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胸腺肽α1(Tα1)体外抗HBV作用的实验研究
目的:在乙型肝炎病毒(HBV)基因转染的人肝癌细胞系(HepG2)的2215细胞培养中,观察胸腺肽α1(Tα1)对2215细胞的毒性及对乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)的抑制作用.方法:在HepG 2215细胞中加入经2倍稀释的药物,第8天在显微镜下观察细胞病变,并收集细胞培养上清液,ELISA法检测抗原浓度,酶标仪测定OD值.结果:Tα1对2215细胞的大无毒浓度(TC0)为80μg/ml,根据公式计算半数毒性浓度(TC50)为135μg/ml.Tα1在大无毒浓度下,对2215细胞分泌的HBsAg的抑制率平均为56.6%、44.1%、10.6%;半数有效浓度(IC50)平均为59.7μg/ml,治疗指数平均为2.47.对2215细胞分泌的HBeAg的抑制率平均为53.5%、43.3%、20.0%;半数有效浓度(IC50)平均为64.4μg/ml,治疗指数平均为2.10.结论:Tα1在2215细胞中培养6天,其无毒浓度对2215细胞分泌的HBsAg和HBeAg有一定的抑制作用.
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~(125)碘标记三链形成寡核苷酸对肝癌细胞中病毒复制和细胞生长的抑制作用
目的 探讨~(125)碘(I)标记三链形成寡核苷酸(TFO)与乙型肝炎病毒(HBV)DNA的特异性结合能力及其对肝癌细胞HepG 2.2.15中病毒复制及细胞生长的抑制作用.方法 合成能与HBV前S基因特异结合的TFO,并以~(125)I标记.将HepG 2.2.15细胞分别与~(125)I-TFO实验组(125I-TFO组)、等量TFO对照组(TFO组)、相同放射性活度的钠~(125)碘(Na~(125)I)组和空白对照组共同培养,荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞培养液中HBV DNA拷贝量变化,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测转染后各组细胞的存活率.结果 RT-PCR显示转染48 h后,4组间病毒拷贝数量的差异有统计学意义(P<0.01),~(125)I-TFO组对病毒复制的抑制作用显著强于空白对照组(P<0.01)、~(125)I对照组(P<0.01)和TFO组(P<0.01);TFO组的抑制病毒复制作用显著强于空白对照组(P(0.05).转染24、48、72 h,~(125)I-TFO组对HepG 2.2.15细胞的生长抑制作用显著高于其他3组(P值均<0.01),并随时间的增加~(125)I-TFO对细胞生长的抑制作用呈线性上升趋势.结论 ~(125)I-TF0可有效地抑制肝癌细胞中HBV的复制及肝癌细胞的生长,为今后制备抗HBV、抗HBV相关肝细胞癌的放射性基因治疗药物奠定了基础.
