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PDGF-B链基因三链形成寡核苷酸对C6胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响
目的观察PDGF-B链基因三链形成寡核苷酸(triplex-forming oligonucleotide,TFO)对C6胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法应用流式细胞技术观察TFO对C6胶质瘤细胞PDGF-B、PCNA表达的影响,应用流式细胞技术观察TFO对C6胶质瘤细胞凋亡的影响.结果TFO对C6胶质瘤细胞PDGF-B、PCNA的表达有明显抑制作用,而且抑制作用存在浓度依赖性.TFO有明显诱导C6胶质瘤细胞细胞凋亡作用,而且诱导作用存在浓度依赖性.结论TFO抑制C6胶质瘤细胞细胞增殖,同时诱导C6胶质瘤细胞细胞凋亡.
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PDGF-B链基因TFO抑制C6胶质瘤细胞PDGF-B链基因表达及细胞生长
目的:观察 PDGF-B 链基因三链形成寡核苷酸(triplex-forming oligonucleotide,TFO)对 C6 胶质瘤细胞 PDGF-B 链基因表达和细胞生长的作用.探索 PDGF-B 链基因 TFO 作为抗肿瘤治疗新药的可能性.方法:应用MTT法观察 PDGF-B 链基因 TFO对 C6 胶质瘤细胞生长的抑制作用;应用流式细胞技术观察 PDGF-B 链基因 TFO 对 C6 胶质瘤细胞 PDGF-B 链基因表达的影响.结果:PDGF-B 链基因 TFO 对 C6 胶质瘤细胞 PDGF-B 链基因的表达和细胞生长有明显抑制作用,而且抑制作用存在浓度依赖性.结论:PDGF-B 链基因 TFO 能够抑制 C6 胶质瘤细胞 PDGF-B 链基因的表达和细胞生长,有望成为抑制 PDGF-B 原癌基因表达的一种全新药物.
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125I标记三螺旋形成寡核苷酸及其对肝癌细胞杀伤力研究
目的 探讨三链形成寡核苷酸(TFO)的125I标记方法及其对肝癌细胞的抑制作用.方法 合成一段能与HBV前S基因特异结合的TFO,并用125I标记;以HepG2.2.15细胞为靶细胞,分125I-TFO、等量TFO、相同活度125I、空白对照四组分别转染细胞,以MTT比色试验检测各组细胞存活率.结果 ①125I-TFO的标记率为93%,放化纯为99%,比活度129.6 kBq/ug,体外稳定.②125I-TFO组的细胞杀伤率高于其它组(P＜0.05),高抑制率为35.2%.结论 Iodogen法标记连接酪胺的寡核苷酸的方法简便、标记率和放化纯高,标记产物生物活性损失小,体外稳定性好;标记化合物有效抑制了肝癌细胞生长.
关键词： 三链形成寡核苷酸 HepG2.2.15细胞 125I -
PDGF-B链基因的TFO对大鼠脑胶质瘤细胞增殖和凋亡影响
目的观察原位注射血小板源生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)B链基因的三链形成寡核苷酸(Triplex forming oligonucleotide,TFO)对荷瘤大鼠胶质瘤细胞增殖和凋亡影响.方法所有大鼠均在立体定向导引下右尾状核区微量灌注1×106C6胶质瘤细胞,其中实验Ⅰ和Ⅱ组在细胞接种后的第8天开始分别在肿瘤部位注射TFO 1.5 mg/20 μL和3.0 mg/20μL的生理盐水,以后每隔72 h原位注射相同剂量的TFO,共注射3次.对照组仅在相同时间原位注射20 μL生理盐水.实验至3周时处死所有的大鼠,观察肿瘤的生长情况,定性和定量观察肿瘤PDGF-B的表达、PCNA表达及细胞凋亡.结果实验Ⅰ组的成瘤抑制率为66.1%,实验Ⅱ组为91.8%.TFO对C6胶质瘤细胞PDGF-B、PCNA表达有明显的抑制作用;TFO能使C6胶质瘤细胞凋亡增加,以上作用均存在浓度依赖性.结论原位应用TFO能抑制PDGF-B表达,使胶质瘤细胞增殖降低、细胞凋亡增加,TFO能取得很好的抗胶质瘤生长的治疗效果.
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联合VEGF反义寡核苷酸和PDGF三链形成寡核苷酸抑制大鼠脑胶质瘤生长
目的:观察血小板源生长因子(PDGF) B链基因(PDGF-B)的三链形成寡核苷酸(triplex forming oligonucleotide,TFO)PDGF-TFO和血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,AON)VEGF-AON对大鼠脑胶质瘤生长的抑制作用.方法:36只雄性SD大鼠,分为4组,所有大鼠均在立体定向导引下行右尾状核区微量灌注含1×106 C6胶质瘤细胞的生理盐水20 μl.在细胞接种后第8天,实验Ⅰ组6只大鼠原位注射含PDGF-TFO 1.5 mg的 20 μl生理盐水,实验Ⅱ组12只和实验Ⅲ组12只大鼠则分别原位注射含PDGF-TFO 1.5 mg+VEGF-AON 0.125 mg和PDGF-TFO 1.5 mg+VEGF-AON 0.25 mg的20 μl生理盐水.以后每隔72 h原位注射相同剂量的药物1次,共注射3次.对照组6只大鼠仅在相同时间原位注射20 μl生理盐水.实验3周时处死所有大鼠,观察肿瘤的生长情况,定性和定量观察肿瘤PDGF-B、VEGF和肿瘤核增殖抗原(PCNA)表达.结果:实验Ⅰ组的成瘤抑制率为53.1 %,实验Ⅱ组为81.4 %,实验Ⅲ组为93.1 %,3组比较有明显差异(P<0.01).PDGF-TFO对C6胶质瘤细胞PDGF-B、VEGF、PCNA表达有明显的抑制作用;联合应用PDGF-TFO和VEGF-AON能更好地抑制PDGF-B、VEGF、PCNA表达.结论:联合应用PDGF-TFO和VEGF-AON 比单用PFGF-TFO能更有效地抑制肿瘤生长.
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PDGF-B链基因的三链形成寡核苷酸对大鼠脑胶质瘤生长及细胞周期的影响
目的:观察血小板衍生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)B链基因的三链形成寡核苷酸(triplex formingoligonucleotide,TFO)对大鼠胶质瘤细胞生长及细胞周期的影响.方法:所有SD大鼠(36只,体质量220～250 g)均在右尾状核区微量灌注1×106个C6胶质瘤细胞,其中实验Ⅰ组和Ⅱ组(n=12)在细胞接种后的第8天开始分别原位注射TFO 1.5mg/20μl和3.0 mg/20 μl的生理盐水,以后每隔72 h注射相同剂量的TFO,共注射3次.对照组(n=12)在相同时间原位注射20μl生理盐水.实验3周时处死所有的大鼠,观察肿瘤的生长情况,标本做常规H E染色.流式细胞仪检测肿瘤PDGF-B、PCNA的表达及细胞周期.结果:实验Ⅰ组、Ⅱ组的成瘤抑制率分别为66.1%、91.8%,两者相比有显著差异(P＜0.01).TFO对胶质瘤细胞PDGF-B、PCNA表达有明显的抑制作用(P＜0.01);TFO能明显降低胶质瘤细胞G2-M期和S期(DNA合成期)的百分率,阻止细胞由静止期(G0-G1期)进入DNA合成期(S期,P＜0.01).以上作用均存在浓度依赖性.结论:原位应用TFO能抑制PDGF-B表达,阻碍细胞进入S期,使胶质瘤细胞增殖降低,达到抗胶质瘤生长的作用.
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~(125)碘标记三链形成寡核苷酸对肝癌细胞中病毒复制和细胞生长的抑制作用
目的 探讨~(125)碘(I)标记三链形成寡核苷酸(TFO)与乙型肝炎病毒(HBV)DNA的特异性结合能力及其对肝癌细胞HepG 2.2.15中病毒复制及细胞生长的抑制作用.方法 合成能与HBV前S基因特异结合的TFO,并以~(125)I标记.将HepG 2.2.15细胞分别与~(125)I-TFO实验组(125I-TFO组)、等量TFO对照组(TFO组)、相同放射性活度的钠~(125)碘(Na~(125)I)组和空白对照组共同培养,荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞培养液中HBV DNA拷贝量变化,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测转染后各组细胞的存活率.结果 RT-PCR显示转染48 h后,4组间病毒拷贝数量的差异有统计学意义(P<0.01),~(125)I-TFO组对病毒复制的抑制作用显著强于空白对照组(P<0.01)、~(125)I对照组(P<0.01)和TFO组(P<0.01);TFO组的抑制病毒复制作用显著强于空白对照组(P(0.05).转染24、48、72 h,~(125)I-TFO组对HepG 2.2.15细胞的生长抑制作用显著高于其他3组(P值均<0.01),并随时间的增加~(125)I-TFO对细胞生长的抑制作用呈线性上升趋势.结论 ~(125)I-TF0可有效地抑制肝癌细胞中HBV的复制及肝癌细胞的生长,为今后制备抗HBV、抗HBV相关肝细胞癌的放射性基因治疗药物奠定了基础.
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三链形成寡核苷酸对大鼠脑胶质瘤生长和血管生成影响的研究
目的观察原位注射血小板源生长因子(PDGF) B链基因(PDGF-B)的三链形成寡核苷酸(TFO)对大鼠脑胶质瘤生长和血管生成的抑制作用.方法实验大鼠18只均在立体定向导引下行右尾状核区微量灌注1×106 C6胶质瘤细胞,其中实验Ⅰ和Ⅱ组在细胞接种后第8 d开始分别原位注射TFO 1.5 mg/20 μl和3.0 mg/20 μl的生理盐水,以后每隔72 h原位注射相同剂量的TFO,共注射3次.对照组仅在相同时间原位注射20 μl生理盐水.实验3周时处死所有的大鼠,观察肿瘤的生长情况,观察肿瘤PDGF-B的表达、血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤核增殖抗原(PCNA)表达.结果实验Ⅰ组的成瘤抑制率为66.0%,实验Ⅱ组为92.2% ,两组比较差异有极显著性(P<0.01).TFO对C6胶质瘤细胞PDGF-B、VEGF、PCNA表达有明显的抑制作用;原位应用TFO能抑制PDGF-B表达,使胶质瘤细胞增殖能力降低,抑制血管生成.结论 TFO抑制肿瘤生长与抑制胶质瘤细胞增殖及抑制血管生成有关.
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立体定向微量灌注PDGF-B链基因的三链形成寡核苷酸抑制大鼠脑胶质瘤生长
目的观察在荷瘤大鼠脑内立体定向原位注射血小板源生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)B链基因的三链形成寡核苷酸(triplexforming oligonucleotide,TFO)对胶质瘤生长的抑制效果.方法在立体定向导引下所有大鼠右尾状核区微量灌注接种1×106C6胶质瘤细胞,其中实验Ⅰ和Ⅱ组在细胞接种后的第8天,开始分别立体定向原位注射TFO 1.5mg/20μl和3.0mg/20μl的生理盐水,以后每隔72小时原位注射相同剂量的TFO,共注射3次.对照组仅在相同时间原位注射20μl的生理盐水.实验3周时处死大鼠,解剖出全脑,观察肿瘤的生长情况,测量肿瘤大小,标本做常规HE染色和免疫组织化学检查观察肿瘤PDGF-B的表达.结果实验组大鼠有较好的生存状态,而对照组在实验2周时开始出现颅内高压,至3周时大鼠多处于濒危状态.实验Ⅰ组的成瘤抑制率为66.0%,实验Ⅱ组为92.2%.TFO对荷瘤大鼠胶质瘤细胞PDGF-B的表达有明显的抑制作用.结论PDGF-B链基因是胶质瘤生长的重要因素,应用TFO能取得很好的抗胶质瘤生长的治疗效果.
