鼻咽癌中hMLH1基因甲基化及其蛋白表达的临床意义

目的：观察鼻咽癌组织中hMLH1基因启动子区甲基化状态及其对蛋白表达的影响，并分析甲基化及蛋白表达与临床病理特征的关系。方法采用甲基化特异性定量PCR检测鼻咽癌组织及鼻咽慢性炎症组织中hMLH1的甲基化状态。应用免疫组化法检测hMLH1蛋白表达情况。结果鼻咽癌组织和鼻咽慢性炎症组织中 hMLH1基因甲基化阳性率分别为77.8%（57/63）、8.3%（1/12）（P＜0.001）。hMLH1蛋白表达下调/缺失率分别为71.4%（45/63）、8.3%（1/12）（P＜0.001）。hMLH1基因甲基化阳性率与鼻咽癌的临床分期、组织分化程度、肿瘤直径、淋巴结转移无明显相关性（P＞0.05），hMLH1蛋白表达与鼻咽癌的淋巴结转移具有相关性（P＜0.05）。结论 hMLH1甲基化及其蛋白表达与鼻咽癌关系密切，并且甲基化影响其蛋白表达。

结直肠癌AREG基因的表达与甲基化水平

目的:检测双调蛋白(amphiregulin,AREG)在结直肠癌组织中的表达水平及其启动子区甲基化水平,分析AREG基因与结直肠癌发生发展的关系,以探讨其在结直肠癌诊断治疗中的意义.方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测基因在145例结直肠癌组织及145例癌旁正常组织中的表达；甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific polymerase chain reaction,MSP)技术检测AREG基因启动子区甲基化水平.结果:AREG基因在癌组织与正常组织中的相对表达量分别为(2.214±0.802)和(0.834±0.356),癌组织与正常组织的表达水平差异显著,AREG的高表达与患者年龄及肿瘤的分化程度密切相关(P<＜0.05).甲基化特异性PCR结果显示癌组织基因启动子区甲基化发生率(11.7％),明显低于正常组织甲基化发生率(67.6％).结论:AREG基因的高表达与结直肠癌患者的年龄及肿瘤细胞分化程度密切相关,其高表达可能与启动子区去甲基化有关.

抑癌基因p16和RASSF1A启动子甲基化与乳头状甲状腺癌的相关性研究

乳头状甲状腺癌(PTC)是甲状腺常见的恶性肿瘤,目前国外有少量研究报道甲状腺癌的发生与p16和RASSF1A两种抑癌基因启动子的高甲基化密切相关[1-2],本研究采用RT-PCR和甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)法对PTC及对照组织进行研究,以探讨这两种抑癌基因启动子的高甲基化与PTC的发生是否有关.

膀胱癌和肾癌组织中RASSF1A基因的甲基化改变

目的研究RASSF1A基因启动子的甲基化状态及在膀胱癌和肾癌发生中的作用.方法采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测45例手术切除的膀胱癌组织和相应癌旁正常组织标本、9例电切膀胱癌组织、3例非肿瘤患者正常膀胱组织、12例肾癌组织和相应癌旁正常组织标本中RASSF1A基因的甲基化情况.结果膀胱癌组织中RASSF1A基因异常甲基化55.6%(30/54),其中手术切除组57.8%(26/45),电切癌组织异常甲基化4例,癌旁正常组织基因异常甲基化1例;肾癌组织中基因异常甲基化66.7%(8/12),相应癌旁正常组织中未发现基因甲基化.3例正常膀胱组织标本中未发现基因异常甲基化.膀胱癌组织中RASSF1A基因甲基化率有随组织分期升高的趋势,但与临床病理参数间无明显相关性.结论膀胱癌和肾癌组织中RASSFIA基因启动子高度甲基化,表明该基因甲基化可能与2种肿瘤的发生相关.

子宫内膜癌中E-cadherin基因启动子甲基化研究

目的探讨子宫内膜癌中E-cadherin基因启动子甲基化与蛋白表达的关系.方法采用甲基化特异性PCR(MSP)和免疫组化SP法检测12例正常子宫内膜、42例子宫内膜癌组织中E-cadherin基因启动子甲基化和蛋白表达.结果 E-cadherin基因启动子甲基化率为35.7%,蛋白阳性率为42.9%,甲基化与蛋白表达呈负相关,二者均与癌细胞分化程度相关.结论 E-cadherin基因启动子甲基化导致蛋白表达异常,参与子宫内膜癌的发生发展.

To explore whether methylation of the CpG island in the promoter of the p16 tumor suppressor gene was associated with clinicopathological characteristics of the colorectal cancer patients. Methods: Methylation- specific PCR (MSP) was used to detect p16 methylation of the colorectal cancer patients. Results: In 58 sporadic colorectal cancer, 43.1% of the tumors had detectable p16 methylation. Dukes' stage was associated with p16 methylation status. Dukes C, D patients (75%) were more likely to contain methylated p16 compared with Dukes A, B patients (13.3%). Conclusion: p16 methylation plays a role in the carcinogenesis of a subset of colorectal cancer. P16 methylation might be considered as a prognostic indicator.

结直肠癌中PAQR3甲基化水平及mRNA表达的研究

目的：研究结直肠癌组织中抑癌基因PAQR3 mRNA表达情况及甲基化水平，探讨PAQR3基因异常甲基化与结直肠癌的关系。方法收集结直肠癌及正常组织标本54组，用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测结直肠癌标本中PAQR3 mRNA表达水平；用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）法检测结直肠癌标本中PAQR3基因甲基化水平，用以分析PAQR3甲基化水平与临床病理资料的关系。结果54组结直肠癌标本中PAQR3 mRNA表达降低发生率为57.4%（31/54），正常组织PAQR3 mRNA表达降低发生率为18.5%（10/54），表达差异有统计学意义（P=0.000）；癌组织PAQR3基因启动子甲基化发生率为33.3%（18/54），正常组织PAQR3基因启动子甲基化率为5.6%（3/54），二者差异有统计学意义（P=0.000）；PAQR3基因甲基化与年龄、分化程度、浸润深度、临床分期、淋巴结转移有关，与性别、部位无关。结论结直肠癌组织中PAQR3表达降低，与其基因启动子发生高甲基化有关。

非霍奇金淋巴瘤中p73基因甲基化与mRNA表达的相关性研究

目的：探讨NHL中p73基因启动子甲基化与其 mRNA 表达的相关性。方法：用甲基化特异性PCR(MSP)方法对24例非霍奇金淋巴瘤(NHL)p73基因启动子的甲基化状况进行检测，用 RT-PCR检测其mRNA表达。结果：24例NHL中21例发生甲基化，甲基化阳性率87.5%；对照组均未出现甲基化。24例NHL中20例p73 mRNA阴性表达，占83.33%，对照组 p73 mRNA 表达阳性。结论：在NHL中p73 mRNA表达下调，且p73基因表达与p73基因启动子的甲基化呈显著负相关；p73基因启动子的甲基化可能是造成p73基因表达下调进而导致NHL发病的原因之一。

子宫内膜癌组织中FHIT基因启动子区域CpG岛甲基化状况的研究

目的:检测子宫内膜癌组织中FHIT基因启动子区域CpG岛的甲基化状况,分析其与临床病理特征之间的关系,探讨FHIT基因启动子区域CpG岛的甲基化在子宫内膜癌发生发展中的作用.方法:采用甲基化特异的PCR方法对亚硫酸氢盐修饰过的35例子宫内膜癌组织、癌旁组织及患者自身外周血白细胞DNA和20例非癌患者子宫内膜组织DNA的FHIT基因启动子区域CpG岛的甲基化状况进行分析.结果:癌组织中FHIT基因启动子区域CpG岛的甲基化率为25.71%,癌旁组织和外周血中也存在相似的甲基化率.非癌患者的子宫内膜组织中FHIT基因的CpG岛无甲基化.癌组织与非癌患者子宫内膜组织的甲基化率之间的差异有统计学意义(P＜0.05).DNA甲基化与临床病理特征之间无相关性.FHIT基因启动子区域CpG岛的甲基化为子宫内膜癌发生中的早期事件.结论:子宫内膜癌组织中存在FHIT基因启动子区域CpG岛的甲基化,CpG岛的甲基化与临床病理特征之间无相关性.DNA甲基化为子宫内膜癌发生中的早期事件.癌旁组织和外周血可用于癌相关基因启动子区域CpG岛甲基化的检测.

肺癌细胞株E - cadherin的表达状态及其与启动子甲基化的关系

[目的]研究肺癌细胞株上皮钙粘蛋白(E - cadherin)的表达与基因启动子甲基化状态的关系.[方法]采用免疫细胞化学法检测肺癌细胞株NCI - H460、SPCA和A549的E- cadherin蛋白表达；半巢式甲基化特异性PCR法(MSP)和微流控芯片技术检测E- cadherin基因启动子甲基化状态.[结果]E- cadherin蛋白在NCI - H460、SPCA和A549肺癌株均呈弱表达,以A549细胞株表达低；MSP法和微流控芯片技术在三种细胞株中均检测到E - cadherin基因启动子的甲基化,以A549细胞株启动子甲基化程度高,二者结果相符.[结论]E- cadherin基因启动子甲基化可能是肺癌细胞株NCI - H460、SPCA和A549出现E- cadherin蛋白表达下调的原因.

甲基化在肺癌中的意义

目的 探讨基因T-钙黏蛋白(CDH13)在40例癌组织,40例的癌旁组织标本和非肺癌良性肺切除组织标本15例作为对照的表达的临床意义,进一步研究其基因异常甲基化与肺癌的相关性.方法 采用特异性甲基化PCR(MSP)检测该基因在肺癌组织中异常甲基化的水平.结果 1.在肺癌组织中CDH13基因甲基化率明显高于癌旁组织和非肺癌良性肺切除组织,甲基化率分别为32.5%、7.5%、6.7%,有统计学意义(P＜0.05).2.CDH13基因异常甲基化和CDH13的表达水平呈负相关性(r=-0.520).3.CDH13基因启动子区5'CpG岛甲基化阳性率在肺癌组织中显著高于癌旁组织和非肺癌良性肺切除组织,CDH13基因启动子区5'CpG岛甲基化导致了CDH13的表达下调.结论 在肺癌组织中CDH13基因异常甲基化率明显升高且有临床诊断意义,CDH13基因在癌组织中的异常甲基化水平将有望成为肺癌新的治疗靶点.

MSP对COPD大鼠肺泡巨噬细胞氧化应激和细胞因子产生的影响

目的:探讨巨噬细胞刺激蛋白(MSP)对COPD大鼠肺泡巨噬细胞氧化应激和细胞因子产生的影响.方法; 培养正常和COPD大鼠肺泡巨噬细胞,予不同浓度MSP干预,采用酶联免疫法检测细胞上清液中细胞因子TNF-α、IL-8、IL-1β和IL-10的浓度,比色法检测细胞上清液中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的水平.结果:经MSP处理后,正常大鼠和COPD大鼠肺泡巨噬细胞分泌TNF-α、IL-8、IL-1β和IL-10呈浓度依赖性增加,而COPD大鼠肺泡巨噬细胞上清液中TNF-α、IL-8和IL-1β浓度较正常大鼠增加更显著.MSP呈浓度依赖性刺激正常和COPD大鼠肺泡巨噬细胞分泌MDA增加,抑制其SOD的产生,而COPD大鼠肺泡巨噬细胞上清液中SOD水平较正常大鼠降低更加明显.结论:MSP能显著增加COPD大鼠肺泡巨噬细胞分泌TNF-α、IL-8和IL-1β,抑制其产生SOD.提示MSP在COPD的发病机制中可能起重要作用.

PRDM5基因甲基化及在HTB-182、A549中的表达

目的:本实验检测PRDM5在HTB-182、A549、HBE正常支气管上皮细胞系中甲基化状态及去甲基化处理对其表达的影响.方法:运用MSP甲基化特异性PCR检测PRDM5在A549、HTB-182和HBE正常支气管上皮细胞系的甲基化状态,再加入不同浓度的去甲基化药物检测PRDM5在A549、HTB-182和HBE正常支气管上皮细胞的甲基化状态,用RT -PCR检测PRDM5在加药前后的mRNA表达水平；用Western-Blot检测PRDM5在加药前后的蛋白表达水平.结果:在肺肿瘤细胞系中,PRDM5存在不同程度的高甲基化,加入不同浓度去甲基化药物后,甲基化表达水平逐渐减弱(P＜0.05),mRNA表达水平逐渐增强(P＜0.05),蛋白表达水平也逐渐增强(P＜0.05).结论:在肺癌细胞系中PRDM5启动子高甲基化是导致PRDM5表达水平降低的主要原因,PRD-M5启动子去甲基化可能成为肺癌治疗的新靶点.

抑癌基因PTEN及DAPK启动子甲基化在急性白血病中的表达及其意义

目的:探讨第10号染色体缺失性磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)phosphatase and tensin homology deleted on chromosome 10和死亡相关蛋白激酶(DAPK)death-associated protein kinase在急性白血病中的表达及其意义.方法:采用甲基化特异性PCR (MSP)检测47例急性白血病患者、26例健康对照组外周血中PTEN和DAPK启动子甲基化的表达及化疗后患者达完全缓解PTEN和DAPK启动子甲基化的表达.结果:PTEN和DAPK启动子甲基化在ALL和AML中的表达水平均明显高于对照组,且差异有显著性(P均＜0.05).结论:PTEN和DAPK启动子甲基化的高表达可能与急性白血病的发生发展相关.PTEN和DAPK启动子甲基化在急性白血病的早期诊断与靶向治疗中起到了重要的作用.

宫颈癌APC基因启动子甲基化与其临床病理特征的关系

背景与目的:腺瘤性结肠息肉病(adenomatous polyposis coli,APC)基因是Wnt信号传导通路中重要的抑痛基因,其启动子区CpG岛高甲基化引起的基因失活可导致Wnt信号传导通路异常,与多种肿瘤有关.APC基因启动子甲基化与宫颈癌的关系研究较少.本研究检测宫颈癌标本中APC基因启动子甲基化状态,并分析其与临床病理特征及高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染的关系,探讨APC基因启动子甲基化与宫颈癌的关系.方法:运用甲基化特异性PCR(MSP)检测95例宫颈癌标本及对照组20例正常宫颈组织的APC基因启动子甲基化状态,并分析APC基因甲基化状态与不同临床病理特征及高危型HPV感染之间的联系.结果:宫颈癌组APC基因甲基化率明显高于正常对照组(分别为56.8%,10%,P<0.01).宫颈癌APC基因甲基化检测和高危型HPV DNA检测结果有较好的一致性(Kappa=0.348,P<0.001).腺癌组甲基化率较鳞癌组高(分别为74.1%,50.096,P<0.05).APC甲基化阳性率随肿块增大及淋巴结转移而增高(P<0.05).不同年龄、FIGO临床分期、WHO病理分级、肿瘤侵犯深度和APC基因甲基化未见明显关系(P>0.05).结论:宫颈癌APC基因启动子甲基化与高危型HPV具有良好的一致性.APC基因启动子高甲基化为频发事件,并与不同宫颈癌病理类型相关,可作为宫颈癌诊断及分型的生物学标志物.

肺癌E-cadherin基因启动子CpG岛甲基化与蛋白表达的关系及其意义

背景与目的:目前认为CpG岛甲基化导致转录抑制是恶性肿瘤发生的重要机制之一.E-cadherin能抑制肿瘤细胞的浸润和转移,被公认为是浸润、转移抑制基因.本研究检测肺癌组织中E-cadherin基因启动子CpG岛甲基化的状况,并探讨基因异常甲基化与蛋白表达的关系及其意义.方法:采用甲基化特异性PCR技术,检测22例肺癌组织,相应的癌旁组织和9例正常肺组织中E-cadherin基因启动子CpG岛甲基化的状况.采用免疫组化S-P法相应检测了E-cadherin蛋白的表达.结果:肺癌中E-cadherin基因启动子CpG岛完全甲基化率为13.6%(3/22),部分甲基化率为27.3%(6/22),总甲基化率为40.9%(9/22),显著高于相应癌旁组织中该基因的甲基化率9.1%(2/22) (P＜0.05).9例正常肺组织中未检测到此基因的甲基化(0/9).22例癌组织中E-cadherin蛋白表达减弱或缺失率59.1%(13/22),显著高于相应癌旁组织蛋白表达减弱缺失率27.3%(6/22).肺癌组织中发生甲基化者蛋白表达率及强度明显低于未甲基化者.结论:肺癌组织中存在E-cadherin基因启动子CpG岛的异常甲基化,E-cadherin基因启动子CpG岛的异常甲基化可能是E-cadherin蛋白表达下调的主要原因.

大肠癌p16抑癌基因甲基化及与Dukes分期的关系

目的检测大肠癌患者p16基因启动子CpG区甲基化的改变,探讨其与大肠癌发生、发展和临床资料的关系.方法采用甲基化特异PCR技术(MSP法)研究58例大肠癌标本p16基因甲基化改变,分析临床病理资料.结果 25例标本(43.1%)呈p16 CpG区甲基化阳性;Dukes C、D期病人p16 CpG区甲基化发生率(75%)明显高于Dukes A、B期病人(13.3%).结论 p16启动子区甲基化导致p16抑癌基因失活参与了大肠癌的发生和发展;p16甲基化可能可以作为估计大肠癌病人预后的一个指标.

肺癌患者血清P16基因甲基化检测意义

肺癌是严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一,肺癌的早期诊断对其治疗效果十分重要.p16基因是一种重要的抑癌基因,研究肺癌中p16基冈启动子区CpG岛甲基化的发生状态具有很大的临床意义[1].用于检测CpG岛甲基化的特异聚合酶链反应(methylation specific PCR,MSP)方法 ,为DNA甲基化的研究提供了新手段.本文采用MSP技术检测肺癌患者全血中p16基因的甲基化情况,探讨其与肺癌发生发展的关系和作为肺癌早期诊断指标的可能性,现报道如下.

甲状腺乳头状癌钠碘同向转运体基因启动子区域CpG岛异常甲基化状态检测及其意义

目的 通过检测甲状腺乳头状癌中钠碘同向转运体(NIS)基因的启动子区域甲基化状态及其与各项临床指标之间的关系,探讨NIS基因甲基化在甲状腺乳头状癌发病过程中的地位、作用和相关机制.方法 取2007年5～7月手术切除的甲状腺乳头状癌及正常组织标本各11份,液氮保存.针对NIS-L区域设计新的甲基化特异PCR(MSP)引物,对所有亚硫酸氢钠修饰后的甲状腺癌及对照组织标本DNA进行MSP检测,比较肿瘤和对照甲状腺组织的NIS-L甲基化状态,分析其与有关临床指标之间的相关性.结果 实验发现11例甲状腺癌中NIS-L区域CpG岛甲基化率达81.8%(9/11),与肿瘤直径存在相关性,与年龄、性别、AJCC分期、淋巴结转移情况、多灶性等临床指标无相关性;相应对照组织中NIS-L甲基化率为36.4%(4/11),与所有临床指标无相关性.结论 甲状腺乳头状癌组织中NIS-L区域CpG岛甲基化率异常增高,且与肿瘤直径存在相关性.NIS-L与其它NIS表达调控因素的关系有待进一步研究.

肾癌组织中Tim-3基因的甲基化分析

目的 分析肾癌组织中Tim-3基因启动子的甲基化情况,探讨Tim-3甲基化在肾癌发生中的可能作用.方法 采用甲基化特异性PCR(MSP)检测20例肾癌组织和3例癌旁组织中Tim-3基因启动子甲基化状态,分析检测结果.结果 肾癌组织中有11例(55%)检测到了Tim-3基因甲基化表达,相应癌旁组织中没有检测到Tim-3基因甲基化表达.结论 肾癌组织中Tim-3基因启动子发生甲基化,Tim-3基因甲基化可能与肾癌的发生发展有关.