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miR-153在卵巢癌中的表达及其生物学功能
目的 分析miR-153在卵巢癌中的表达,并探讨miR-153的生物学作用.方法 荧光定量 PCR 法检测卵巢癌组织及细胞中 miR-153 的表达水平;转染 miR-153 类似物(mimics)至SKOV3细胞,MTT法、平板克隆实验及流式细胞仪分别检测miR-153对细胞增殖及凋亡的影响.结果miR-153在卵巢癌组织及细胞中的表达显著下调;转染miR-153 mimics后细胞生长受到明显抑制,克隆数目减少,细胞早期凋亡率显著增加(P<0.01).结论 miR-153在卵巢癌中表达下调;过表达miR-153可显著抑制SKOV3细胞增殖,促进细胞凋亡.
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人参皂苷Rg1调控miR-153/Nrf2/HO-1减轻肌萎缩侧索硬化模型小鼠损伤
本文主要通过肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)模型小鼠(SOD1 G93A)研究人参皂苷Rg1对ALS病程及病理的影响,并对其作用机制进行分析.通过体重及生存率监测小鼠病程,转棒实验测试小鼠肌肉运动协调能力,甲苯胺蓝染色及免疫荧光检测小鼠脊髓运动神经元及小胶质细胞改变,Westernblot检测氧化应激相关蛋白Nrf2等的表达,并对其及相关miRNA进行干预,验证Rg1的作用及相关机制.结果显示20 mg·kg-1·d-1 Rg1可明显延缓ALS小鼠病程,改善其运动症状,减少脊髓运动神经元丢失并抑制小胶质细胞激活.进一步研究发现Rg1通过抑制ALS小鼠脊髓miR-153表达,解除其对Nrf2转录后抑制,使其表达明显上调,进而激活HO-1抗氧化信号通路.本研究表明Rg1通过调节miR-153/Nrf2/HO-1抗氧化损伤,对ALS小鼠发挥神经保护作用,为将Rg1开发为有效的ALS治疗药物提供理论依据.
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下调miR-153促进高糖诱导的肾小管上皮细胞-间充质转化
目的:探讨miR-153调控高糖诱导肾小管上皮细胞(HK2)-间充质转化(EMT)的机制,为研究糖尿病肾病(DN)间质纤维化机制提供新思路.方法:采用生物信息学方法预测调控Snail的候选miRNAs;在db/db小鼠肾组织中验证所有候选miRNAs的表达并分别与Snail做pearson相关性分析,筛选出与Snail负相关显著的miRNA;以高糖诱导的HK2细胞为载体,转染该miRNA mimics 72 h后,采用real-time PCR、western blot 方法,观察该miRNAs、Snail以及E-cadherin的表达改变.结果:调控Snail的候选miRNAs共7个,分别是:miR-153 、miR-30e、miR-30d、miR-30b、miR-384-5p、miR-30a、miR-30c;与db/m相比,miR-153、miR-30d及miR-30e在db/db小鼠肾皮质中表达显著下调(P<0.05),其中miR-153 与Snail表达水平负相关显著(r=-0.501 56);高糖诱导HK2细胞下调miR-153,肾小管上皮细胞标志蛋白E-cadherin表达减少;过表达miR-153抑制HK2细胞表达Snail,而E-cadherin水平增加.结论:MiR-153可能通过靶基因Snail参与调控高糖诱导的HK2 细胞EMT.
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MiR-153在TPM治疗颞叶癫痫大鼠海马组织中的表达及意义
目的 探讨miRNAs参与颞叶癫痫(TLE)的发生发展,TPM治疗颞叶癫痫中有miR-153的参与及其与凋亡之间的联系.方法 利用锂-匹罗卡品诱发癫痫,随机将80只大鼠分为四组:正常对照组,TLE组,TPM低剂量组(40 mg/kg)和TPM高剂量组(80 mg/kg).通过microRNA芯片分析测定上述四组大鼠海马中miRNAs表达谱的改变,HE染色观察各组大鼠海马组织与细胞的形态学改变,并利用免疫蛋白印迹、免疫组化方法测定上述各组海马中caspase-3蛋白的表达水平.结果 与对照组相比,TLE大鼠海马中检测到了6个上调的miRNAs(miR-204,-214,-210,-466c,-298,-207)和12个下调的miRNAs(miR-153,-34a,-362,-377,-101a,-382,-598,-488,-383,-376b-3p,-380,-9).经TPM治疗后,上调的6个miRNAs发生了下调,12个下调的miRNAs则出现了上调,其中miR-153在上调的miRNAs中变化为显著.此外,在TLE大鼠海马中能够检测到caspase-3的表达水平明显增加,经TPM治疗后其表达水平下降,且TPM高剂量组中大鼠海马caspase-3的表达较TPM低剂量组更低.结论 MiRNAs参与到了TLE的发生发展中,且miR-153有望成为TLE治疗中的重要靶点.MiR-153参与到了癫痫的发生,TPM治疗能够使miR-153发生上调.TPM能够减少大鼠海马中凋亡的发生.
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miR-153靶向Nrf2对胶质母细胞瘤细胞株U251凋亡的影响
目的 探讨miR-153对胶质母细胞瘤细胞株U251凋亡的影响,研究miR-153通诱导U251凋亡的具体机制.方法 用qRT-PCR检测正常人脑组织、WHO Ⅳ级神经胶质母细胞瘤中miR-153的表达情况.用qRT-PCR检测转染miR-153 mimics 48 h后U251中miR-153的表达量,流式细胞仪检测转染miR-153 mimics 48 h后U251细胞凋亡情况.荧光素酶报告基因系统验证NF-E2相关因子2(Nrf2)是否是miR-153的靶基因,免疫印迹检测转染miR-153 mimics 48 h后U251中Nrf2的表达水平.结果 与正常脑组织组相比,miR-153在胶质母细胞瘤组表达显著降低(P<0.05).U251细胞转染miR-153 mimics 48 h后,miR-153表达水平较对照组明显增高(P<0.05),显著促进了U251的凋亡(P<0.05).荧光素酶报告基因实验表明,miR-153能特异性靶向Nrf2基因.Western blotting 试验证实miR-153过表达抑制Nrf2蛋白的表达.结论 miR-153在神经胶质母瘤细胞中通过靶向Nrf2基因起到抑癌基因的作用,为未来在治疗神经胶质母细胞瘤方面提供了新的靶向治疗观念.
关键词： 微小RNA 胶质瘤 miR-153 NF-E2相关因子2 -
miR-153在胃癌组织中的表达及其临床意义
目的:探讨miR-153在胃癌中的表达及其临床意义.方法:收集49例胃癌根治术后组织和配对癌旁正常组织标本,采用实时荧光定量+聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-153的表达水平,并分析其与胃癌临床TNM分期、肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移等临床病理参数之间的关系.结果:miR-153在胃癌组织中的表达量显著低于相应癌旁正常组织(P＜0.01),miR-153的表达量与胃癌淋巴结转移有关(P＜0.05),与民族、性别、年龄、分化程度、肿瘤大小、临床TNM分期等病理参数无关(P＞0.05).结论:miR-153在胃癌组织中低表达,提示miR-153可能与胃癌的发生发展有关.
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MicroRNA-153对脑膜瘤细胞放疗敏感性的影响
目的 探讨microRNA-153对(miR-153)对脑膜瘤细胞放疗敏感性的影响及其作用机制.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应检测放疗前后脑膜瘤SF3061细胞系中miR-153的表达变化,用脂质体转染技术将miR-153 mimics及对照转染至SF3061细胞中,采用MTT法、流式细胞术及克隆形成实验检测放射处理后细胞的放疗敏感性变化.使用TargetScan预测及双荧光素酶报告基因实验验证miR-153与视网膜母细胞瘤蛋白结合锌指1(RIZ1)的靶向作用,基因敲除RIZ1验证其对脑膜瘤细胞放疗敏感性的影响.结果 脑膜瘤细胞经过放疗处理后miR-153的表达水平降低;miR-153 mimics提高放疗后细胞的增殖抑制率和凋亡率,降低细胞克隆形成率;TargetScan预测及双荧光素酶报告基因实验证实RIZ1是miR-153的靶标;转染si-RIZ1增加脑膜瘤细胞的放疗敏感性.结论 miR-153通过靶向干扰RIZ1的表达,增加脑膜瘤细胞的放疗敏感性.
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MiR-153对胶质母细胞瘤干细胞生物学特性的影响
目的 培养胶质母细胞瘤干细胞,观察microRNA(miR)-153对其生物学功能的影响,探讨其在胶质母细胞瘤基因治疗中的应用. 方法 体外原代培养胶质母细胞瘤组织,免疫磁珠法分选CD133+细胞;免疫荧光染色检测分选后细胞CD133、巢蛋白(nestin),分化后细胞神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、微管相关蛋白2(MAP2)的表达进行鉴定.RT-PCR检测分选后CD133+细胞、CD133-细胞miR-153的表达;将人miR-153模拟体和无意义寡核苷酸链(NC)分别转染胶质母细胞瘤干细胞作为miR-153、NC组,7d后用成球试验检测miR-153对胶质母细胞瘤干细胞自我更新能力的影响.RT-PCR、免疫荧光染色分别检测2组细胞CD133、nestin、GFAP、MAP2 mRNA和蛋白的表达.转染后24、48、72、96和120 h CCK-8法检测2组细胞存活率.转染后3d流式细胞仪检测2组细胞凋亡率. 结果 培养的胶质母细胞瘤干细胞表达干细胞标记物CD133、nestin,分化后细胞表达星形胶质细胞的标志物GFAP、神经元的标志物MAP2;分选后CD133+细胞中miR-153的表达低于CD133-细胞,差异有统计学意义(P＜0.05).转染后7 dNC组细胞一、二次成球数目均高于miR-153组,差异有统计学意义(P＜0.05); RT-PCR检测显示与NC组比较,miR-153组细胞CD133、nestin mRNA表达降低,GFAP、MAP2 mRNA表达升高,差异有统计学意义(P＜0.05).免疫荧光染色与RT-PCR检测结果一致;转染后48、72、96 h miR-153组的细胞存活率均低于NC组,差异均有统计学意义;流式细胞仪检测显示miR-153组的细胞凋亡率(9.41％±1.98％)高于NC组(4.28％±0.31％),差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 上调miR-153可能成为新的针对胶质母细胞瘤干细胞的治疗策略.
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姜黄素对swAPP HEK293细胞β样淀粉样蛋白生成的影响
目的:在转染瑞典突变型淀粉样前体蛋白(APP)基因细胞(swAPP HEK293)中探讨姜黄素(Curcumin)对β样淀粉样蛋白(Aβ)生成的影响及初步机制.方法:以swAPP HEK293为细胞模型,首先以MTT的方法检测姜黄素在不同时间点(各个时间点)和浓度值(各个浓度值)时对细胞存活率的影响;选取无细胞毒性时的浓度值(5μmol/L)作用不同时间后,采用ELISA的方法检测其对Aβ的影响;选取抑制作用强的浓度值和时间点进行后续试验,采用RT-PCR检测miR-153及APPmRNA的表达,采用Western blot检测APP蛋白的表达.结果:与对照组相比,姜黄素浓度≤5μmol/L组对细胞活性无毒性作用(P＞ 0.05),姜黄素明显抑制Aβ的生成,差异有统计学意义(P＜0.05),从而筛选姜黄素佳作用浓度和时间为5 μmol/L、24 h;姜黄素5μmol/L对APP mRNA表达水平无明显影响(P＞0.05),而明显降低APP蛋白的表达(P＜0.05);此外,姜黄素5μmol/L使细胞中miR-153的表达水平明显升高(P＜0.05).结论:在swAPP HEK293细胞中,姜黄素可能通过上调miR-153的表达及降低APP蛋白的表达进而抑制Aβ的生成.
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miR-153干预对骨肉瘤细胞MG-63侵袭能力的影响
目的:探讨不同miR-153干预对骨肉瘤细胞系MG-63侵袭能力的影响.方法:培养骨肉瘤细胞MG-63并随机分为miR-153过表达组、miR-153沉默表达组及阴性对照组,依次分别转染miR-153 mimic、miR-153 inhibitor及空白对照质粒;Real-time PCR检测转染后细胞中miR-153表达以确定细胞模型构建成功;Real-time PCR和Western blot检测转染后细胞中侵袭相关蛋白ROCK1和ROCK2的表达;Transwell 侵袭实验检测转染后细胞侵袭能力的变化;理论预测miR-153与ROCK1/ROCK2的靶向结合作用.结果:相比于阴性对照组,miR-153过表达组、miR-153沉默表达组MG-63细胞内miR-153表达水平分别上调和下调,细胞模型构建成功;Real-time PCR和Western blot结果显示,相比于阴性对照组,miR-153过表达组、miR-153沉默表达组MG-63细胞内侵袭相关蛋白ROCK1和ROCK2的mRNA表达变化不明显而蛋白表达水平分别降低和增高;Transwell侵袭实验结果显示上调及沉默miR-153后,MG-63细胞侵袭能力分别下降和增强;Targetscan生物学软件理论预测miR-153与ROCK1/ROCK2同时存在结合位点.结论:不同miR-153干预可明显影响骨肉瘤细胞MG-63的侵袭能力,而这种影响可能通过miR-153-ROCK1/ROCK2途径实现.
关键词： miR-153 ROCK1/ROCK2 骨肉瘤 侵袭 -
miR-153靶向调控GALNT7对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响
目的 探讨miR-153(microRNA-153)靶向调控GALNT7对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法 通过双荧光素酶试验证明GALNT7为miR-153的下游靶基因,在宫颈癌细胞系(Hela、C-33A)中转染miR-NC和miR-153,并设立空白对照组,采用实时荧光定量PCR法检测GALNT7 mRNA的表达量、Western blotting实验检测GALNT7蛋白的表达量.然后通过CCK8、划痕和Trranswell小室法检测宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力.结果 miR-153靶向调控GALNT7的3'-UTR,降低了荧光素酶的表达活性.miR-153组GALNT7 mRNA和蛋白表达水平明显低于miR NC组(P＜0.05),且与miR NC组相比,miR-153组细胞的增殖、迁移、侵袭能力均降低(P＜0.05).结论 miR-153可能通过靶向抑制GALNT7的表达而抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力.
