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1-02 塞替派诱发永生化人支气管上皮细胞的恶性转化*
目的研究塞替派对人类上皮细胞的致癌转化效应.方法利用永生化人支气管上皮细胞(BEAS-2B)为基本细胞模型,首次进行了塞替派诱导BEAS-2B细胞的恶性转化实验;平行于细胞的转化进程研究了塞替派转化细胞(BEAS-TE)的增殖动力学、细胞周期和锚着独立生长能力等转化表型特征.结果经传代和软琼脂培养基筛选BEAS-TE已具有较为稳定的转化表型和细胞生物学特性,可能是具有较强裸鼠致瘤性的恶性转化细胞.结论塞替派对人支气管上皮细胞具有较强的恶性转化效应.
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激素受体表达在乳腺癌中的意义
乳腺癌的雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、原癌基因(cerbB-2)的检查结果与其内分泌治疗及预后有密切关系[1,2].在人类多种肿瘤特别是乳腺癌中可检测到癌基因的扩增,在一些恶性转化细胞中也有过度表达,我院采用生物素-过氧化酶(S-P)免疫组化法对3者进行了观测.结果报告如下.
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双向电泳分析结晶型NiS诱发人支气管上皮细胞恶变后的蛋白表达差异
[目的]建立双向凝胶电泳分析方法,比较结晶型NiS诱发人支气管上皮细胞恶变后的蛋白表达差异.[方法]采用一步法分别提取人支气管上皮细胞系16HBE细胞和结晶型NiS诱发该细胞系的恶性转化细胞N-2细胞的可溶性总蛋白,经双向凝胶电泳分离、银染显色、用双向电泳凝胶图像分析软件ImageMaster 2D 3.10分析两者之间可溶性蛋白的差异表达.[结果]获得了分辨率和重复性较好的双向电泳银染图谱.图像分析显示在恶性转化细胞中检测到19个新的蛋白点,同时有47个蛋白点消失,有140个蛋白点在两种细胞中表达量有显著差异,其中89个蛋白点在N-2细胞中表达升高,51个蛋白点在N-2细胞中表达降低.[结论]双向电泳技术分析NiS诱发细胞恶性转化后蛋白质组发生了变化,这将为镍致癌相关的蛋白的研究和鉴定奠定基础.
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化学致癌物转化细胞端锚聚合酶mRNA的表达
[目的]探讨3种化学致癌物诱发细胞恶变后tankyrase mRNA的表达.[方法]用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测正常细胞和恶性转化细胞tankyrasemRNA的表达.[结果]tankyrase mRNA在转化细胞中的表达高于正常细胞.[结论]3种化合物诱发的细胞恶性转化涉及了tankyrase活性改变,提示tankyrase mRNA高表达可能与化学致癌有关.
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MGMT基因启动子去甲基化抑制MNU诱导的人胃上皮细胞恶性转化的机制研究
目的:研究O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)在N-甲基亚硝基脲(MNU)诱导的人胃上皮细胞恶性转化中持续激活的分子调控机制。方法:建立MNU诱导的人正常胃上皮细胞(GES-1)恶性转化模型,real-time PCR和Western blot检测建模中1周、4周和8周MGMT的动态表达水平。报告基因实验检测MGMT启动子区的转录激活。 MSP和BSP定性定量检测MGMT基因启动子区CpG的甲基化程度。 ChIP实验检测DNA甲基化转移酶( DNMT1)和H3K9met3、H3K4met2在MGMT基因转录激活中的作用。 Soft agar、平板克隆及细胞增殖实验检测MGMT基因表达上调在GES-1细胞恶性转化中的功能。结果:MNU诱导的GES-1恶性转化细胞中,MGMT的表达持续激活,但MGMT启动子区报告基因并不被激活。 MNU刺激显著抑制MGMT基因启动子区CpG的甲基化水平,同时抑制DNMT1与MGMT基因的结合,而且调控基因转录抑制和转录激活相关的组蛋白修饰类型H3K9met3与H3K4met2在该区域的富集分别减少和增加。此外,MGMT基因的高表达,抑制MNU诱导的GES-1恶性转化细胞的增殖和克隆形成能力,利用MGMT特异性抑制剂O6-BG处理细胞,显著促进MNU诱导的细胞恶性转化进程。结论:MNU通过诱导MGMT基因DNA去甲基化,持续激活其表达。 MGMT的表达上调抑制MNU诱导的人胃正常上皮细胞恶性转化。本研究揭示了MGMT基因在MNU诱导的细胞恶性转化中的表达调控机制,为进一步研究化学致癌物诱发肿瘤发生提供了新的实验依据。