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胃癌MGMT基因启动子CpG岛甲基化与蛋白表达缺失
目的:探讨6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因启动子甲基化状况在胃癌发生、发展中的作用.方法:用甲基特异性聚合酶扩增链式反应检测20例正常胃黏膜组织、38例胃癌组织及癌旁正常组织DNA中MGMT基因启动子的甲基化状况,用免疫组化方法检测MGMT蛋白的表达情况.结果:19.1%(9/47)的肿瘤组织和10.6%(5/47)的癌旁正常组织存在MGMT基因启动子甲基化,正常胃黏膜组织均不存在甲基化.免疫组化发现有21.3%(10/47)的肿瘤组织MGMT蛋白失表达,其中7例(70.0%)存在启动子甲基化.胃癌中MGMT基因启动子高甲基化与MGMT蛋白表达缺失存在显著联系(P<0.001).结论:胃癌组织中存在一定程度的MGMT基因启动子高甲基化和MGMT蛋白表达缺失.胃癌发生过程中MGMT基因高甲基化可导致MGMT蛋白表达缺失,可能是胃癌发生的重要途径之一.
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MGMT阳性恶性脑胶质瘤病人的化疗(附51例体会)
O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)可使DNA烷基化损伤得到修复,是恶性胶质瘤对亚硝脲类药物及新药替莫唑胺[1,2](temozolomide,TMZ)产生耐药的主要原因[3-7].
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O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶与肿瘤预见性化疗新策略
克服肿瘤细胞的耐药性是化疗需要解决的重大课题.本项目通过分析20株中国人肿瘤细胞中O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(简写MGMT)的活性与对烷化剂亚硝脲耐药性的关系的实验;通过使用亚硝脲药物治疗移植高和低MGMT肿瘤细胞的荷瘤裸鼠实验;通过向对烷化剂亚硝脲敏感、耐药的细胞分别转导MGMT cDNA以及MGMT反义RNA的实验;证明肿瘤细胞中的MGMT水平决定了细胞对烷化剂、亚硝脲类药物的耐药性,MGMT高的肿瘤细胞耐药,MGMT低的细胞敏感.通过细胞和裸鼠实验证明链脲菌素(Streptozotocin,简写STZ)或O6-苄基鸟嘌呤(简写O6-BG)可以降低细胞内的MGMT活性,克服细胞对烷化剂亚硝脲的耐药性.在研究工作的基础上,我们提出了肿瘤预见性个体化化疗的新策略,即对MGMT低的肿瘤直接使用烷化剂亚硝脲化疗,对MGMT高的肿瘤首先使用链脲菌素降低MGMT酶活性,然后使用烷化剂亚硝脲化疗.
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DNA修复酶6-氧-甲基嘌呤-DNA甲基转移酶研究进展
Foote与Olsson等于1980年发现E.coli 6-氧-甲基嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT或AGT,EC2.1.1.63)与O6-甲基鸟嘌呤(O6mG)的修复有关.Kautianinen等又于1986年发现肿瘤转化株细胞内的MGMT活力成倍增高.随后,人们发现20%的人类肿瘤细胞系的MGMT活力下降,MGMT活力还与肿瘤的诱导及耐药性有关[1].
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AKT2 YAP MGMT在胶质瘤中的表达及相互作用机制的研究
胶质瘤(gliomas)起源于神经上皮组织,是为常见的中枢神经系统(CNS)原发性肿瘤。约有80%的胶质瘤属于Ⅱ~Ⅳ级,即都具有复发及恶变的潜能[1],由于多数胶质瘤病例呈弥漫浸润性生长,难以手术完全切除,化疗后引起的肿瘤耐药等因素使其具有复发率高的临床特点。胶质瘤发病机制至今尚未明确,近有关胶质瘤分子生物学研究使得对其分子机制及分子分型都有了进一步的了解。PI3K/AKT和Hippo分子信号转导通路都与胶质瘤的生物学行为有着密切的联系[2],关于两条通路中的主要效应因子在人脑胶质瘤中表达情况及相关性研究亦尚未见到,本研究通过检测这两条通路中的主要效应因子蛋白浸酶B (AKT2)和Yes相关蛋白(YAP)以及化疗相关指标06甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)在胶质瘤组织及正常脑组织中的表达情况,探讨AKT2、YAP、MGMT在各级别胶质瘤中的表达及意义。
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阿昔洛韦不良反应的循证医学评价
阿昔洛韦(aciclovir),又名无环鸟苷,是核苷类抗病毒药,主要用于带状疱疹病毒、单纯疱疹病毒引起的皮肤和粘膜感染,其口服生物利用度15%~30%,血浆半衰期约3小时,能广泛分布于各种组织和体液,以肺肾等组织的浓度高,在肝脏代谢为9-羟甲基鸟嘌呤或以原形经肾小球滤过和肾小管分泌而随尿排出.为了全面了解阿昔洛韦的不良反应,促进临床合理应用,现将1995~2004年报道该药的不良反应汇总如下.
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脑胶质瘤原代细胞药敏与O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶表达的相关性研究
肿瘤细胞对化疗耐药的机制复杂,涉及因素众多,目前研究较为深入的是DNA修复酶,O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)[1-3].我们采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法对同一标本MGMT进行检测,并与药敏结果进行相关性分析,根据其相关性指导临床选择敏感性药物,提高化疗疗效.
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三相寡核苷酸探针原位杂交方法研究
为探讨寡核苷酸探针技术在原位杂交应用中的敏感性和特异性,我们采用三相寡核苷酸探针对胃癌和胃溃疡手术切除标本进行甲基鸟嘌呤甲基转移酶基因(MGMT)检测,结果敏感性高,特异性强.
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MGMT基因的多态性与肿瘤的关联
6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA 甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase, MGMT)是一种高效的DNA直接修复酶,能修复DNA序列中的6-氧-甲基鸟嘌呤(O6-methylgunine, O6-mG)损伤,是人类细胞中迄今发现的唯一一种修复该损伤的甲基转移酶.近年来MGMT基因的多态性对肿瘤的化疗效果的影响已引起人们的重视,现就MGMT基因的生物学功能及其多态性与肿瘤的关联做一扼要综述.
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MGMT基因启动子去甲基化抑制MNU诱导的人胃上皮细胞恶性转化的机制研究
目的:研究O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)在N-甲基亚硝基脲(MNU)诱导的人胃上皮细胞恶性转化中持续激活的分子调控机制。方法:建立MNU诱导的人正常胃上皮细胞(GES-1)恶性转化模型,real-time PCR和Western blot检测建模中1周、4周和8周MGMT的动态表达水平。报告基因实验检测MGMT启动子区的转录激活。 MSP和BSP定性定量检测MGMT基因启动子区CpG的甲基化程度。 ChIP实验检测DNA甲基化转移酶( DNMT1)和H3K9met3、H3K4met2在MGMT基因转录激活中的作用。 Soft agar、平板克隆及细胞增殖实验检测MGMT基因表达上调在GES-1细胞恶性转化中的功能。结果:MNU诱导的GES-1恶性转化细胞中,MGMT的表达持续激活,但MGMT启动子区报告基因并不被激活。 MNU刺激显著抑制MGMT基因启动子区CpG的甲基化水平,同时抑制DNMT1与MGMT基因的结合,而且调控基因转录抑制和转录激活相关的组蛋白修饰类型H3K9met3与H3K4met2在该区域的富集分别减少和增加。此外,MGMT基因的高表达,抑制MNU诱导的GES-1恶性转化细胞的增殖和克隆形成能力,利用MGMT特异性抑制剂O6-BG处理细胞,显著促进MNU诱导的细胞恶性转化进程。结论:MNU通过诱导MGMT基因DNA去甲基化,持续激活其表达。 MGMT的表达上调抑制MNU诱导的人胃正常上皮细胞恶性转化。本研究揭示了MGMT基因在MNU诱导的细胞恶性转化中的表达调控机制,为进一步研究化学致癌物诱发肿瘤发生提供了新的实验依据。
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DNA甲基化参与细胞恶性转化过程中MGMT基因的表达调控
目的:研究O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶( MGMT)在N-甲基亚硝基脲( MNU)诱导的人胃正常黏膜上皮细胞GES-1恶性转化中的表达变化,明确其转录激活的分子机制。方法:建立MNU诱导的GES-1细胞恶性转化模型,动态分析MGMT的表达、启动子转录激活、DNA甲基化、组蛋白修饰变化及其表达改变在GES-1细胞恶性转化中的作用。结果:MNU暴露持续激活MGMT的表达。 MGMT高表达细胞的增殖和克隆形成能力显著下降。甲基化特异性PCR显示MGMT基因甲基化水平下降,亚硫酸氢盐基因组测序证实其启动子区呈显著低甲基化。免疫共沉淀分析发现DNA甲基化转移酶( DNMT1)与MGMT基因的结合减少,组蛋白特异性修饰H3K9met3和H3K4met2均参与调控其表达。结论:MGMT的表达上调抑制化学致癌剂MNU诱导的细胞恶性转化,MGMT的持续激活依赖于其启动子区DNA的低甲基化。
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MGMT基因在脑胶质瘤治疗中的意义
胶质瘤是颅内肿瘤中发病率高的肿瘤,目前临床上多采取以手术治疗为主辅以化学治疗和放射治疗.氯乙基亚硝脲类烷化剂(CNUs),以其高脂溶性和易于透过血脑屏障的特性,长期以来被看为治疗脑胶质的有效的化疗药物.但抗药性的产生使其临床有效率不足30%,而成为脑胶质瘤化疗失败的主要原因.06-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)修复亚硝类药物所造成的DNA损伤,是肿瘤细胞对亚硝类耐药的主要分子机制[1].有研究表明,73%的脑肿瘤有MGMT的表达[2];且MGMT活性与抗药性呈正相关,降低细胞中MGMT的活性将会逆转细胞的耐药表型,增强亚硝类药物的抗肿瘤效果[3].因此,探索抑制细胞内的06-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)基因表达水平的有效方法,对于提高脑胶质瘤的化疗效果具有重要的临床意义.