首页 > 文献资料
-
微流控芯片电泳技术检测肿瘤患者血浆中p16基因甲基化的应用
p16基因甲基化是癌症诊断的标志物之一.目前检测p16基因甲基化的甲基化特异性聚合酶链反应法(MSP)[1]灵敏度有限,对血浆中脱落肿瘤细胞少的标本易报告为假阴性.而微流控芯片电泳技术具有高灵敏度、成本低、分析速度快等特点[2].本研究用微流控芯片电泳技术检测肿瘤患者血浆中p16基因异常甲基化,并探讨其临床应用价值.
-
SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测DNA甲基化方法的建立
近期,表观遗传学与肿瘤发生关系的研究日益增多[1-2].DNA甲基化是表观遗传学的重要组成部分,并已成为肿瘤早期诊断的研究热点.甲基化特异性PCR(MSP)是检测DNA甲基化的常用方法之一[3],该方法灵敏度和特异度高,但操作繁琐,难以自动化.TaqMan荧光定量PCR法,即Methylight在MSP的基础上设计1条TaqMan探针,该方法的准确性和检测的灵敏度都很高.然而,因需要设计合成特异的探针而使其的应用受限[4],而且TaqMan探针昂贵[5].本研究建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR(FQ-PCR)检测DNA甲基化的方法,通过临床标本检测和对比试验,以证明其与Methylight的检测效能,以便为DNA甲基化检测的临床应用提供工具.
-
甲基化特异性PCR检测脆性X综合征患者FMR1基因甲基化的应用价值
脆性X综合征95%以上患者的致病分子机制是由于脆性X智力低下基因1(Fragile X mental retardation 1 gene,FMRI)5'端非翻译区一段不稳定的三核苷酸重复序列(CGG)异常扩增;和该基因上游启动子区域CpG岛的异常甲基化,使FMR1基因失活,而产生智力低下等系列脆性X综合征临床症状的疾病.我们用甲基化特异性PCR检测先天性智力低下患儿FMR1基因CpG岛的甲基化状况,并分析其在诊断脆性X综合征中的价值.现报告如下.
-
胰癌组织p15、p16抑癌基因CpG岛甲基化
目的:检测胰腺癌中p15、p16基因CpG岛的异常甲基化情况,分析其与胰腺癌发生、发展的关系;探索其在临床早期基因诊断和治疗中的意义以及与胰腺癌病理生理特征的相关性.方法:运用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP),对29例胰腺癌和3例慢性胰腺炎的石蜡组织、2例正常肝组织、以及12例正常成人外周血白细胞DNA的p15、p16抑癌基因启动子区CpG岛甲基化状态进行了检测.结果:对照组p16、p15基因CpG岛甲基化扩增均呈阴性,非甲基化扩增均阳性.胰腺癌中p16、p15基因CpG岛甲基化阳性率分别为37.9%和27.5%,p16、p15基因CpG岛甲基化总检出阳性率为:44.8%.癌组织中同时存在p16、p15基因CpG岛异常甲基化为6例.结论:胰腺癌p15、p16基因CpG岛甲基化是早期事件,可试作为早期基因诊断的分子标志,有可能尝试进行基因治疗.p16、p15基因CpG岛异常甲基化,同患者的病理特征无明显的相关关系.
-
大肠癌组织微卫星不稳与hMLH1和hMSH2基因启动子区甲基化状态
目的:探讨大肠癌组织微卫星DNA不稳与hMLH1和hMSH2基因启动子区甲基化状态的关系.方法:采用PCR为基础的方法检测微卫星DNA不稳;采用甲基化特异性PCR方法检测hMLH1和hMSH2基因启动子区的甲基化状态.结果:正常大肠黏膜未见hMLH1和hMSH2基因启动子区的高甲基化.76例大肠癌中检出hMLH1高甲基化8例,占10.5%,而且均为去甲基化和高甲基化并存,未见有hMSH2高甲基化者.检出MSI 20例,检出率为26.3%.将MSI分为高频率MSI(MSI-H,≥2个位点)10例、低频率MSI(MSI-L),仅为1个位点10例和MSI阴性(MSS)56例三组,结果右侧大肠癌hMLH1高甲基化检出率(23.1%)显著高于左侧大肠癌(4.0%,P<0.05).MSI-H组hMLH1高甲基化的检出率(8/10)显著高于MSI-L(2/10)和MSS组(6/56,P<0.01-0.001).结论:hMLH1高甲基化与右侧大肠癌的发生有关,可能参与了MSI病理途径,而hMSH2甲基化状态可能与MSI途径无关.
-
抑癌基因p16和RASSF1A启动子甲基化与乳头状甲状腺癌的相关性研究
乳头状甲状腺癌(PTC)是甲状腺常见的恶性肿瘤,目前国外有少量研究报道甲状腺癌的发生与p16和RASSF1A两种抑癌基因启动子的高甲基化密切相关[1-2],本研究采用RT-PCR和甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)法对PTC及对照组织进行研究,以探讨这两种抑癌基因启动子的高甲基化与PTC的发生是否有关.
-
肺癌细胞株抑癌基因启动子CpG岛甲基化与转录的关系
基因特别是抑癌基因启动子区CpG岛甲基化与非小细胞肺癌(NSCLC)发生发展关系的研究正受到越来越多的重视.本研究用甲基化特异性的PCR(MSP)测NSCLC细胞株中12个肿瘤相关基因的甲基化发生情况,并观察甲基化与mRNA转录之间的关系,以进一步阐明抑癌基因甲基化在NSCLC中的作用.
-
PCDH10基因在前列腺癌组织中的甲基化测定及临床意义
目的 检测PCDH10基因在前列腺癌组织中的甲基化状态,并分析其临床意义.方法 应用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)技术检测PCDH10基因在3株前列腺癌细胞系、1株前列腺上皮细胞、13例前列腺增生组织和40例前列腺癌组织样本中的甲基化情况,同时分析40例前列腺癌患者的临床资料.结果3株前列腺癌细胞系中有2株检出PCDH10基因甲基化;40例前列腺癌样本中24例(60%)检出PCDH10基因甲基化,13例前列腺增生组织中未检出PCDH10基因甲基化.PCDH10基因出现甲基化患者与未出现甲基化患者相比,在年龄、前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)和临床分期等指标的差异无统计学意义(P>0.05),但在Gleason评分的差异存在统计学意义(P<0.05).结论 PCDH10基因在前列腺癌组织中甲基化程度较高,高Gleason评分的前列腺癌可能具有更高的PCDH10基因甲基化率,提示PCDH10基因甲基化可能与前列腺癌的发生发展有关.
-
慢性粒细胞白血病患者死亡相关蛋白激酶基因甲基化
死亡相关蛋白激酶(DAPK)是一种新发现的抑癌基因,编码蛋白为钙调蛋白依赖的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶[1].DAPK是一种正性细胞凋亡调节因子,通过多种途径诱导肿瘤细胞凋亡.动物实验结果表明DAPK能够在肿瘤发育的早期阶段抑制细胞转化、并且能够抑制晚期转移事件[1].此外,对造血系统肿瘤的研究揭示伯基特淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、急性髓系白血病、骨髓增生异常综合征、慢性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤存在着较高频率的DAPK基因启动子甲基化[2-3].目前对慢性粒细胞白血病(CML)的相关研究甚少,我们应用甲基化特异性PCR(MSP)对CML患者DAPK基因启动子甲基化状况进行了检测,现将结果报道如下.
-
甲基化特异性微阵列法定量检测恶性血液病患者p16基因甲基化
DNA甲基化是细胞的一种表观遗传现象,也是一种重要的影响基因表达的机制.当DNA异常甲基化时会导致癌基因的激活和抑癌基因的沉默,促使肿瘤的发生[1].
-
甲基化特异性PCR检测肺癌p16基因甲基化及其临床意义
目的:探讨甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSPCR)在肺癌临床诊断中的应用价值.方法:选取56例肺部疾病住院患者手术切除的病变肺组织和相应的支气管肺泡灌洗液(BALF)及痰标本,其中32例为肺癌,24例为良性肺部疾病.标本经一般处理,PCR扩增后,产物经电泳EB染色,紫外灯下观察.结果:32例肺癌组织标本中,14例(43.8%)在p16基因启动子区域呈现异常甲基化,其中9例(64.3%)在相应的BALF中检测出甲基化存在,5例(35.8%)在相应的痰标本中也检测出甲基化存在.24例良性肺部疾病,其中肺囊肿10例,肺结核14例,手术切除标本和BALF及痰标本中均未检测出p16基因甲基化存在.结论:MSPCR技术对肺癌患者BALF及痰标本中的异常甲基化检测具有高度特异性,是一项有潜力的肺癌早期诊断新技术.
-
WIF-1基因甲基化及Wnt-5 a蛋白在软骨肉瘤病人中表达的临床意义
目的:研究WIF-1基因甲基化及Wnt-5a蛋白在软骨肉瘤病人中的表达情况,探讨二者在软骨肉瘤病人中的临床意义。方法:选取我院病理科2008-06~2012-06收治的软骨肉瘤病人43例,另选取软骨瘤病人43例作为对照。收集病人的病历资料及临床病理表现,通过甲基化特异性PCR检测法及免疫组织化学方法,监测两组病人WIF-1基因和Wnt-5a蛋白表达情况。结果:软骨肉瘤WIF-1基因甲基化阳性率高于软骨瘤,比较差异具有统计学意义(χ2=5.658,#P=0.003);软骨肉瘤Wnt-5a蛋白表达阳性率高于软骨瘤,比较差异具有统计学意义(χ2=4.656,*P=0.006)。黏液型软骨肉瘤Wnt-5a蛋白表达阳性率明显高于普通型软骨肉瘤,差异具有统计学意义(χ2=4.941,#P=0.002)。发生浸润转移的软骨肉瘤病人Wnt-5a蛋白表达阳性率高于未发生浸润转移的病人(χ2=4.681,P=0.003)。结论:WIF-l基因的甲基化可能导致Wif-l蛋白表达下降,在软骨肉瘤早期作用;Wnt-5a蛋白表达可能使肿瘤更具有侵袭性,二者可能存在协同作用。
-
食管癌患者血清中RAS相关区域家族1A基因甲基化检测及其临床意义
食管癌是常见的恶性肿瘤之一.早期诊断可使患者获得及时手术根治的机会.检测患者外周血肿瘤特异性DNA改变为肿瘤早期诊断和监控提供一种有效手段.我们应用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)方法,检测食管癌患者血清中RAS相关区域家族1A(RASSF1A)基因的甲基化状况,探讨其与食管癌临床病理特征的关系及其在食管癌诊断和预后判断中的价值.
-
改良的甲基化特异性多聚酶链反应检测肝细胞癌基因甲基化
甲基化特异PCR(methylation-specific PCR,MSP)技术利用了PCR灵敏、快速、简便的特点,已经成为当前筛选DNA甲基化的常用方法之一.但该方法操作繁琐,化学修饰后的DNA质量差,不易保存和PCR扩增[1],有待进一步改进.
-
散发性乳腺癌中BRCA1基因甲基化状态与其mRNA表达水平的相关研究
目的:探讨山东半岛地区散发性乳腺癌中BRCA1基因异常甲基化状态及其与mRNA表达的关系,进而研究其BRCA1基因异常的表观遗传学作用.方法:用甲基化特异性PCR和RT-PCR等方法研究乳腺癌组织、癌旁正常组织及乳腺良性肿瘤中BRCA1基因启动子甲基化状态及其mRNA表达水平.结果:在30例散发性乳腺癌中,BRCA 1基因甲基化率为43%,BRCA 1 mRNA表达下降率为33%.在13例BRCA1发生甲基化的癌组织标本中,BRCA1 mRNA的表达下降率为55%,而在17例BRCA 1未发生甲基化的癌组织中,BRCA1 mRNA的表达下降率为18%.在肿瘤分级中,T3分级病人的肿瘤组织中BRCA1甲基化率(74%)和mRNA表达下降率(54%),均分别高于T1+T2分级病人肿瘤组织的BRCA1甲基化率(26%)和mRNA表达下降率(30%);有淋巴结转移病人的肿瘤组织中,BRCA1甲基化率(61%)和mRNA表达下降率(46%),均分别高于无淋巴结转移的甲基化率(17%)和mRNA表达下降率(16%).结论:BRCA 1基因表观遗传学改变是其mRNA表达下降乃至失活的重要原因,且与散发性乳腺癌的恶性程度及淋巴结转移的发生密切相关.
关键词: BRCA1基因 DNA甲基化 逆转录-聚合酶链反应 甲基化特异性 散发性乳腺癌 -
甲基化特异性PCR检测胃癌p16基因甲基化及其临床意义
目的初步探讨甲基化特异性聚合酶链反应(MSPCR)在胃癌临床诊断中的应用价值.方法选取47例胃癌患者的癌组织及配对的癌旁组织,11例远离肿瘤的正常胃黏膜组织.标本经一般处理,PCR扩增后,产物经电泳EB染色,紫外灯下观察.结果47例胃癌组织标本中,22例(46.2%)在p16基因的启动子区域呈现异常甲基化;47例癌旁组织标本中,28例(58.6%)也检测出甲基化存在;11例正常胃黏膜组织标本中均未检测出p16基因甲基化存在.结论MSPCR技术对胃癌患者组织标本中的异常甲基化检测具有高度特异性,是一项具有潜力的胃癌早期诊断新技术.
-
p33生长抑制基因1b启动子甲基化检测方法的建立与评价
琼脂糖珠包埋DNA修饰结合巢式-甲基化特异性PCR(nMSP)可提高检测的敏感性[1].我们应用该方法检测大肠癌细胞株中p33生长抑制基因1b(p33ING1b)启动子甲基化.
-
RASSF1A基因在膀胱癌组织中的转录表达及其启动子甲基化状态的研究
Ras相关区域家族1A(RASSF1A)是2000年从3号染色体短臂(3p21.3)上克隆出来的新型候选抑癌基因[1].我们采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)和甲基化特异性PCR(MSP)检测正常膀胱组织及膀胱癌组织中RASSF1 A基因的表达及其启动子甲基化的状态,探讨RASSF1A基因与膀胱癌生物学行为间的关系.
-
肝细胞癌GSTP1基因启动子区甲基化的研究
基因启动子区异常甲基化抑制转录是基因失活的又一机制,也是人类肿瘤发生的重要机制之一[1].肝细胞癌(HCC)发生的分子机制仍不十分清楚.我们采用甲基化特异性PCR(MSP法)检测了HCC中GSTP1基因启动子甲基化,探讨其在HCC发生中作用.
-
膀胱癌上皮钙粘素基因启动子甲基化的研究
有研究表明上皮钙粘素(E-CD)基因(CDH1)启动子异常甲基化是该基因表达下调的原因之一[1].为探讨膀胱癌CDH1基因表达减低的机制,我们采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测39例膀胱癌组织中CDH1基因启动子甲基化的状况,同时检测肿瘤组织中上皮钙粘素蛋白的表达.