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1-28 富马酸奎的平的致畸变与致突变性
目的研究新药富马酸奎的平的致畸性和致突变性.方法 (1)致畸试验:传统致畸试验方法.选用未交配过的Wistar种大鼠,体重220~280 g,剂量为178.82、71.53、35.76mg/kg(人用量的25、10、5倍),于受孕第6~15 d经口灌胃.(2)Ames试验:预培养平板掺入法,选用TA97、TA98、TA100、TA102 4菌株,根据斑点试验,检测浓度确定为867.00、173.40、43.35、8.67、0.87μg/皿.分别做加S-9与不加S-9试验.(3)染色体畸变试验:CHL细胞体外培养染毒法,根据LC50,染毒浓度定为:250.0、150.0、60.0μg/ml,做活化与非活化系统试验,分别于24和48 h收获细胞.(4)微核试验:30只雄性昆明种小鼠随机分为5组,染毒剂量为216.75、86.70、34.35 mg/kg(分别为1/2、1/5、1/10 LD50),经口灌胃.给药后24 h脊髓阻断处死动物,取材制片.结果与结论富马酸奎的平高、中剂量对孕鼠有轻微毒性作用,对胎鼠骨骼和脏器未产生致畸作用;3项致突变试验均为阴性.
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薯蓣皂苷体外抑制白血病细胞增殖研究
目的:观察薯蓣皂苷抑制白血病细胞增殖效应,为进行深层次研究提供依据.方法:采用细胞体外培养,四唑盐(MTT)比色法观察薯蓣皂苷细胞毒作用.结果:在 24.0μg/ml时对M07e、HL60、K562细胞的抑制率分别为 79.4%、 99.6%、 85.7%.而长春新碱除大浓度(3.2μg/ml)对M07e细胞抑制率为76.5%.结论:薯蓣皂苷能够明显抑制白血病细胞增殖,并对白血病细胞类型无明显选择性,表明薯蓣皂苷在抗白血病方面具有潜在的基础研究价值.
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组织工程化人工神经研究进展
利用各种神经导管可成功桥接修复短段周围神经缺损已为许多学者公认,但是,这些神经导管由于缺乏许旺细胞或内部支架来支持、促进神经再生轴突长距离生长,因此不能有效修复长段周围神经缺损[1, 2].应用组织工程技术构建神经导管,为修复长段周围神经缺损提供了新的方法和思路.这项研究的核心是模拟周围神经天然结构,将许旺细胞与生物支架材料有机结合成为类似Büngner带的结构,为再生神经提供良好的生长环境,充分发挥许旺细胞对再生神经的营养,诱导作用,从而促进神经的再生.组织工程化人工神经的主要内容是将经体外培养扩增的许旺细胞种植在具有三维支架结构,可生物吸收,半渗透性的神经导管内,桥接周围神经缺损.它涉及许旺细胞体外培养扩增,人工神经内部支架构筑,神经导管的制作等关键问题.现就上述问题的研究进展作一综述. 1 许旺细胞的培养构筑组织工程化人工神经,首先需要大量许旺细胞.但在培养条件下,许旺细胞生长缓慢,而且容易为成纤维细胞污染.为解决这些问题,以往学者们采用了抗体吸附法,反复植块培养法,有丝分裂抑制剂,或许旺细胞增殖剂等来去除成纤维细胞,刺激许旺细胞增殖分裂[3~5].但上述方法操作复杂,药物对许旺细胞有细胞毒作用,影响许旺细胞的存活率[4].近来,
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大鼠神经干细胞体外培养方法研究进展
长期以来,中枢神经系统疾病一直是困扰人类健康的一大难题.神经干细胞(neural stem cells,NSC)的发现为中枢神经系统损伤性疾病的治疗及其伤后功能重建带来了曙光[1-3].
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正常人结肠上皮细胞体外培养和鉴定
目的:探讨正常人肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IEC)的分离、体外培养方法,为研究IEC以及与IEC相关疾病建立合适的细胞模型.方法:正常结肠黏膜取自外科手术的大肠恶性肿瘤患者距肿瘤10 cm的结肠组织,联合运用Ⅰ型胶原酶和嗜热菌蛋白酶消化分离IEC,接种于含多种促IEC生长的营养成分的DMEM培养液内,根据IEC和成纤维细胞贴壁时间的差异并运用胶原酶来纯化IEC,通过观察IEC生长状态、形态特征、超微结构及检测上皮细胞膜抗原对IEC进行鉴定.结果:联合运用Ⅰ型胶原酶和嗜热菌蛋白酶消化1 h可分离出健全绒毛隐窝单位,2 wk左右细胞可铺满整个玻片.免疫细胞化学检测该细胞为阳性细胞,纯度高.结论:联合运用Ⅰ型胶原酶和嗜热菌蛋白酶,可分离培养出高纯度未凋亡的ICE.
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胃肠多肽对人肝癌细胞生长的调控作用
近年的研究表明,部分胃肠多肽具有抗肿瘤的效应,由于其不具有细胞毒性,可提高患者带瘤生存的时间和生活质量,并已在原发性肝细胞肝癌 (HCC)细胞上发现多种胃肠多肽受体的表达.由于实验条件、实验对象不同,目前并不清楚哪些胃肠多肽可影响HCC细胞的生长.尽管少量临床研究应用生长抑素(SST)类似物奥曲肽延长了晚期肝癌患者的生存时间,但尚不明确奥曲肽是否直接抑制了HCC细胞的生长.我们通过细胞体外培养,观察7种胃肠多肽对人HCC细胞株SMMC-7721 增殖的影响,以寻求治疗肝癌的新途径.
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体外培养破骨细胞的标志酶染色
破骨细胞体外培养是从细胞与分子水平研究骨吸收机理与骨质疏松症防治药物的基础[1].由于破骨细胞数量少,很难分离到纯的破骨细胞,体外培养所获破骨细胞常与其他细胞混合存在,因此从这些混杂细胞内辨别出破骨细胞尤为重要.鉴别破骨细胞的方法有多种,其中方便而具特异性的指标为标志酶TRAP与TrATPase染色,作者应用细胞化学方法成功地对体外培养破骨细胞的标志酶进行了染色,报道如下.
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睾丸未成熟生精细胞体外培养的研究进展
一、前言1920年首次报道用血浆培养睾丸组织研究体外精子发生以来,随着对睾丸组织结构、各种细胞的功能和精子体内发生过程的逐步认识以及体外培养技术的发展,睾丸未成熟生精细胞的体外培养方法和技术有了很大改进.现对睾丸未成熟生精细胞体外培养的研究进展及在辅助生殖方面的应用综述如下.
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骨髓基质细胞体外培养成骨能力的实验研究
骨髓基质细胞具有良好的成骨性能.我们采用细胞培养和原位杂交的方法,对骨髓基质细胞体外培养的增殖活性和成骨表型的表达进行研究,以期为筛选具有较强增殖活性和成骨能力的细胞作移植打下基础.
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不同体外方法培养兔角膜缘上皮细胞作用的研究
自从1986年Schermer等[1]发现角膜缘干细胞位于角膜缘基底Vogt栅栏内后,对角膜缘干细胞缺失和角膜上皮病变治疗有了许多新的疗法,其中以角膜缘上皮细胞体外培养法治疗上述疾病比较有效.目前,多数学者采用组织块法进行角膜缘上皮细胞体外培养,但在培养系中干细胞能否从组织块中迁移出来尚有争议.
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体外培养下压力对下颌髁突软骨细胞基质中胶原合成的影响
我们通过观察不同压力条件下体外培养的下颌髁突软骨细胞基质中胶原含量的变化情况,探讨不同压力对软骨细胞体外合成胶原的影响,为寻找软骨组织工程种子细胞体外培养的适宜生物力学条件提供参考.
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SD大鼠原代颌下腺细胞体外培养的生物学特征研究
组织工程化涎腺的体外构建首先需要获得增殖活跃、有功能的种子细胞.我们通过本实验进行颌下腺腺细胞的体外培养,并对其在体外的增殖和分化进行了研究.
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染色体畸变与人肿瘤细胞辐射敏感性关系的研究进展
放疗是治疗癌症的有效手段之一,然而各种肿瘤甚至同种肿瘤的不同病人其疗效却有很大差异,其中重要的影响因素就是肿瘤细胞的辐射敏感性.如果能在放疗前预知其敏感性的高低,则可大大地改善放疗方案的制定和决策,从而有针对性的提高各个病人的疗效.目前,常用低剂量照射后的细胞存活率(如SF2)判断辐射敏感性[1],但这种方法需要的时间较长,而且活检细胞体外培养不易成功,直接影响患者的及时治疗.因此越来越多的学者开始探索快速预测肿瘤细胞辐射敏感性的方法.
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骨与关节软骨组织工程的应用基础研究
骨与软骨组织工程研究已成为国际组织工程研究领域进展快、研究为深入的内容之一.目前,阻碍骨与关节软骨组织工程向临床应用转化的瓶颈性问题主要包括以下几个方面:(1)种子细胞来源有限:骨膜来源的成骨细胞体外培养扩增困难且取材损伤较大,关节软骨细胞来源不足,体外培养又极易老化,难以获得大量的细胞满足骨与关节软骨组织构建的需要,严重制约了临床应用.
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软骨组织工程基础及临床应用研究
软骨组织工程是组织工程研究领域开展早、发展快的研究内容之一,目前主要经历了两个阶段的发展,第一阶段主要是应用组织工程技术在免疫功能缺陷的裸鼠体内构建软骨组织,探讨软骨组织工程构建的可行性;第二阶段是在全面进行软骨组织工程研究的基础上,重点解决制约软骨组织工程发展的关键性问题,同时应用组织工程技术,在具有完全免疫功能的高等大型哺乳动物体内构建软骨组织并修复组织缺损,为组织工程化软骨的临床应用奠定基础.目前阻碍组织工程发展的瓶颈性问题主要包括以下几个方面:①软骨种子细胞来源有限:软骨细胞体外培养扩增困难且极易老化,难以获得大量的细胞满足软骨组织构建的需要,严重制约了临床应用;②针对众多应用于软骨组织工程的生物材料,尚缺乏系统的对照研究与统一标准,寻找适用于软骨组织构建的生物材料已经成为软骨组织工程生物材料研究的重中之重;③应用组织工程技术,在具有完全免疫功能的高等大型哺乳动物体内构建软骨组织并修复组织缺损,是组织工程技术向临床应用过渡的关键步骤与必要技术准备,而国际上相关工作尚未开展;④应用组织工程技术在人体内形成组织工程化软骨是组织工程研究的近期科学目标,也是组织工程技术临床修复软骨组织缺损的关键所在,相关研究尚未见报道.
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成体干细胞体外培养的安全性研究进展
一直以来,干细胞都是医学领域的研究热点,随着对干细胞特性的逐步认识,干细胞技术得到了突飞猛进的发展,在再生医学与组织工程等方面具有不可替代的应用前景.但是,随着研究的深入,人们发现多数肿瘤的发生与干细胞有着一定的关系,肿瘤细胞与干细胞之间存在着一定的相似性.
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体外培养小鼠睾丸间质细胞的形态学特征
本研究初步观察了睾丸间质细胞体外培养的形态学特征,以期为深入研究其分泌睾酮的影响因素奠定基础.方法为无菌取成年雄性昆明小白鼠的双侧睾丸,置于盛有适量PBS的培养皿中;用尖镊撕去附睾及白膜,用吸管吹打至曲细精管与间质组织分散;加入10倍体积的胶原酶,37℃下消化10~15 min后移入10 mL离心管,待曲细精管及间质组织沉降后移出上层细胞悬液;取一滴细胞悬液,加入适量台盼蓝混匀后用红细胞记数板计算细胞数目,调整细胞密度至3×105个/mL;将细胞接种在直径35 mm的塑料培养皿中,常规条件下培养;当细胞开始贴壁时,小心吸去旧液,加入新鲜培养液(D-MEM+10%小牛血清+1%双抗+1%谷氨酰胺)培养,定时观察;当培养细胞80%汇合时,弃去培养液,用PBS缓冲4%多聚甲醛室温固定1 h,PBS洗2次;用异丙醇油红法略加改进后进行脂质染色,苏木精复染;另用95%乙醇和PBS缓冲4%多聚甲醛(9∶1)室温下固定细胞40 min,PBS洗2次,1.4%甲基蓝染色后进行观察.本实验每次所获细胞悬液量均为3 mL,细胞密度为1.76×106个/mL,平均每侧睾丸可获间质细胞5.28×106个,其中活细胞、死细胞的平均百分比分别为88.94%、12.06%.在体外,间质细胞贴壁性状良好,不需特殊粘附分子.接种后一般8~10 h后即发生极化,胞质铺展,伸出突起.培养约14~15 h后即开始贴壁.镜见贴壁细胞透明,基本无颗粒,轮廊不清,增殖的细胞相互连接成单层膜状.细胞化学:甲基蓝染色显示,间质细胞核呈圆形或卵圆形,嗜碱性,位于胞质中央;核仁1~2个,清晰可见,一般位于核的边缘部;其胞质轮廊为多角形,一般有3~4个突起,遥抟中可见有多量大小不一的空泡状结构.油红O脂质染色显示,这些空泡状结构为脂质小滴,呈红色或红褐色,大小不一,圆形悬浮状存在,聚集于胞质两极或散布于核的四周.本实验结果表明,间质细胞胞质中存在大量脂滴,推测这些脂质是为其雄激素分泌功能提供必备前体物质而存在的.
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人子宫内膜异位症源性成纤维细胞的培养与鉴定
目的 建立人子宫内膜异位症源性成纤维细胞(HEFC)的体外培养细胞模型.方法 采用Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅳ型胶原酶联合消化法从人卵巢子宫内膜异位症囊肿中分离成纤维细胞,经密度离心和差速贴壁法纯化细胞.光镜和免疫细胞化学染色法对所获得的HEFC进行鉴定.结果 所获得的HEFC在免疫细胞化学染色分析中有成纤维细胞的标志物波形蛋白的强烈表达,肌纤维母细胞的标志物α-SMA偶尔表达,上皮细胞的标志物角蛋白无表达;培养中的成纤维细胞生长状态良好,呈现中等长度的较宽的梭形、三角形、星形和多角形;可良好的传代培养.结论 本研究建立了较理想的人HEFC体外培养体系,对了解人子宫内膜异位症源性成纤维细胞的异质性有重要价值,为从分子水平上研究人子宫内膜异位症中纤维化及纤维粘连的病理发生机制提供了充足、可靠的靶细胞.
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人外泌汗腺的分离培养和鉴定
我们探讨了人皮肤汗腺细胞的分离及体外培养方法,观察总结了汗腺细胞体外培养的生长特征,以获得稳定生长的正常皮肤汗腺细胞,为体外研究汗腺奠定基础.
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离子束辅助沉积氮化钛陶瓷薄膜的生物相容性研究
采用离子束辅助沉积(Ion Beam Assisted Deposition)方法在医用不锈钢317L表面制备氮化钛(TiN)陶瓷薄膜,并利用AES和XRD表征了薄膜的成分和相组成.采用显微划痕仪检测了薄膜附着力.运用电化学腐蚀方法测试了薄膜在37 ℃的Hank's模拟体液中的耐腐蚀性能,并通过成纤维细胞、骨髓细胞体外培养方法考察了薄膜表面的细胞相容性.结果表明:沉积TiN薄膜后,材料表面结构和性能发生明显改变.在37 C的Hank's模拟体液中,TiN薄膜样品的稳定自腐蚀电位和孔蚀击穿电位均高于317 L,表现出更好的耐全面腐蚀和孔蚀性能.且离子束辅助沉积制备的TiN薄膜无明显细胞毒性,比317L具有更好的细胞相容性,适当的微粗糙表面更有利于细胞的粘附生长.
关键词: 离子束辅助沉积(IBAD) 氮化钛(TiN) 耐腐蚀 细胞体外培养