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苦参碱对大鼠胶质瘤模型的作用的实验研究
目的:研究C6胶质瘤细胞在大鼠脑内成瘤后,苦参碱对其作用.方法:采用脑立体定向术建立胶质瘤大鼠模型,通过TUNEL及免疫组织化学方法检测苦参碱对胶质瘤大鼠模型肿瘤细胞的作用.结果:TUNEL及免疫组织化学Fas表达结果均显示在空白对照组与阴性对照组差异无统计学意义(P>0.05);低剂量组高于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.01);高剂量组高于低剂量组、阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义(P<0.01).结论:苦参碱具有诱导体内胶质瘤细胞凋亡的作用,可能是通过增加Fas的表达来实现的.
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五味子乙素对两种神经瘤细胞的抑制作用
目的 初步探讨不同浓度的五味子乙素(SchB)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞及C6胶质瘤细胞生长及增殖的影响.方法 体外培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞及C6胶质瘤细胞,分别以1～ 13 μmol/L SchB作用于SH-SY5Y细胞及C6细胞48 h.倒置显微镜下观察两种肿瘤细胞的形态学及数量变化,四唑盐比色法(MTT法)观察不同浓度的SchB对细胞生长增殖的影响,酶标仪检测各组吸光度.结果 与对照组相比,9～ 13 μmol/L SchB作用48 h均可引起SH-SY5Y细胞生长增殖抑制,1～7 μmol/L SchB对SH-SY5Y细胞没有毒性作用;而5μmol/L SchB即可对C6胶质瘤细胞的生长增殖产生抑制作用.结论 SchB对SH-SY5Y细胞及C6胶质瘤细胞的生长增殖均有明显的抑制作用,且C6胶质瘤细胞对SchB的增殖抑制作用更为敏感.
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牛蒡子苷元对体外C6胶质瘤细胞的 抑制效果和凋亡机制
目的:探讨牛蒡子苷元对体外C6胶质瘤细胞的抑制效果和凋亡机制.方法:将牛蒡子苷元作用于C6胶质瘤细胞,采用CCK-8法测定各组细胞的生长抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡情况;酶联免疫吸附试验检测TNF-α、IL-2的水平;Western blot检测Bax、Bcl-2、NF-кB蛋白表达水平.结果:与空白组比较,牛蒡子苷元组(2.5～40μmol/L)显著抑制C6胶质瘤细胞生长,诱导肿瘤细胞凋亡,其诱导效应具有浓度依赖性;牛蒡子苷元处理后,细胞中TNF-α、IL-2水平增加;牛蒡子苷元可以显著上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2、NF-кb蛋白表达.结论:牛蒡子苷元可以促进C6胶质瘤细胞凋亡,可能是通过增强TNF-α、IL-2水平及上调Bax蛋白、下调Bcl-2、NF-кB蛋白水平而诱导肿瘤细胞凋亡.
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雷公藤甲素对C6胶质瘤细胞增殖凋亡作用及对Bcl-2,Bax表达的影响
目的:探讨雷公藤甲素对大鼠C6胶质瘤细胞的增殖诱导作用及其相关机制.方法:将大鼠C6胶质瘤细胞培养于含10％ (FBS),100 mg·L-1青霉素链霉素的DMEM培养液中,置37℃5％ CO2培养箱中培养,采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测雷公藤甲素对大鼠C6胶质瘤细胞的抑制作用,流式细胞仪(FCM)检测C6胶质瘤细胞凋亡情况,用逆转录-聚合酶链反应(Real Time-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR),免疫印迹法(Western blotting,WB)检测细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关x蛋白(Bax) mRNA及蛋白的表达变化情况.结果:1.2 mg·L-1浓度的雷公藤甲素溶液对C6胶质瘤细胞增殖有抑制作用,且呈明显的剂量依赖性；雷公藤甲素作用C6胶质瘤细胞24 h后,1.2 mg·L-1浓度对其凋亡诱导作用为明显；雷公藤甲素可明显下调细胞中Bcl-2 mRNA及蛋白质表达,且该作用呈剂量-时间依赖性,而Bax mRNA及蛋白质表达呈上调趋势.结论:雷公藤甲素对C6胶质瘤细胞具有较好的生长抑制和凋亡诱导作用,两其作用机制可能与Bcl-2,Bax mRNA及蛋白质表达有关.
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白藜芦醇脂质体对C6胶质瘤细胞的抑制作用分析
目的:制备白藜芦醇脂质体并对其体外抗肿瘤作用进行评价.方法:通过薄膜分散-硫酸铵梯度法制备白藜芦醇脂质体,使用粒度仪对脂质体进行表征;确定C6胶质瘤细胞对数生长期;通过磺酰罗丹明B蛋白(SRB)法评价游离白藜芦醇及其脂质体对C6胶质瘤细胞的抗增殖作用,利用流式法考察白藜芦醇及其脂质体对C6胶质瘤的凋亡作用,以及C6胶质瘤细胞对白藜芦醇和其脂质体的摄取作用.结果:白藜芦醇脂质体的平均粒径(139.97 ±0.64) nm,Zeta电位(-7.00±0.74) mV;游离白藜芦醇和白藜芦醇脂质体对C6胶质瘤细胞的抑制率高分别可达(73.30±0.56)％和(91.70±0.60)％,差异有统计学意义(P＜0.05);游离白藜芦醇和白藜芦醇脂质体对C6胶质瘤细胞的诱导凋亡率分别为(20.03±0.85)％和(27.18±0.96)％,差异有统计学意义(P＜0.05);C6胶质瘤细胞对游离白藜芦醇和白藜芦醇脂质体的摄取率分别为(67.79±1.19)％和(77.61±1.67)％.结论:相比于游离的白藜芦醇,白藜芦醇脂质体对C6胶质瘤细胞的抗增殖作用更明显,具有更强的诱导C6胶质瘤细胞凋亡作用.白藜芦醇脂质体可以更多地被C6胶质瘤细胞摄取,这在一定程度上促进了其对C6胶质瘤细胞的抗增殖作用和诱导凋亡能力.说明白藜芦醇脂质体具有较强的体外抗C6胶质瘤作用.
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鲜壁虎冻干粉诱导C6胶质瘤细胞凋亡的血清药理学研究
目的探讨鲜壁虎冻干粉对C6胶质瘤细胞凋亡的影响.方法将30只小鼠随机分为3组,分别给予顺铂腹腔注射,口服鲜壁虎冻干粉及口服等量蒸馏水.20天后,取小鼠血清体外处理C6胶质瘤细胞.通过形态学分析、流式细胞仪及TUNEL法,观察细胞凋亡情况;S-P免疫组化法检测细胞凋亡相关基因bcl-2、bax的表达水平.结果形态学变化、流式细胞仪分析和TUNEL法结果均证实含鲜壁虎血清在体外可诱导C6胶质瘤细胞凋亡;鲜壁虎组与空白对照组比较,细胞内的bcl-2基因表达无明显变化,bax基因表达升高.结论含鲜壁虎血清能够诱导细胞凋亡,其机制可能与上调bax基因有关.
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鼠脑胶质瘤模型在局部缓释化疗研究中的应用
目的:建立可重复性大鼠脑胶质瘤动物模型,并利用其探讨卡氮芥-聚乳酸缓释剂(BCNU-PLA)的抑瘤作用.方法:30只Wistar大鼠,体重为210±20g,平分成3组,Ⅰ组为假手术组;Ⅱ组为左侧尾状核接种C6胶质瘤细胞组;Ⅲ组为局部治疗组,接种C6胶质瘤细胞后第5天植入BCNU-PLA.采用MRI及病理学检查方法,观察各组肿瘤生长情况.结果:建立的大鼠C6脑胶质瘤动物模型稳定可靠,成瘤率为100%,无远隔转移.Ⅰ组大鼠术后生存状态良好,无死亡.Ⅱ组大鼠平均生存期为17.5±1.65d.Ⅲ组平均生存期为57.9±46.9d,两组间差别有显著意义(P＜0.05).结论:鼠脑接种C6胶质瘤细胞,能产生可复制的单灶胶质瘤模型.用BCNU-PLA进行局部化疗可有效抑制胶质瘤细胞的生长.
关键词： C6胶质瘤细胞 动物模型 卡氮芥-聚乳酸缓释剂 磁共振成像 -
不同光动力剂量对C6胶质瘤细胞胞内游离钙的影响
目的研究不同剂量光动力作用后 C6胶质瘤细胞内游离钙 [Ca2+ ]i的变化,探讨钙超载在光动力诱导 C6胶质瘤细胞坏死和凋亡过程中的作用. 方法常规培养 C6胶质瘤细胞,以不同光动力剂量处理对数生长期的实验组细胞后,应用 Fluo- 3/AM为细胞内钙离子荧光指示剂,激光共聚焦显微镜测定各组 C6胶质瘤细胞内游离钙的变化; MTT法检测各组细胞的死亡率. 结果光动力作用后 C6胶质瘤细胞内游离钙明显升高,平均胞内钙离子浓度和细胞死亡率随着光动力剂量增加而增大. 结论光动力作用后 C6细胞钙超载在光动力诱导肿瘤细胞坏死和凋亡过程中起重要作用.
关键词： 光动力治疗法 C6胶质瘤细胞 钙超载 Fluo- 3/AM -
光动力学疗法与白花蛇舌草联合应用对大鼠C6胶质瘤细胞的作用
目的探讨光动力学疗法(photodynamic therapy,PDT)与白花蛇舌草联合应用对大鼠C6胶质瘤细胞的作用.方法常规培养的Wistar大鼠C6胶质瘤细胞用MTr法、吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)双荧光染色法和流式细胞术观察PDT联合白花蛇舌草对体外培养的大鼠C6胶质瘤细胞存活率的影响、检测凋亡、分析对细胞形态学及细胞周期的影响.结果白花蛇舌草可明显抑制C6胶质瘤细胞的生长;使肿瘤细胞聚集在S期并诱导其凋亡.PDT与各浓度白花蛇舌草联合可抑制C6胶质瘤细胞增殖(P＜0.01).白花蛇舌草和PDT均可在一定程度上诱导C6胶质瘤细胞凋亡,二者联用后诱导细胞凋亡作用显著增强,这种作用在白花蛇舌草浓度为5.0μg/ml作用12 h时明显.结论白花蛇舌草可与PDT协同抑制C6胶质瘤细胞的增殖.其协同作用的机制可能与诱导细胞凋亡有关.
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声动力治疗中钙超载机制的研究
目的 探讨声动力诱导C6胶质瘤细胞凋亡中钙超载现象及部分机制.方法 将对数期生长的C6胶质瘤细胞(4×104个/ml)放入试管中,每管5ml.实验分对照组、HMME、超声组和声动力治疗组.采用流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光分析仪检测细胞内钙离子水平,加入钙离子拮抗剂观察凋亡率的变化；采用免疫印迹的方法观察各组中钙离子ATP酶(SERCA)的表达水平,并分析钙离子的来源.结果 声动力治疗组细胞内钙离子浓度为(224.26±10.24) nm,较其他组明显升高,加入钙离子拮抗剂后其细胞凋亡率明显降低,声动力组SERCA2表达明显降低.结论 声动力诱导部分作用机制是细胞内出现钙超载现象,其原因可能是声动力对内质网SERCA2的破坏,进一步导致钙离子水平升高,引起凋亡反应所致.
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血卟啉甲醚-PDT诱导C6胶质瘤细胞凋亡机制的研究
目的 探讨血卟啉甲醚-光动力学疗法(PDT)诱导C6胶质瘤细胞的凋亡机制.方法 常规传代培养C6胶质瘤细胞系,取处于对数生长期细胞按实验要求分组接种于96孔培养板上,应用光敏剂血卟啉甲醚,以不同照光剂量(40、80、120、160、200、240、280和320 J/cm2)处理C6胶质瘤细胞.MTT法检测不同照光剂量的细胞死亡率;电镜观察PDT后C6细胞形态学变化;以Fluo-3/AM为细胞内钙离子荧光指示剂,激光共聚焦显微镜测定不同照光剂量作用后C6胶质瘤细胞内[Ca2+]i.结果 PDT组对C6胶质瘤细胞死亡率影响显著,照光剂量与细胞死亡率正相关,随照光剂量增加,细胞死亡率逐渐增大,当达到能量密度大于200 J/cm2时,细胞死亡率不再明显增加.PDT作用后早期出现一定数量凋亡的C6胶质瘤细胞和多数线粒体、内质网等亚细胞结构肿胀.PDT作用晚期可见大量坏死细胞和部分凋亡细胞.PDT作用后C6胶质瘤细胞内游离钙明显升高.结论 血卟啉甲醚-PDT诱导C6胶质瘤细胞坏死和凋亡,钙超载在广泛超微结构损伤中起重要作用.
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平瘤康方剂对C6胶质瘤细胞增殖的抑制作用
目的 探讨中药方剂平瘤康含药血清对体外培养的C6胶质瘤细胞增殖及细胞周期的影响.方法 2.5%、5%、10%和20%平瘤康含药血清处理体外培养的C6胶质瘤细胞24 h、48 h和72 h后,应用MTT比色法检测C6胶质瘤细胞增殖;PI染色后,应用流式细胞仪观测细胞周期时相.结果 10%和20%的含药血清能抑制C6胶质瘤细胞的增殖;10%和20%的含药血清处理C6细胞48 h、72 h后,S期细胞百分率下降,呈剂量依赖性.结论 平瘤康含药血清可能通过阻滞细胞周期而抑制胶质瘤细胞增殖.
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雷公藤红素联合顺铂对C6胶质瘤细胞凋亡作用的研究
目的 探讨雷公藤红素、顺铂联合应用对C6胶质瘤细胞的抑制效果和凋亡机制.方法 雷公藤红素、顺铂单独及联合用药作用于C6胶质瘤细胞,采用CCK-8法测定各组细胞的生长抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡情况,酶联免疫吸附实验检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、XIAP、NF-κB的表达水平变化.结果 相对于雷公藤红素和顺铂分别单独用药,雷公藤红素能够协同顺铂显著抑制C6胶质瘤细胞地生长,抑制率达到(69.76±7.28)％(t=23.78,P＜0.01);雷公藤红素联合顺铂用药组凋亡率为(47.75±5.63)％高于雷公藤红素组、顺铂组;酶联免疫吸附实验结果表明,雷公藤红素联合顺铂组Bax蛋白表达量明显高于单独用药组(t=10.59,P＜0.01),Bcl-2蛋白表达量、XIAP、NF-kB蛋白表达量明显低于单独用药组(t=35.27,P＜0.01).结论 雷公藤红素联合顺铂抑制体外C6胶质瘤细胞的增殖,可能是通过上调Bax蛋白的表达、降低抗凋亡蛋白Bcl、抑制XIAP及NF-kB蛋白的表达进而诱导肿瘤细胞凋亡.
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慢病毒介导的稳定表达绿色荧光蛋白的C6胶质瘤细胞株的建立及其生物学特性观察
目的 建立稳定表达绿色荧光蛋白(EGFP)的C6胶质瘤细胞株.方法 用含有CMV和EF1α两个启动子的慢病毒转染C6细胞,经流式细胞仪进行克隆筛选,荧光显微镜下观察EGFP阳性细胞,PCR及DNA测序鉴定基因组中EGFP的整合,并通过形态学检查、细胞增殖能力测定及致瘤性评价等进行了转染C6细胞的生物学特性分析.结果 慢病毒转染率高达40%;通过流式细胞仪筛选,建立了一种稳定、长期表达EGFP的C6/EGFP细胞株;PCR及DNA测序证实EGFP基因已成功整合入C6细胞;生物学特性分析表明转染前后的C6细胞没有明显改变.结论 以EGFP为生物标记物的C6/EGFP细胞株成功建立,可为将来研究脑胶质瘤提供理想的材料.
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VP_(22)修饰的CD基因工程化神经干细胞治疗大鼠C6脑胶质瘤体外实验研究
目的 探讨病毒蛋白VP_(22)在胞嘧啶脱氨酶(cytosine deaminase,CD)基因工程化神经干细胞治疗大鼠C6胶质瘤中的作用.方法 质粒pAdTrack-CMV-CD中PCR获取CD片段,克隆到慢病毒(lentivirus)质粒pHIV-EGFP和pHIV-VP_(22)-EGFP载体上,获得重组质粒pHIV-CD-EGFP和pHIV-VP_(22)-CD-EGFP,采用酶切和PCR技术进行鉴定.病毒包装采用三质粒系统共同转染293T细胞.CD基因的表达采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法鉴定.Lentivirus-EGFP、lentivirus-CD-EGFP、lentivirus-VP_(22)-EGFP和lentivirus-VP_(22)-CD-EGFP四种慢病毒感染经体外原代培养、扩增的SD大鼠胎脑神经干细胞(Nerual stem cells,NSCs),体外与C6细胞按1:1比例共培养,并加入终浓度100 mg/L的5-氟胞嘧啶(5-FC)培养3 d后,MTT比色法测定细胞存活率.结果 酶切和PCR证实,重组的慢病毒中含有CD基因.慢病毒lentivirus-EGFP、lentivirus-CD-EGFP、lentivirus-VP_(22)-EGFP和lentivirus-VP_(22)-CD-EGFP分别感染NSCs后与C6细胞共培养,在5-FC作用下,其细胞存活率分别为(95.57±4.83)%,(49.96±7.19)%,(94.25±4.32)%和(28.06±6.26)%.统计学处理,转染lentivirus-CD-EGFP和lentivirus-VP_(22)-CD-EGFP组的细胞存活率明显低于其相应对照组lentivirus-EGFP和lentivirus-VP_(22)-EGFP(P<0.01);其中转染lentivirus-VP_(22)-EGFP组的细胞存活率又明显低于lentivirus-EGFP组(P<0.01).结论 VP_(22)能够在体外增强CD基因修饰的NSCs抗C6胶质瘤疗效.
关键词： 慢病毒载体 VP_(22)穿梭蛋白 神经干细胞 C6胶质瘤细胞 -
雷公藤红素对C6胶质瘤细胞凋亡及细胞周期阻滞的影响
目的 探讨雷公藤红素对体外C6胶质瘤细胞凋亡及细胞周期阻滞的影响及机制.方法 雷公藤红素处理体外培养的C6胶质瘤细胞,MTT法检测细胞增殖,Hochest33342染色荧光显微镜观察以及锇铀铅染色透射电镜观察胶质瘤细胞形态变化,流式细胞术分析细胞凋亡率及细胞周期改变.蛋白印迹分析检测凋亡相关蛋白及细胞周期调控蛋白的表达变化.结果 雷公藤红素对C6胶质瘤细胞的增殖抑制作用呈浓度和时间依赖性；2.56 μmol/L雷公藤红素处理C6胶质瘤细胞24h后,荧光显微镜、透射电镜下均可见凋亡形态学改变.流式细胞术检查显示,凋亡细胞比例由1.32％升高到19.34％；并且,处于G0/G1期的细胞比例由76.42％降低到54.52％,G2/M期细胞比例由9.29％升高到30.50％.蛋白印迹分析显示,雷公藤红素降低了Bcl -2及XIAP蛋白表达,促进了Bax及Caspase -3的表达以及PARP的剪切；雷公藤红素在诱导细胞周期调控蛋白p21、p27及cyclin B1蛋白表达增加的同时抑制了cdk2蛋白的表达.结论 雷公藤红素能够通过调节凋亡相关蛋白及细胞周期相关因子的表达影响C6胶质瘤细胞的凋亡及细胞周期阻滞.
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PDGF-B链基因三链形成寡核苷酸对C6胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响
目的观察PDGF-B链基因三链形成寡核苷酸(triplex-forming oligonucleotide,TFO)对C6胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法应用流式细胞技术观察TFO对C6胶质瘤细胞PDGF-B、PCNA表达的影响,应用流式细胞技术观察TFO对C6胶质瘤细胞凋亡的影响.结果TFO对C6胶质瘤细胞PDGF-B、PCNA的表达有明显抑制作用,而且抑制作用存在浓度依赖性.TFO有明显诱导C6胶质瘤细胞细胞凋亡作用,而且诱导作用存在浓度依赖性.结论TFO抑制C6胶质瘤细胞细胞增殖,同时诱导C6胶质瘤细胞细胞凋亡.
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砷剂对胶质瘤细胞的促凋亡作用
目的 研究三氧化二砷(As2O3)对不同胶质瘤细胞系的作用以及机制.方法 应用MTT法观察As2O3对细胞生长的影响,并用透射电镜、Hoechst 33342/PI双染荧光和TUNEL观察C6胶质瘤细胞与9L胶质肉瘤细胞凋亡的形态变化;Annexin-v-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡率.结果 MTF法发现As2O3在0.5-8.0μmol/L的浓度均可显著抑制C6与9L胶质瘤细胞株的生长;透射电镜、Hoechst 33342/PI双染荧光和TUNEL观察均显示两种胶质瘤细胞发生了显著的凋亡形态改变;Annexin-v-FITC/PI法检测显示随As2O3浓度的增大和时间的延长,C6与9L胶质瘤细胞株的凋亡率明显上升,而在相同时间及浓度下9L胶质瘤细胞株凋亡率要小于C6胶质瘤细胞株.结论 As3O3可诱导C6和9L胶质瘤细胞株产生凋亡,并且其作用具有选择性.
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不同条件下光动力治疗对C6胶质瘤细胞的作用
目的 分析不同条件下应用血卟啉衍生物(HpD)的光动力学疗法(PDT)对体外培养大鼠C6胶质瘤细胞的作用.方法 MIT法检测PDT后C6细胞的生存率:(1)不同HpD浓度组(0、2、5、10、20、30及40 mg/L)C6细胞PDT(628 nm、20 mW/cm2、照光5 min)后的生存率;(2)C6细胞分别与不同浓度HpD(0、5、10、20、30及40 mg/L)孵育不同时间(0.5、1、3、6、12及24 h)行PDT(628nm,20 mW/cm2)后的生存率;(3)不同照光强度下(10、20及30 mW/cm2)PDT后C6细胞的生存率.结果 不同条件下PDT治疗对C6细胞的作用不同:(1)当HpD浓度低(2mg/L)、HpD与细胞孵育时间短(<3 h)时不能对细胞产生抑制或杀伤效应;(2)PDT后C6细胞的生存率随着HpD浓度的升高而降低,随着细胞与HpD孵育时间的延长而降低(>12 h后各组间差异无统计学意义),随着照光强度的增强而下降(20与30 mW/cm2之间差异无统计学意义).结论 HpD介导的PDT对体外培养大鼠C6胶质瘤细胞的作用与HpD浓度、HpD与细胞孵育时间及照光强度等有关,在不同条件下可表现为促进肿瘤细胞生长或杀伤肿瘤细胞的作用.
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节律基因Period2对肿瘤细胞生长及放射敏感性的影响
目的 探讨Period2(Per2)基因对细胞生长及放射敏感性的影响. 方法 体外培养C6神经胶质瘤细胞(C6 glioma cells),使用脂质体包裹法将Per2表达质粒(pcDNA 3.1-Per2)转导入C6细胞内;以免疫组化及流式细胞术检测Per2表达;通过流式细胞术和克隆形成试验检测稳定转染Per2阳性表达的C6细胞在正常情况下和γ射线照射后的凋亡、生长. 结果 未经γ射线照射的Per2阳性表达的C6细胞较对照组细胞增殖减慢、凋亡率增加,但γ射线照射后的较对照组细胞增殖速度快、凋亡率减少. 结论 节律基因Per2过表达会增加肿瘤细胞的凋亡,但在射线照射情况下会降低肿瘤细胞对射线的敏感性.
