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胸腺肽α1(Tα1)体外抗HBV作用的实验研究
目的:在乙型肝炎病毒(HBV)基因转染的人肝癌细胞系(HepG2)的2215细胞培养中,观察胸腺肽α1(Tα1)对2215细胞的毒性及对乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)的抑制作用.方法:在HepG 2215细胞中加入经2倍稀释的药物,第8天在显微镜下观察细胞病变,并收集细胞培养上清液,ELISA法检测抗原浓度,酶标仪测定OD值.结果:Tα1对2215细胞的大无毒浓度(TC0)为80μg/ml,根据公式计算半数毒性浓度(TC50)为135μg/ml.Tα1在大无毒浓度下,对2215细胞分泌的HBsAg的抑制率平均为56.6%、44.1%、10.6%;半数有效浓度(IC50)平均为59.7μg/ml,治疗指数平均为2.47.对2215细胞分泌的HBeAg的抑制率平均为53.5%、43.3%、20.0%;半数有效浓度(IC50)平均为64.4μg/ml,治疗指数平均为2.10.结论:Tα1在2215细胞中培养6天,其无毒浓度对2215细胞分泌的HBsAg和HBeAg有一定的抑制作用.
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芹灵冲剂在2215细胞培养内对HBsAg,HBeAg的抑制作用
目的在乙型肝炎病毒(HBV)基因转染的人肝癌细胞系(HepG2)的2215细胞培养中,观察芹灵冲剂(Qinling Chongji,QL)对细胞的毒性和对乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)的抑制效果.方法①2215细胞培养:将配制成细胞(1×105个/mL)接种细胞培养板,96孔板每孔0.2 mL,24孔板每孔1 mL,37℃50 mL/L CO2培养24 h,细胞长成单层后进行实验.②药物对细胞毒性试验:QL 12 g/L用培养液2倍稀释成6个浓度:8,4,2,1,0.5 g/L,加入96孔细胞培养板,每浓度4孔,每4 d换同浓度药液,培养12 d,观察药物对细胞的毒性,设无药物细胞对照.③药物对HBsAg,HBeAg抑制试验:在无毒浓度以下2倍稀释试验药液,3个稀释度分别为4,2,1,0.5 g/L,每浓度3孔,37℃50mL/LCO2培养,每4 d收取培养液,换原浓度药液培养,将d8,d12收集的培养液同时测定HBsAg和HBeAg.④HBsAg和HBeAg测定:用固相放射免疫测定盒测定,方法见说明书,用γ-计数器测定每孔药液cpm值.结果 QL4 g/L加入细胞培养8 d和12 d,三批实验对细胞的半数中毒浓度(TC50)平均为8.7 g/L±0.3 g/L,大无毒浓度(TC0)为4 g/L在大无毒浓度(4 g/L)时对细胞分泌HBeAg平均抑制率(8 d)为51.1%±2%和(12 d)为65.0%±1.9%,半数有效剂量(IC50)平均(8 d)为3.1 g/L±0.8 g/L和(12 d)为9.1 g/L±0.9 g/L,与细胞对照比较有显著和非常显著性意义,P＜0.05和P＜0.01;对细胞分泌HBsAg的平均抑制率(8 d)为55.0%±3.9%和(12 d)为61.4%±0.98%,半数有效剂量(IC50)平均(8 d)为3.0 g/L±0.8 g/L和(12 d)为1.7 g/L±0.2 g/L,与细胞对照比较,P值分别为＜0.05和＜0.01,差别有显著性.结论实验表明QL在2215细胞中培养12 d,大无毒浓度可明显抑制HBeAg和HBsAg的分泌.
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水芹乙酸乙酯提取物在2215细胞培养内对乙型肝炎病毒表面抗原和E抗原的抑制作用
目的:观察水芹乙酸乙酯提取物(简称水芹提取物)在乙型肝炎病毒(HBV)基因转染的人肝癌细胞系(HepG2)2215细胞培养中,对细胞的毒性及对HBV表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)的抑制效果.方法:水芹提取物用培养液稀释成2 000、1 000、500、250、125μg.ml-1浓度,分别加入2215细胞内培养12d,观察药物对细胞的毒性.在无毒浓度下的水芹提取物,以培养液稀释1 000、500、250μg.ml-13浓度,分别加入2215细胞内培养,于第6、9d收集的培养液,用固相放射免疫法测定HBsAg和HBeAg,γ-计数器测定每孔药液cpm值.结果:对细胞的半数中毒浓度(TC50)平均为2284.73±127.35μg.ml-1,大无毒浓度为1000μg.ml-1.大、中剂量(1 000、500μg.ml-1)对2215细胞分泌的HBs Ag、HBeAg的活性于试验的第6、9d均有明显的抑制作用(P<0.05,P<0.01,P<0.001),并有一定转阴作用.结论:水芹提取物在2215细胞中培养6～9d,大无毒浓度可明显抑制HBeAg和HBsAg的分泌.
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苦玄参不同提取部位抑制2215细胞分泌HBeAg和HBsAg的实验研究
目的:观察苦玄参不同提取部位的含药血清对2215细胞分泌HBeAg和HBsAg的抑制作用.方法:将含药血清作用于2215细胞,然后用酶联免疫法测定HBsAg和HBeAg的水平.结果:苦玄参各提取部位对HBeAg有明显的抑制作用,但没有明显的量效关系.其中乙醇总提取部位、水提取部位和正丁醇提取部位对HBeAg的抑制效果比乙酸乙酯提取部位好,抑制率高可达80%以上(P<0.05);苦玄参各提取部位对HBsAg也有一定的抑制作用,不同提取部位的抑制作用相差不大.结论:苦玄参不同提取部位的含药血清能抑制2215细胞分泌HBeAg和HBsAg,其中极性较大的化合物对HBeAg的抑制作用较强.
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中药乙醇提取物对肝癌细胞中乙肝抗原抑制作用
目的 观察中药乙醇提取物在乙型肝炎病毒(HBV)DNA转染的人肝癌细胞系2215细胞培养中,对2215细胞HBsAg、HBeAg分泌的影响.方法 药物对细胞的毒性实验,采用2215细胞为模型,加药后显微镜观察细胞病变.在无毒浓度下,分别检测30味中药提取物对细胞培养上清液中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)的抑制作用.结果 通过计算抑制百分率和治疗指数,其中18味为抑制乙肝表面抗原HBsAg有效低毒药物,其中使君子表面抗原抑制率高达89.7%,治疗指数为22.8;女贞子表面抗原抑制率高达87.9%,治疗指数为13.8.6味为抑制乙肝e抗原HBeAg有效低毒药物,其中石榴皮对e抗原抑制率73.6%,地耳草对e抗原抑制率72.6%.结论 本实验方法作为快速体外筛选模型简便易行,筛选的有效药物如使君子、石榴皮等可进行深入的抗乙肝病毒的体内实验研究.
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应用2215细胞研究中药抗乙肝病毒的进展
目的 应用2215细胞作为药物体外筛选模型目前已发展到比较成熟的阶段,按照现有实验对不同药物处理方法分类,本文归纳总结中草药、中药提取物、中成药以及含药血清等应用2215细胞进行抗乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)的实验研究现状,为中药抗乙肝病毒的研究和开发提供了参考.
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天螺霜抑制2215细胞分泌HBsAg和HBeAg的实验研究
天螺霜是我院通过对民间方剂"天螺汤"有效成分分析,首次以天螺(江西巴蜗牛,Bradybaena. Jiangxinensis)为原料采用溶剂提取法制取的多糖类生物活性物质[1].本研究以HBV转染的人肝癌细胞(Hep G2)2215细胞株为靶细胞,拟通过体外细胞培养实验观察其对HBV分泌HBsAg和HBeAg的抑制作用及其细胞毒性.
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二黄乙肝片影响2215细胞HBsAg、HBeAg分泌的实验研究
目的:观察二黄乙肝片的体外抗乙肝病毒作用.方法:采用2215细胞为模型,应用MTT法进行细胞毒性实验,在无毒浓度下检测二黄乙肝片对细胞培养上清液中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)的抑制作用.结果:二黄乙肝片大无毒浓度(TC0)为1375μg/ml,半数有效浓度(IC50)小于171.88μg/ml,对2215细胞分泌的HBsAg抑制率为29.85%,对2215细胞分泌的HBeAg抑制率为89.99%.二黄乙肝片对HBeAg有较强的抑制作用,治疗指数为20.55.结论:二黄乙肝片对HBeAg和HBsAg分泌的抑制作用乙型提示其在体外具有抗乙型肝炎病毒的作用.
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藤茶总黄酮在2215细胞培养中对乙型肝炎病毒HBsAg、HBeAg和HBV-DNA的抑制作用
目的:观察藤茶总黄酮在HBV基因转染的人肝癌细胞系2215培养中对细菌的毒性、HBsAg和HBeAg分泌的影响及对细胞HBV-DNA合成的抑制作用.方法:药物对细胞的毒性实验,接种2215细胞后24 h,加入药物培养8 d观察细胞病变.在无毒的药物浓度下,将药物加入2215细胞培养8 d收集培养液,测定HBsAg和HBeAg水平.将药物加入2215细胞培养8 d,提取DNA,用HBV-DNA探针作斑点杂交,酶标仪测定OD值.结果:藤茶总黄酮半数细胞毒浓度(TC50)为125 μg*ml-1,大无毒浓度(TC0)为62.5 μg*ml-1;在大无毒浓度时对2215细胞分泌的HBsAg抑制率为43.14%,半数有效剂量(IC50)为40.21 μg*ml-1,治疗指数(SI)为3.11;对2215细胞分泌的HBeAg抑制率为33.76%;对HBV-DNA有一定抑制作用.
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方格星虫多糖体外抗乙型肝炎病毒活性的研究
以Hep G2.2.15细胞为研究模型,选用拉米夫定为阳性对照药物,采用Taqman荧光定量PCR检测细胞上清HBV DNA,ELISA检测培养上清液HBsAg、HBeAg水平的变化.采用MTT法观察它们对细胞生长的影响.发现方格星虫多糖的4个剂量组(250,125 ,62.5,32.3 mg/L)和所观察的时间点(3、6、9 d)对HBV DNA、HBsAg、HBeAg表现出剂量与时间依赖的抑制作用(P＜0.05).方格星虫多糖对HBV DNA抑制的半数抑制浓度为49.48 mg/L,对Hep G2.2.15细胞半数细胞毒性浓度为250 mg/L,治疗指数为5.06.认为方格星虫多糖对培养2215细胞中呈剂量与时间依赖的抑制作用,具有较好的应用前景.
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壮药依肝达含药血清对2215细胞HBV-DNA的抑制作用
目的 观察依肝达体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用;为壮药的研究及应用奠定基础.方法 采用血清药理学法进行实验,将依肝达含药血清作用于2215细胞,采用荧光定量PCR法检测2215细胞培养上清液中HBV-DNA的含量.结果 依肝达含药血清在2215细胞培养中可有效地抑制细胞HBV DNA的复制(P<0.01).结论 壮药依肝达含药血清在体外有显著的抗HBV作用;本研究为壮药的开发研究奠定了基础.
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无刺根乙醇提取物抗乙肝病毒体外实验研究
无刺根是葡萄科蛇葡萄属植物粤蛇葡萄Ampelopsis cantoninensis（ Hook．et．Arn．） Pl．的根或全草。中医认为其全株有清热解毒、解暑的功能。其为广东省民间常用药，民间常用无刺根治疗骨髓炎、急性淋巴结核、急性乳腺炎、湿疹等，并对乙肝具有良好的疗效［1］。现代药理研究表明葡萄科蛇葡萄属部分药用植物，具有降血压、消炎镇痛、保肝护肝、降血脂等多种药理活性，具有极高的开发价值［2－3］，但未见对无刺根及其提取物体外抗乙肝病毒作用的研究报导。本课题组对无刺根化学成分进行了较系统的提取分离，本论文在此基础上研究了无刺根乙醇提取物对2215细胞 HBsAg、HBeAg的分泌所表达的抑制作用，为课题组后期进一步探讨无刺根抗乙肝病毒提供了参考。
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白背叶提取物WF对2215细胞分泌HBsAg和HBeAg的影响
目的 研究白背叶提取物WF对乙肝病毒的抑制作用.方法 接种2215细胞24 h后,加入不同浓度的白背叶提取物WF培养8 d,以细胞形态学的变化为指标评价WF对2215细胞的毒性.收集大无毒浓度下的培养液,酶联免疫法(ELISA)检测培养液中HBsAg和HBeAg水平.结果 在大无毒浓度下,WF对2215细胞HBsAg和HBeAg的分泌有明显抑制作用.WF抑制HBsAg的半数有效量(IC_(50))为8.61 μg/ml;抑制HBeAg的IC_(50)为20.87 μg/ml.结论 WF可明显抑制2215细胞HBsAg和HBeAg的分泌,具有显著的抗乙肝病毒作用.
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田基黄不同提取物含药血清体外抗乙肝和抗肝癌作用的实验研究
目的 观察田基黄不同提取物的含药血清体外抗乙肝和抗肝癌的作用.方法 采用酶链免疫法,观察田基黄不同提取物的含药血清对2215细胞分泌HBeAg和HBsAg的抑制作用.采用MTT技术,观察田基黄不同提取物的含药血清对肝癌细胞BEL-7404增殖的抑制作用.结果 当含药血清浓度为5%时,田基黄乙醇总提取物和正丁醇提取物对HBeAg和HBsAg呈现较好抑制作用,抑制率分别为34.84%和57.95%,以及76.02%和53.15%(P＜0.05);当含药血清浓度为20%时,醋酸乙酯提取物对HBeAg和HBsAg呈现较好的抑制作用,抑制率分别为79.79%和57.22%(P＜0.05);水提取物3种浓度的含药血清对HBeAg和HBsAg都有较好的抑制作用,抑制率分别达到了70%和30%以上(P＜0.05).田基黄各提取物对肝癌BEL-7404细胞都有一定的抑制作用,该抑制作用呈明显的量效关系,当含药血清浓度为20%时,乙醇总提取物、醋酸乙酯提取物、正丁醇提取物和水提取物的抑制率分别为29.74%,53.80%,40.79%和54.24%(P＜0.01).结论 田基黄不同提取物含药血清能抑制2215细胞分泌HBeAg和HBsAg,并且能抑制肝癌细胞BEL-7404的增殖.其抗乙肝的有效成分主要分布在田基黄的水提取物中,而抗肝癌的有效成分则均衡分布于各种极性部位.
关键词： 田基黄 2215细胞 BEL-7404细胞 血清药理学 -
大叶蛇葡萄石油醚提取物抗乙肝病毒体外实验研究
目的 研究大叶蛇葡萄石油醚提取物体外抗乙肝病毒(HBV)的作用.方法 将大叶蛇葡萄石油醚提取物作用于乙肝病毒DNA转染人肝癌细胞系2215细胞,以细胞病变(CPE)观察药物对2215细胞的毒性,用酶联免疫测定法(ELISA)检测药物对培养8d的2215细胞分泌的表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)表达的抑制作用.结果 石油醚提取物的半数毒性浓度(TC50)为99.1μg/ml,大无毒浓度(TCo)为62.5 μg/ml;石油醚提取物对培养8d的2215细胞的HBsAg、HBeAg表达抑制作用的半数有效浓度(IC50)分别为4.2 μg/ml,26.3μg/ml,治疗指数(TI)值分别为23.6,3.8.结论 大叶蛇葡萄石油醚提取物具一定的体外抗乙肝病毒的作用,为有效部位.
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扯根菜及其系统提取物抗乙型肝炎病毒体外实验研究
目的:通过体外实验,探讨扯根菜及其系统提取物抗乙肝病毒的作用.方法:将中药扯根菜及其系统提取物作用于HBV DNA转染细胞系2215细胞,通过检测细胞培养液中HBsAg、HBeAg的变化来评价扯根菜及其系统提取物抗乙肝病毒的效果及其可能的药理活性部位.结果:当水提取物浓度为264μg/ml、直接水提取物浓度为57μg/ml.时,对2215细胞分泌HBeAg的抑制率分别为54.79%及54.09%,治疗指数(TI)＞2.结论:扯根菜水提取物和直接水提取物达到一定浓度时,在体外有一定的抗乙肝病毒作用.
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紫红獐牙菜醋酸乙酯部位体外抗乙型肝炎病毒作用的研究
目的观察紫红獐牙菜醋酸乙酯部位抗乙型肝炎病毒的作用.方法在对2215细胞大无毒浓度范围内,将含有不同浓度醋酸乙酯提取物的DMEM培养液加入2215细胞共同培养8天.采用固相放免实验方法,检测药物对2215细胞HBsAg和HBeAg表达的作用.结果供试品对乙型肝炎病毒转染的2215细胞培养液中HBsAg、HBeAg的选择指数(SI)分别为5.13和4.08.结论紫红獐牙菜醋酸乙酯部位在体外有抗HBV的作用.
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复方肝舒康抗乙肝病毒活性研究
目的:研究复方肝舒康各提取部位的体外抗乙肝病毒(HBV)作用.方法:取各萃取部位作用于乙肝病毒DNA转染人肝癌细胞系2215细胞,以细胞病变(CPE)考察药物对该细胞的毒性,采用酶联法(ELISA)检测药物对2215细胞分泌的表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)表达的抑制作用.结果:石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位的半数毒性浓度(TC50)分别为125、375、62.5 μg/mL.大无毒浓度(TC0)分别为62.5、125、31.3μg/mL；石油醚部位、乙酸乙酯部位对2215细胞的HBsAg表达抑制作用的半数有效浓度(IC50)分别为48.6、14.0μg/mL,对2215细胞的HBeAg表达抑制作用的半数有效浓度(IC50)52.4、19.7μg/mL,而正丁醇部位均大于125μg/mL.石油醚部位的治疗指数(TI)值分别为2.57和2.43,乙酸乙酯部位的治疗指数分别为26.7和19.04,正丁醇部位均小于2.结论:复方肝舒康提取物乙酸乙酯部位体外抗乙肝病毒的作用强,石油醚部位抗乙肝病毒作用较弱,正丁醇部位对乙肝病毒无作用.
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獐牙菜中(口山)酮类提取物抗HBV体外实验研究
目的:通过体外实验,探讨獐牙菜属植物抗HBV作用物质基础.方法:将贵州獐牙菜(口山)酮类提取物4、6分别作用于HBV DNA转染人肝癌细胞系2215细胞,通过检测第8 d的细胞培养液中HBsAg、HBeAg的变化来评价其抗HBV效果.结果:提取物4多数浓度对HBsAg、HBeAg表达有显著抑制作用(P＜0.05～0.01),测得对HBsAg、HBeAg的IC50分别为18.4μg/ml、22.8μg/ml;TI值分别大于6.8、5.5;提取物6多数浓度对HBsAg、HBeAg表达有极显著抑制作用(P＜0.01),测得对HBsAg、HBeAg的IC50分别为16.1μg/ml、32.7μg/ml,TI值分别大于15.5、7.6.结论:(口山)酮类提取物4、6为体外抗HBV的活性成分.
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十味溪黄草颗粒对乙型肝炎病毒的体外抑制作用
目的探讨十味溪黄草颗粒对乙型肝炎病毒的抑制作用.方法在乙型肝炎病毒基因转染的人肝癌细胞系2215细胞中,研究药物对细胞的毒性和对HBsAg和HBeAg分泌的抑制效果.结果十味溪黄草颗粒加入细胞培养8天两批实验对细胞的半数中毒浓度(TC50)平均为17.45±0.92mg/ml,大无毒浓度(TC0)为10±0mg/ml.10mg/ml对细胞分泌HBsAg平均抑制54.9±5.59%(P＜0.001),半数有效浓度IC50:6.37±0.40mg/ml,选择指数:2.74±0.17mg/ml.对细胞分泌HBeAg平均抑制81.0±3.05%(P＜0.001),半数有效浓度IC50为:2.14±0.20mg/ml,选择指数为:8.21±0.74mg/ml.结论十味溪黄草颗粒在2215细胞培养中对HBsAg、HBeAg的分泌有显著的抑制作用.
