
目的 了解广州市2008-2012年手足口病流行病学特征,为手足口病防治提供科学依据.方法 采用描述性流行病学方法对2008-2012年疾病监测信息报告系统报告的广州市手足口病病例进行流行病学分析.结果 广州市2008-2012年共报告15 6895例手足口病病例,重症117例,死亡12例,年平均发病率为268.34/10万.其中2008年报告6 230例,发病率为57.02/10万;2009年报告14 149例,发病率为128.53/10万;2010年报告35 373例,发病率为319.14/10万;2011年报告46 141例,发病率为363.29/10万;2012年报告55 002例,发病率为431.34/10万.发病主要有两个高峰期,一个主要的高峰期集中在4～6月,另一个在9～10月.病例主要集中在5岁及以下儿童,占发病总数的95.07％ (149 160/156 895),其中3岁及以下儿童病例占发病总数的81.74％ (128 247/156 895).死亡病例均为9 ～32月龄儿童.2008-2012年共报告手足口病实验室确诊病例11 826例,其中普通病例11 729例、重症病例97例.重症病例和普通病例病原构成存在差异,重症病例中肠道病毒71型(EV 71)构成比为74.23％(72/97),柯萨奇病毒A16型(Cox A16)构成比为11.34％ (11/97);普通病例中EV 71构成比为26.29％(3 084/11 729),Cox A16构成比为34.74％(4 074/11 729).2008-2012年共发生聚集性病例疫情47起,托幼机构45起,占95.74％;聚集性病例发生时间主要集中在4～7月,共报告30起,占63.83％ (30/47).结论 2008-2012年手足口病流行强度呈逐年增强趋势.5岁以下儿童尤其是3岁及以下儿童是发病主要人群,EV 71和Cox A16为主要病原,重症病例主要由EV 71引起.聚集性病例高发场所为托幼机构.
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2012-2014年陕西省商洛市手足口病病原学监测分析
目的 了解商洛市2012-2014年手足口病病原学分布情况,为制定肠道病毒感染防控措施提供实验室依据.方法 收集2012-2014年商洛市各区县送检临床手足口病重症和普通病例咽拭子标本,采用real-time RT-PCR技术进行核酸检测.结果 共采集手足口病临床标本1 161份,核酸阳性703份,总阳性率为60.55％,其中其他肠道病毒阳性220份(阳性率18.95％)、EV 71阳性364份(阳性率31.35％)和Cox A16阳性119份(阳性率10.25％).男性阳性率高于女性,差异有统计学意义(x2 =5.450,P＜0.05).不同区县肠道病毒核酸阳性率差异有统计学意义(x2=119.533,P＜0.01).结论 2012年、2014年病商洛市手足口病毒株以EV 71型为主,2013年主要为其他肠道病毒.重症病例主要由EV 71型引起.
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石家庄市2009-2012年手足口病病原学特征及变化规律分析
目的：分析2009—2012年石家庄市手足口病（ HFMD）病原体分布特征及规律。方法选择石家庄市2009—2012年临床诊断为HFMD的部分普通及所有聚集发病、重症和死亡病例，采集病例咽拭子、肛拭子或疱疹液、便等生物学标本进行病原学检测。结合地理信息系统（ GIS）对监测数据进行空间分布分析。结果4年共采集3842例HFMD病例生物学标本，阳性检出率为69.29%（2662例）。其中人类肠道病毒71型（EV71）、柯萨奇病毒（Cox） A16和其他肠道病毒比例分别占50.60%（1347例）、35.05%（933例）和14.35%（382例）。2009—2012年，石家庄市各年份HFMD病原学构成间差异有统计学意义（χ2=2.367，P<0.001）；其中2009年以CoxA16流行为主（占56.46%），2010、2011年以EV71流行为主（占77.34%、57.51%），2012年再次以CoxA16流行为主（占66.40%）。4年中各型病原在4或5月阳性检出数高，6月开始迅速下降。CoxA16基本呈单峰变化，而EV71后期会再次增多，呈现“拖尾”现象；其他肠道病毒检出例数较少，时间分布特征不明显。同一流行年各县区病原分布存在地区差异；0~岁儿童较易感染EV71；EV71感染者中重症病例所占比例明显高于普通病例，死亡病例均由EV71感染引起。结论石家庄市近4年来HFMD病原学构成有变化，呈现CoxA16与EV71交替成为优势病原的现象。EV71、CoxA16及其他肠道病毒分别呈现多峰、单峰和不显著峰的时间分布特征。在同一流行年，多数县区的优势病原与全市一致，个别县区的优势病原与全市不一致。随着年龄增长， EV71阳性检出构成比逐渐降低， CoxA16阳性检出构成比逐渐增多，其他肠道病毒构成比变化不大。
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北京市朝阳区部分婴幼儿肠道病毒71型感染率及手足口病发病情况分析
目的 分析北京市朝阳区部分婴幼儿肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染率及手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)发病情况.方法 选择北京市朝阳区小红门、酒仙桥社区6～ 35月龄健康婴幼儿为观察对象,共采集血清414份,检测中和抗体水平,并采集符合“可疑肠道病毒病”入选标准患者的咽拭子和肛拭子标本,应用RT-PCR法进行其他肠道病毒EV-G、柯萨奇病毒A16型(Coxsackie virus type A16,CA16)、EV71特异性核酸筛查.同时对观察对象进行1年随访,调查HFMD发病情况.将观察对象分为6～11月、12～ 17月、18 ～ 23月、24 ～ 29月、30～35月5个月龄组.结果 414名观察对象中,EV71中和抗体阳性39人,阳性率为9.42％,随着月龄的增加,阳性率呈递增趋势(P＜0.001);男性婴幼儿EV71中和抗体阳性率为8.90％ (17/191),女性为9.87％ (22/223),二者差异无统计学意义(P＞0.05).414名观察对象中,29例肠道病毒阳性,其中女性14例,男性15例,男女发病比例为1.07:1;CA16感染率为31.03％(9/29),EV71感染率为17.24％(5/29),其他肠道病毒感染率为51.72％(15/29).尚不能认为男女性别间肠道病毒感染及EV71和CA16感染的构成比有差别,也不能认为EV71中和抗体情况对肠道病毒感染率和EV71发病率有影响;随着年龄的增长,EV71感染人数呈递增趋势,而CA16则保持不变;小红门社区EV71中和抗体阳性率(12.25％)与酒仙桥社区(4.45％)差异有统计学意义(P＜0.05).结论 月龄越大,婴幼儿血清EV71抗体阳性率越高;小红门和酒仙桥地区检测到的HFMD患儿主要病原体为CA16和EV71,且CA16感染率高于EV71感染率.
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湘潭地区2013-2014年手足口病病原监测结果分析
目的:分析2013-2014年湖南省湘潭市手足口病(HFMD)病原体型别及分布特征,为进一步完善HFMD的预防和治疗提供依据.方法:采用RT-PCR方法,对571例HFMD患儿进行肠道病毒通用型核酸(EV-RNA)、EV71及柯萨奇病毒A16(CA16)检测.结果:2013年除EV71及CA16外其他EV核酸阳性率75.30％,明显高于EV71的17.65％和CA16的7.05％(P＜0.05),2014年EV71型核酸阳性率为50.68％,明显高于CA16的19.93％和其他EV的29.39％(P＜0.05).重症HFMD患儿EV71感染率明显高于轻症.结论:2013年湘潭地区HFMD患儿以除EV71及CA16外的其他EV病毒感染为主,2014年湘潭地区HFMD患儿以EV71感染为主.
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柯萨奇病毒 A16在恒河猴外周血单个核细胞中的增殖研究
柯萨奇病毒A16（CA16）感染灵长类动物模型显示该病毒在猴体内可形成明显的病毒血症期，在此基础上，本研究进一步分析病毒血症形成与CA16在外周血单个核细胞（PBMC ）不同组分中增殖的关系。首先用CA16感染恒河猴，检测病毒在PBMC组分CD4＋、CD8＋、CD20＋、CD11c＋、CD16＋和CD14＋细胞中的增殖情况和感染动力学，发现病毒仅在部分CD14＋细胞中有增殖表现。然后通过刺激CD14＋细胞产生一定量的树突细胞（DC），用CA16感染DC ，发现 CA16能在DC中形成具有动力学意义的增殖过程，增殖峰值出现在感染后12～36 h。这些结果可能为CA16感染发病机制提供重要信息。
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苏州地区柯萨奇病毒A16手足口病流行病学、临床特征及OAS1基因多态性研究
目的：了解2010—2014年苏州地区柯萨奇病毒A16（CA16）感染手足口病（HFMD）的流行特点、临床特征，以及寡腺苷酸合成酶1（OAS1）基因多态性与CA16感染HFMD的关系。方法收集2010—2014年确诊CA16感染HFMD患儿临床资料，分析其流行病学特点；选取其中167例患儿与同期166例EV71感染HFMD患儿进行临床特征比较；应用TaqMan探针技术检测167例CA16感染、166例EV71感染HFMD患儿及163例健康儿童的OAS1 rs10774671位点，分析该基因位点多态性与CA16感染HFMD的相关性。结果共收治HFMD患儿9016例，CA16核酸检测阳性762例，检出率8.45%；CA16感染HFMD夏季多，?0.05）；普通组与重型组CA16感染HFMD患儿OAS1 rs10774671位点基因型分布差异无统计学意义（P=0.475）。结论苏州地区CA16感染HFMD疫情的发生与年龄、季节有关；CA16感染HFMD患儿有不同的临床和实验室特征；OAS1 rs10774671位点GG基因型儿童更易感染CA16。
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2005年与2007年手足口病325例临床对比分析
目的 了解枣庄地区2005年与2007年手足口病发生情况及临床规律.方法 统计调查2005年与2007年325例手足口病资料,并进行临床对比分析.结果 2005年与2007年手足口病两次流行除性别分布之间的差异无统计学意义外,在病原、发病年龄、流行时间、地区分布、临床表现、并发症、实验室检查、治疗间的差异,均有统计学意义.结论 枣庄地区手足口病流行,病原为EV71的2007年较病原为CoxA16的2005年发病年龄小、流行时间长、散居儿童多、临床表现及并发症重、实验室检查异常多,治疗较困难.
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浙江省柯萨奇病毒A16 VP1基因特征分析及B细胞抗原表位预测
目的 了解浙江省柯萨奇病毒A16(CA16) VP1基因特征及其变迁规律并预测VP1蛋白上B细胞抗原表位.方法 在GenBank检索并下载35个浙江省CA16流行株及69个已知基因型CA16参考株的VP1基因序列,使用MEGA 6.0软件进行比对分析和构建种系进化树,确定浙江省CA16流行株的基因型,并分析VP1核苷酸和氨基酸同源性及氨基酸变异;运用DNAStar中的Protean模块预测VP1上可能的线性B淋巴细胞抗原表位.结果 浙江省CA16病毒基因型为B1基因型(34株)和A基因型(1株).B1型中以B1b亚型(24株)占绝对优势,其次为B1a亚型(10株).浙江省CA16流行株VP1核苷酸和氨基酸同源性分别为75.5％～ 100％和89.5％ ～ 100％;VP1区氨基酸序列高度保守,但也存在部分变异.VP1中可能的B细胞抗原表位(氨基酸肽段)有13个,分别为10-20、30-38、57-62、73-79、98-106、118-123、159-168、173-177、184-189、240-246、265-273、274-284和289-295.结论 浙江省CA16流行株存在A、B1 2个基因型,B1b和B1a为主要基因型,其VP1区氨基酸变异程度较低,VP1中13个预测的B细胞抗原表位可为CA16疫苗的研制提供科学依据.
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驻马店市手足口病流行特征分析
目的 了解驻马店市手足口病流行特征及病原体类型,为制定相关防控措施提供依据.方法 从疾病监测信息报告管理系统导出2014—2016年驻马店市手足口病疫情资料,分析手足口病三间分布、重症病例及病原学特征.结果2014—2016年驻马店市累计报告手足口病17315例,年均发病率为92.22/10万.其中重症病例255例,占总报告病例数的1.47%.≤5岁儿童病例占报告病例总数的97.81%,散居儿童病例占报告病例总数的94.28%;发病集中在每年3—7月;累计报告发病率前三位的县(市、区)为驿城区(162.23/10万)、平舆县(150.44/10万)和汝南县(144.63/10万).累计报告实验室确诊病例945例,其中重症病例89例,以肠道病毒71 型(EV71)感染为主,占77.53%;非重症病例856例,以其他肠道病毒感染为主,占47.78%.结论 驻马店市5岁以下散居儿童是手足口病主要发病人群,以其他肠道病毒和EV71感染为主,非重症病例与重症病例病原学构成不同.
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RT-PCR和FQ-PCR法在亳州地区手足口病检测中的应用
目的 比较RT-PCR和FQ-PCR法在手足口病(HFMD)病原学检测中的差异,并探讨毫州地区EV71和CoxA16的流行特征.方法 采集毫州地区2011年193例疑似HFMD患者不同种类的标本共252份.对其中的124份咽拭子样品,同时采用RT-PCR和FQ-PCR法进行EV71和Cox A16检测,并比较两种方法检测结果的差异.运用FQ-PCR法对所有标本进行检测,比较不同类型标本间结果的差异,并分析不同感染类型的阳性率.用FQ-PCR法检测咽拭子标本188份,分析不同类型HFMD感染者的季度分布.结果 用FQ-PCR及RT-PCR法检测124份疑似HFMD患者的咽拭子标本,EV71的阳性率分别为68.55％(85/124)和63.71％(79/124),Cox A16的阳性率分别为46.77％(58/124)和41.94％ (52/124).两种方法检测结果间的差异均有统计学意义(x2分别为95.385、101.908,P均＜0.01).用FQ-PCR法共检测252份标本,其中咽拭子、粪便、疱疹液和脑脊液的阳性率分别为75.00 ％(106/188)、81.13 ％(43/53)、6/7和1/4,不同类型标本之间阳性率的差异无统计学意义(x2=6.888,P＞0.05).EV71单独感染、Cox A16单独感染及联合感染率分别为42.06％、9.92％和23.81％,其差异有统计学意义(x2=63.369,P＜0.05).EV71单独感染季度间差异无统计学意义(x2=6.561,P＞0.05),而Cox A16单独感染及联合感染的季度间差异均有统计学意义(Cox A16单独感染:x2=8.061,P＜0.05;联合感染:x2=24.898,P＜0.01).结论 FQ-PCR比RT-PCR法更适用于HFMD病原学检测,并且不受标本种类限制.EV71单独感染率高,常年流行;联合感染次之,以夏秋季为主;Cox A16单独感染较少见,以秋冬季较多.
