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p16、DAPK和ESRβ基因启动子甲基化与宫颈癌的关系
目的 探讨p16、DAPK及ESRβ基因启动子区甲基化在宫颈癌发生、发展中的作用.方法 利用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)检测宫颈癌组织及血清中p16、DAPK及ESR β启动子区甲基化情况,分析三者与宫颈癌发生、发展及临床病理的关系.结果 100例宫颈癌组织中,p16和DAPK甲基化率分别为80％和35％,明显高于对照组(正常或慢性炎症的宫颈组织);p16和DAPK任意一个基因甲基化率为84％.30例宫颈癌患者血清中,p16和DAPK甲基化率分别为40％ (12/30)和20％(6/30),而对照组中未检出甲基化;p16和DAPK任意一个基因甲基化率为46.7％ (14/30).宫颈癌组织和血清中均未检出ESRβ启动子区甲基化.进一步分析p16和DAPK基因甲基化与临床病理关系发现,二者甲基化与宫颈鳞状细胞癌关系更密切,鳞状细胞癌与腺癌比较差异显著(P＜0.01).结论 p16和DAPK基因启动子区甲基化与宫颈癌特别是宫颈鳞状细胞癌的发生、发展关系密切.ESRβ启动子区甲基化可能与宫颈癌的发生、发展无关.
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p15、DAPK、SOCS1和FHIT4基因甲基化联合检测在骨髓增生异常综合征早期诊断及预后评估中的价值
目的:探讨p15、DAPK、SOCS1和FHIT4基因甲基化联合检测在骨髓增生异常综合征(MDS)早期诊断与预后评估中的价值.方法:应用甲基化特异性PCR(MSP)对67例MDS患者骨髓进行上述4种基因甲基化检测,分析4个基因联检在MDS患者早期诊断及预后评估中的价值.结果:67例MDS患者p15、DAPK、SOCS1和FHIT4个基因甲基化率分别为37.3％、35.8％、47.8％和52.2％,较对照组显著增高(P＜0.05),4个基因单检诊断MDS的阳性符合率分别为37.3％、35.8％、47.8％和52.2％,而4个基因联合检测诊断MDS的阳性符合率为82.1％,较单一基因检查阳性符合率明显增高(P＜0.001);相对高危组中≥2个基因甲基化共表达明显高于相对低危组(P＜0.05).MDS患者中位生存时间18(13.3,22.7)个月,相对低危组患者中位生存时间明显长于相对高危组[27(20.3,33.7) vs 9(5.9,12.1)个月](P＜0.05).在不同危险度患者中,随着表达基因数的增多,患者的生存时间呈明显缩短趋势(P＜0.05).结论:p15、DAPK、SOCS1和FHIT4种基因联合检测有利于提高MDS患者的早期诊断和预后判断.
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hMLH1、DAPK基因启动子区甲基化与肺癌耐药的相关性
耐药是导致肺癌化疗与靶向治疗失败的关键,机制复杂.研究证实表观遗传学改变与肿瘤耐药的形成关系密切,DNA甲基化是重要的表观遗传学修饰方式.文章就hMLH1基因启动子区甲基化与肺癌顺铂耐药、DAPK基因启动子区甲基化与肺癌EGFR-TKI耐药的关系进行阐述.
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正常涎腺组织中E-cadherin，p16，RASSF1 A，DAPK和MGMT基因甲基化检测
目的：检测组织学正常的涎腺组织中5个抑癌基因的甲基化情况，为进行涎腺肿瘤的甲基化研究提供参照。方法甲基化特异性PCR （ methylation-specific polymerase chain reaction ， MSP）法分析60例组织学正常的涎腺组织中E-钙黏蛋白（cadherin）， p16， RASSF1A，DAPK和MGMT基因启动子区的甲基化水平，并与前期研究中涎腺腺样囊性癌中的甲基化水平相比较，同时分析正常涎腺组织中E-cadherin（E-cad）， p16， RASSF1A，DAPK和MGMT基因的甲基化与患者的性别、年龄及吸烟之间的关系。结果13％（8/60）涎腺组织中发现存在甲基化，包括7％（4/60）E-cad，4％（2/60）p16，4％（2/60）RASSF1A，4％（2/60）DAPK，2％（1/60）MGMT。与之前腺样囊性癌中的结果比较，E-cad（P＜0．01）， p16（P＜0．01）， RASSF1A（P＜0．01），DAPK（P＜0．01）基因的甲基化在肿瘤组织及腺体组织中有明显差异。但涎腺组织中E-cad， p16， RASSF1A，DAPK和MGMT基因的甲基化与患者的性别、年龄及吸烟均无明显的相关性。结论正常的涎腺组织中E-cad， p16， RASSF1A，DAPK 和 MGMT基因的甲基化均为少发事件。
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DAPK和EZH2在非小细胞肺癌中的表达和相关性
目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中死亡相关蛋白激酶(DAPK)和EZH2基因表达的变化及其与NSCLC临床病理因素之间的关系.方法:采用组织芯片免疫组化法对98例NSCLC组织及癌旁正常组织的DAPK和EZH2的表达情况进行检测.结果:DAPK的阳性表达率为34.7%,显著低于癌旁正常肺组织的82.6%(P<0.05);EZH2表达阳性率为52.0%,显著高于癌旁正常组织的21.4%(P<0.05).DAPK的低表达、EZH2的表达与临床分期Ⅱ~Ⅲ期及淋巴结转移有关(P<0.05),与性别、年龄、肿瘤直径、组织类型无关(P>0.05);NSCLC中DAPK与EZH2的表达呈负相关关系(r=-0.483,P<0.05).结论:NSCLC中DAPK与EZH2呈负相关可能与非小细胞肺癌的发生与发展关系密切.
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DAPK基因甲基化与肿瘤相关疾病关系的研究进展
死亡相关蛋白激酶(DAPK)是近年来发现的一种抑癌基因,具有参与细胞凋亡、细胞迁移等生物学功能.国内外研究报道证实DAPK基因启动子甲基化表达水平与肿瘤的发生发展及治疗有密切关系.对DAPK结构,功能及其甲基化机制研究的深入和完善,必将对肿瘤的靶向治疗提供更多的选择药物和治疗方式.
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膀胱移行细胞癌组织基因的P14ARF、DAPK、RARβ甲基化变异分析
目的 通过检测新鲜冰冻膀胱癌组织中P14ARF、DAPK、RARβ基因的启动子CpG岛基因的甲基化状态,探讨P14ARF、DAPK、RARβ在膀胱癌发生过程中的作用及诊断意义.方法 采用甲基化特异性PCR技术检测48例手术切除的膀胱癌组织和其中13例相应癌旁组织标本、17例非肿瘤患者正常膀胱组织中DAPK、RARβ、P14ARF基因的甲基化情况.结果 48例膀胱癌组织中发现P14ARF基因异常甲基化13例(27.0%),DAPK基因异常甲基化13例(27.0%);RARβ基因异常甲基化44例(91.6%);17例腺性膀胱炎组织中发现P14ARF基因异常甲基化0例,DAPK基因异常甲基化2例(11.7%);RARβ基因异常甲基化3例(17.6%);13例正常膀胱组织中,仅有2例RARβ基因异常甲基化,P14ARF基因、RARβ基因异常甲基化膀胱癌组织与腺性膀胱炎组织差异有统计学意义(P<0.01;P<0.05).结论 P14ARF、DAPK、RARβ基因异常甲基化与膀胱癌发病密切相关,RARβ基因可作为正常膀胱组织与癌组织鉴别诊断的标志物.
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大鼠脑缺血再灌注损伤后死亡相关蛋白激酶的表达及意义
目的探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤时死亡相关蛋白激酶(Death associated related protein kinase,DAPK)的表达变化及其与脑缺血再灌注损伤的关系.方法线拴法建立局灶性脑缺血再灌注模型,SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组和缺血再灌注组,缺血组于栓塞3h后分别再灌注12h、24h、3d、7d.HE染色观察组织病理变化;免疫组化法检测DAPK的表达;原位杂交法检测DAPK mRNA的表达.结果缺血组DAPK免疫阳性反应于再灌注后24h开始增强并于3d时达高峰,随后下降;DAPKmRNA的表达于再灌注3d时达高峰,随后下降.结论脑缺血再灌注损伤诱导DAPK表达增强;DAPK在缺血性脑损伤中起重要作用.
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抑癌基因PTEN及DAPK启动子甲基化在急性白血病中的表达及其意义
目的:探讨第10号染色体缺失性磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)phosphatase and tensin homology deleted on chromosome 10和死亡相关蛋白激酶(DAPK)death-associated protein kinase在急性白血病中的表达及其意义.方法:采用甲基化特异性PCR (MSP)检测47例急性白血病患者、26例健康对照组外周血中PTEN和DAPK启动子甲基化的表达及化疗后患者达完全缓解PTEN和DAPK启动子甲基化的表达.结果:PTEN和DAPK启动子甲基化在ALL和AML中的表达水平均明显高于对照组,且差异有显著性(P均＜0.05).结论:PTEN和DAPK启动子甲基化的高表达可能与急性白血病的发生发展相关.PTEN和DAPK启动子甲基化在急性白血病的早期诊断与靶向治疗中起到了重要的作用.
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女贞子对大鼠肝组织DAPK基因mRNA表达量的影响
目的:探讨寒凉性中药女贞子对大鼠肝脏DAPK基因mRNA表达量的影响.方法:寒性中药水提取物女贞子低剂量2.16g/kg高剂量6.48g/kg灌胃大鼠30d,运用RT-PCR半定量法分析大鼠肝组织DAPK基因mRNA表达水平的变化.结果:灌胃30天后,女贞子低剂量组DAPK基因mRNA表达增加了6.4％;女贞子高剂量组增加了91.8％,且达到了显著水平(P＜0.05).结论:女贞子高剂量组能显著增加DAPK基因mRNA表达水平.
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紫花牡荆素对宫颈癌HeLa细胞凋亡及DAPK基因甲基化的影响
目的 探讨紫花牡荆素(casticin)对人宫颈癌HeLa细胞的凋亡和DAPK基因甲基化以及DAPK蛋白表达的影响.方法 用不同浓度的casticin处理体外培养的HeLa细胞;AnnexinV-PI染色流式细胞术定量分析细胞凋亡率;DNA琼脂糖凝胶电泳法观察细胞DNA断裂;基因甲基化特异性PCR检测DAPK基因甲基化状态;Western blotting检测DAPK蛋白表达.结果 casticin可以浓度依赖性的方式有效诱导HeLa细胞凋亡;casticin作用于宫颈癌HeLa细胞48小时后,DAPK基因甲基化程度显著降低;casticin以浓度依赖的方式上调DAPK蛋白表达.结论 casticin可能通过使DAPK基因去甲基化上调DAPK蛋白的表达,进而诱导HeLa细胞凋亡.
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宫颈癌组织中DAPK基因启动子甲基化的研究
背景与目的:已有研究表明DNA异常甲基化在肿瘤的发生、发展中发挥了重要作用.本研究旨在探讨宫颈癌组织中DAPK(death-associated protein kinase)启动子甲基化与基因失活的关系.方法:应用甲基化特异性PCR (methylation-specific PCR,MSP)技术检测52例宫颈癌、60例宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)和20例正常宫颈鳞状上皮DAPK启动子甲基化状况,应用免疫组化方法检测其蛋白表达;分析DAPK启动子甲基化和基因失活与宫颈癌临床病理因素之间的关系.结果:正常宫颈组织不存在DAPK基因启动子CpG岛甲基化,而CIN和宫颈癌中的DAPK甲基化率分别为18.3%(11/60)、65.4%(34/52),三者之间的差异有统计学意义(P<0.05).宫颈鳞癌的DAPK甲基化率明显高于腺癌(分别为80.0%和16.7%),其差异有统计学意义(P<0.001).DAPK启动子甲基化和DAPK蛋白表达之间呈负相关(r=-0.849,P<0.001).结论:DAPK启动子CpG岛甲基化可导致基因失活,并可能参与宫颈癌的发生.
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DAPK和DNMT1在宫颈癌巾的相关性研究
目的 探讨宫颈癌中DAPK(Death-associated protein kinase)启动子甲基化与DNMT1 mRNA的表达及两者之间的关系.方法 应用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)技术检测52例宫颈癌、60例CIN(cervical intraepithelialneoplasia)和20例正常宫颈组织中DAPK启动子甲基化状况;应用原位杂交方法检测DNMT1 mRNA的表达.结果 正常宫颈鳞状上皮不存在DAPK基因启动子CpG岛甲基化,而在CIN和宫颈癌中的甲基化率分别为18.3%(11160)、65.4%(34152),差异有统计学意义(x2=39.639,P＜0.001).正常宫颈鳞状上皮、CIN和宫颈癌DNMT1 mRNA阳性率分别为10%、63.3%和78.8%,差异有统计学意义(x2=29.057,P＜0.001).DAPK异常甲基化和DNMT1 mRNA表达成正相关,r=0.308,P＜0.001.结论 DAPK异常甲基化和DNMT1 mRNA过表达参与了宫颈癌的发生;DAPK基因启动子的甲基化过程可能是在DNMT1的催化作用下完成的.
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DAPK基因在膀胱癌细胞迁移和调亡中的作用研究
目的 通过体外实验初步研究抑癌基因死亡相关蛋白激酶(deathassociat-edproteinkinase,DAPK)在膀胱癌细胞中的迁移和调亡中的作用研究.方法 首先采用免疫荧光染色的方法检测DAPK基因在膀胱癌细胞中的定位,然后用脂质体将全长外源性DAPK基因瞬时转染至不表达该基因的T24细胞中,分别采用划痕实档验和流式细胞术检测转染前后膀胱癌细胞的迁移能力和凋亡水平的变化.结果 免疫荧光染色发现DAPK基因定位于膀胱癌细胞的胞浆和胞膜.划痕实验提示转染DAPK基因的T24细胞迁移能力下降,流式细胞术检测证实DAPK基因转染后T24细胞凋亡率显著提高.结论 作为抑癌基因,DAPK在膀胱癌细胞中具有促进细胞凋亡并抑制细胞迁移的能力.
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外阴鳞状细胞癌患者癌组织p16和DAPK基因组蛋白H3K27三甲基化状态水平研究
目的:研究外阴鳞状细胞癌患者癌组织p16和DAPK基因组蛋白H3K27三甲基化状态及mRNA表达水平.方法:采用染色质免疫共沉淀-实时定量聚合酶联反应(ChIP-qPCR)技术对8例外阴鳞状细胞癌患者癌组织和毗邻正常组织p16和DAPK基因组蛋白H3K27三甲基化状态进行定量分析;随后采用定量反转录聚合酶联反应(qRT-PCR)检测其基因的mRNA表达水平.结果:外阴鳞状细胞癌患者癌组织p16和DAPK基因组蛋白H3K27三甲基化水平增高;其三甲基化水平较毗邻正常组织有显著性差异(P<0.05);进一步表达分析显示p16和DAPK基因其mRNA表达降低.结论:外阴鳞状细胞癌患者癌组织p16和DAPK基因组蛋白H3K27三甲基化水平增高,组蛋白H3K27三甲基化异常参与外阴鳞状细胞癌的发生,极可能成为外阴鳞状细胞癌新的表观治疗靶点.
关键词： 外阴鳞状细胞癌 染色质免疫共沉淀 组蛋白H3K27三甲基化 p16 DAPK
