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SOCS1调控小胶质细胞活化水平的新研究进展
小胶质细胞过度活化可加剧中枢神经系统(CNS)炎症反应,引起中枢神经功能损害,小胶质细胞活化参与了脑中风、神经退行性疾病和脑外伤的发生与发展.因此,抑制小胶质细胞过度活化是防治多种CNS疾病的重要手段.细胞因子抑制信号蛋白1(SOCS1)是表达于小胶质细胞上的一种蛋白,大量研究表明,SOCS1蛋白表达变化可调控小胶质细胞活化水平,抑制小胶质细胞过度活化、降低CNS炎症因子浓度和炎症反应程度.白藜芦醇和姜黄素等生物活性药物还可通过增加小胶质细胞SOCS1表达,显著降低β淀粉样蛋白(Aβ)对小胶质细胞的活化水平并降低促炎症因子释放量,因此,SOCS1可能作为新的干预靶点,用于防治阿尔兹海默症等慢性CNS退行性疾病.
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豚鼠细胞因子信号抑制蛋白1基因SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立
目的 建立豚鼠细胞因子信号抑制蛋白(SOCS1) SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法. 方法 根据GenBank上公布的豚鼠全基因序列,设计SOCS1全长引物,并在其保守区设计Real-time PCR扩增引物.对SOCS1全长PCR扩增,构建pEASY-Blunt-SOCS1标准质粒.利用10倍梯度稀释标准质粒作为模版,建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法. 结果 成功建立了标准曲线,相关系数为0.996,扩增效率为103.7％,无非特异性产物和引物二聚体产生,初步应用结果显著. 结论 本实验建立的豚鼠细胞因子信号抑制蛋白SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法可用于细胞因子抑制信号蛋白变化的快速定量检测,能够为禽流感H5N1的研究提供一定的技术支持.
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p15、DAPK、SOCS1和FHIT4基因甲基化联合检测在骨髓增生异常综合征早期诊断及预后评估中的价值
目的:探讨p15、DAPK、SOCS1和FHIT4基因甲基化联合检测在骨髓增生异常综合征(MDS)早期诊断与预后评估中的价值.方法:应用甲基化特异性PCR(MSP)对67例MDS患者骨髓进行上述4种基因甲基化检测,分析4个基因联检在MDS患者早期诊断及预后评估中的价值.结果:67例MDS患者p15、DAPK、SOCS1和FHIT4个基因甲基化率分别为37.3％、35.8％、47.8％和52.2％,较对照组显著增高(P＜0.05),4个基因单检诊断MDS的阳性符合率分别为37.3％、35.8％、47.8％和52.2％,而4个基因联合检测诊断MDS的阳性符合率为82.1％,较单一基因检查阳性符合率明显增高(P＜0.001);相对高危组中≥2个基因甲基化共表达明显高于相对低危组(P＜0.05).MDS患者中位生存时间18(13.3,22.7)个月,相对低危组患者中位生存时间明显长于相对高危组[27(20.3,33.7) vs 9(5.9,12.1)个月](P＜0.05).在不同危险度患者中,随着表达基因数的增多,患者的生存时间呈明显缩短趋势(P＜0.05).结论:p15、DAPK、SOCS1和FHIT4种基因联合检测有利于提高MDS患者的早期诊断和预后判断.
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IL-6/STAT3信号活化在川崎病Th17/Tr细胞失衡中的作用
目的 探讨IL-6/STAT3信号在川崎病(KD)Th17/Tr细胞失衡中的作用.方法 急性期KD患儿48例,正常同年龄对照组18例,KD患儿于静脉注射丙种球蛋白前直接取血备检.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆IL-6蛋白浓度; 荧光定量PCR检测CD4+ T细胞IL-17A、IL-17F、RORγt、Foxp3、SOCS1、SOCS3等基因mRNA表达;流式细胞术检测外周血CD4+ CD25+Foxp3+调节性T细胞(Tr)的比例和CD4+ T细胞磷酸化STAT3(pSTAT3)蛋白平均荧光强度(MFI);甲基化特异性定量PCR(MethySYBR PCR)检测CD4+ T细胞SOCS1基因外显子2、SOCS3基因5'端非翻译区(5'-UTR)3个可能的STAT3结合位点CpG岛甲基化水平.结果 (1)急性期KD患儿血浆IL-6浓度、CD4+ T细胞pSTAT3 MFI水平显著上调[IL-6:(54.02±20.58) pg/ml vs (8.72±2.06) pg/ml,P<0.05;pSTAT3 MFI:(55.41±15.08) vs (9.35±3.76),P<0.05].其中KD合并冠脉损伤组(KD-CAL+)上述二项指标均明显高于无冠脉损伤组(KD-CAL-)[IL-6:(84.76±29.35) pg/ml vs (38.65±13.76) pg/ml,P<0.05;pSTAT3 MFI:(72.36±16.81) vs (46.93±13.57),P<0.05].(2)急性期KD患儿CD4+ T细胞IL-17A/F、RORγt mRNA表达水平显著上调(P<0.05),CD4+CD25+ Foxp3+ Tr细胞比例及Foxp3 mRNA表达明显低于正常对照组(P<0.05),其中KD-CAL+组IL-17A/F、RORγt mRNA表达水平明显高于KD-CAL-组(P<0.05),Foxp3 mRNA表达明显低于KD-CAL-组(P<0.05).(3)急性期KD患儿CD4+ T细胞SOCS1和SOCS3 mRNA水平显著高于同年龄对照组(P<0.05),其中KD-CAL+组SOCS1和SOCS3 mRNA表达低于KD-CAL-组(P<0.05);正常对照组SOCS1基因外显子2、SOCS3基因5'-UTR 区第3个STAT3结合位点的CpG岛完全去甲基化,急性期KD患儿呈低甲基化状态(P<0.05),其中KD-CAL+组SOCS1基因外显子2、SOCS3基因5'-UTR 区第3个STAT3结合位点的CpG岛去甲基化水平明显低于KD-CAL-组(P<0.05);各组SOCS3基因5'-UTR区第1、2个STAT3结合位点CpG岛均处于完全去甲基化状态(P>0.05).结论 SOCS1和SOCS3基因低甲基化所致IL-6/STAT3信号异常活化可能是KD Th17/Tr细胞失衡的因素之一.
关键词： SOCS1 SOCS3 黏膜皮肤淋巴结综合征 Th17 调节性T细胞 -
强化阿托伐他汀对不稳定型心绞痛患者PCI围术期CD4+T淋巴细胞SOCS1表达的影响
目的 探讨强化剂量阿托伐他汀对不稳定心绞痛患者PCI围术期CD4+T淋巴细胞SOCS1表达的影响.方法 入选广西医科大学第一附属医院住院的不稳定型心绞痛患者50例,用随机数字法分为强化他汀组(术前80 mg/d,术后40 mg/d,n=25)和常规他汀组(术前术后均20 mg/d,n=25).分别于PCI术前、术后18～24 h抽取新鲜外周血,免疫磁珠法分选出CD4+T淋巴细胞,荧光定量PCR检测SOCS1 mRNA表达,蛋白免疫印迹法检测SOCS1蛋白表达,酶联免疫法检测IFN-γ炎症因子的表达.结果 ①与PCI术前强化组相比,术后强化组SOCS1 mRNA、SOCS1蛋白表达明显升高(P＜0.05).②与PCI术前常规组相比,术后常规组SOCS1 mRNA、SOCS1蛋白表达有升高的趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05)③与PCI术前常规组比较,术后常规组血清IFN-γ浓度明显升高(P＜0.05);与PCI术前强化组比较,术后强化组血清IFN-γ浓度有升高的趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 强化剂量的阿托伐他汀可以通过上调CD4+T淋巴细胞SOCS1的表达,从而减少PCI术后心肌的炎症反应.
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SOCS1对大鼠胰岛细胞功能及细胞凋亡影响的研究
目的：观察增加胰岛细胞SOCS1表达后胰岛细胞功能及抗凋亡能力的变化。方法通过胆总管插管、逆行灌注胶原酶P溶液的方法分离大鼠胰岛，采用Ficoll密度梯度离心法纯化胰岛，采用AdMax法构建腺病毒载体Ad5 F35-SOCS1并转染大鼠胰岛细胞，使用Western blot法检测转染胰岛细胞的SOCS1表达水平，通过胰岛的糖刺激指数检测大鼠胰岛细胞的胰岛素释放功能，通过加入凋亡诱导剂及应用流式细胞仪检测凋亡细胞的比例。结果与对照组及未转染胰岛细胞相比，经Ad5 F35-SOCS1转染的大鼠胰岛细胞在具有高表达SOCS1的特性时其正常的胰岛素释放功能不受影响（三组的糖刺激指数分别为3.98±0.45、4.06±0.61和3.53±0.39，P＞0.05），经凋亡诱导剂诱导后其凋亡细胞数明显低于对照组及未转染组，三组细胞凋亡率分别为（8.89±4.03）%、（24.60±6.88）%和（21.14±5.12）%，P＜0.05。结论增加胰岛细胞 SOCS1表达不影响胰岛细胞的功能，并能有效减少细胞的凋亡。
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复制缺陷型腺病毒介导的SOCS1沉默加强树突状细胞疫苗对表达癌蛋白E7荷瘤小鼠的免疫治疗
目的 探讨一种对官颈癌可能有治疗作用的方法.方法 构建SOCS1 RNA沉默的复制缺陷型腺病毒(rAd-RNAi-SOCS1),用重组腺病毒体外感染从小鼠骨髓中分离培养的树突状细胞(DCs),用多肽E7.49-53脉冲,并用LPS使DCs成熟,然后回输到已致瘤的小鼠体内,观察不同处理组小鼠模型肿瘤的生长情况和存活率.结果 重组腺病毒的构建经测序证实构建的腺病毒是正确的,定量RR-PCR体外证明SOCS1 RNA对DCs表达SOCS1有抑制作用.用多肽E7.49-53在体外经rAd-RNAi-SOCS1处理后的DCs对荷瘤小鼠模型较对照组有显著的抑制肿瘤生长的作用,小鼠的存活率提高,存活时间延长(P<0.05).结论 SOCS1的干扰介导DCs对肿瘤动物模型的治疗作用,机理可能为SOCS1的沉默突破了机体对肿瘤的免疫耐受.
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SOCS1对炎症和辅助性T细胞作用的研究进展
细胞因子信号传导抑制因子(suppressors of cytokine signaling,SOCS)是由细胞产生并反馈性阻断细胞因子信号转导过程的负性调节因子.近年来很多学者及实验团队对其的研究不断加深,发现其主要通过JAK-STAT通路在炎症的预防及治疗中起着关键的作用并且是辅助性T细胞分化和发挥功能的重要调节剂.主要专注于SOCS1在炎症和辅助性T细胞发挥功能中的作用的新进展.
关键词： SOCS1 JAK-STAT通路 炎症 辅助性T细胞 -
急性白血病患者STAT5、SOCS1和PTPRO基因的表达及临床意义
目的 探讨STAT5、SOCS1和PTPRO基因在急性白血病(AL)中的表达情况及临床意义.方法 将入选患者分为AL初治组、完全缓解组(CR组)和正常对照组(NC组),Syber Green 荧光定量PCR方法检测各组骨髓单个核细胞(MNC)中STAT5、SOCS1及PTPRO mRNA的表达.结果 (1)AL初治组STAT5 mRNA表达水平明显高于缓解组(P＜0.05),缓解组STAT5表达水平高于正常对照组(P＜0.05);(2)AL初治组SOCS1、PTPRO的表达水平低于缓解组(P＜0.05),缓解组SOCS1、PTPRO的表达水平低于正常对照组(P＜0.05);(3)STAT5、SOCS1、PTPRO基因表达水平中位值分别为0.980、0.838和0.771,根据中位值分为高表达组和低表达组,两组缓解率间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 STAT5的高表达及SOCS1和PTPRO的低表达可能在白血病的发生、发展中起重要作用.
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黄芪对糖尿病肾病大鼠肾组织中SOCS1表达的影响
目的:观察黄芪(astragalus)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织细胞因子信号抑制因子-1(SOCS1)表达的影响.方法:40只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(N组)、DN模型组(DN组)、黄芪治疗组(DA组)、氯沙坦钾治疗组(DL组),每组10只,利用单侧肾切除加腹腔注射链脲佐菌素(50 mg/kg)建立DN大鼠模型,连续给药12周.检测24 h尿蛋白定量、Scr、BUN,免疫组化法检测大鼠肾组织中SOCS1、TGF-β1、IL-6的表达水平.结果:DA组和DL组大鼠24 h尿蛋白定量、Scr、BUN均低于DN组(P<0.05);SOCS1的表达水平高于DN组(P<0.05),而TGF-β1、IL-6的表达水平均低于DN组(P<0.05).结论:黄芪可能通过上调SOCS1的表达水平而间接抑制了TGF-β1及IL-6的表达,从而减轻了DN的炎症反应,具有一定的肾脏保护作用.
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四逆散及其拆方对实验性溃疡性结肠炎大鼠IL-4/STAT6通路的影响
目的:从基因水平进一步探讨四逆散调控实验性溃疡性结肠炎大鼠IL-4/STAT6信号通路的作用机制.方法:将实验动物分为6组,采用免疫法造模,以大鼠IL-4、SOCS1、STAT6的基因表达作为观察与检测指标.结果:四逆散组实验大鼠IL-4、SOCS1表达显著增加(P＜0.05),而STAT6显著降低(P＜0.05);三个拆方组中,柴芍配伍对IL-4、SOCS1 mRNA表达的影响与四逆散无显著性差异(P＞0.05),但STAT6 mRNA的表达显著高于正常组(P＞0.05);与柴枳甘组、芍枳甘组比较,柴芍组IL-4、SOCS1 mRNA表达明显升高(P＞0.05),STAT6 mRNA的表达显著降低,(P＞ 0.05).结论:四逆散能够通过刺激IL-4、SOCS1 mRNA的表达,抑制STAT6mRNA的表达来调节IL-4/STAT6通路,干预实验性UC.方中柴芍配伍作用明显,主要体现在对IL-4、SOCS1mRNA表达的影响上;柴、芍分别配伍柴枳后,对TL-4/STAT6通路的调节作用明显降低.
关键词： 四逆散 IL-4/STAT6通路 SOCS1 溃疡性结肠炎 实验 -
四逆散及其拆方对实验性溃疡性结肠炎大鼠SOCS1·STAT6活性的影响
目的：从 IL-4/ STAT6信号通路入手，以该通路负反馈调节因子 SOCS1和关键因子 STAT6为检测指标，多角度探查溃疡性结肠炎的发生与 IL-4的关系。方法将实验动物分为6组，采用免疫法造模，用免疫组化法检测大鼠 SOCS1、STAT6的活性。结果模型组实验大鼠 SOCS1活性（0.4855±0.1780）显著低于正常组（0.6552±0.1874），P ＜0.05；而 STAT6活性（0.8030±0.2082）则明显高于正常组（0.5893±0.1919）， P ＜0.05。四逆散能显著增加实验大鼠 SOCS1活性（0.5765±0.2080）（P ＜0.05），降低 STAT6活性（0.5798±0.1526）（P ＜0.05）；柴芍配伍（0.5625±0.2757）对 SOCS1活性的影响与四逆散（0.5765±0.2080）比较差异无统计学意义，对 STAT6活性（0.5294±0.1443）表达的影响显著优于四逆散（0.5798±0.1526）（P ＜0.05）；芍枳甘配伍（0.6169±0.2006）对 STAT6活性的影响作用明显，与四逆散（0.5798±0.1526）比较差异无统计学意义；柴枳甘配伍对 SOCS1（0.5091±0.2279）、STAT6（0.7561±0.2636）的影响与模型组（0.4855±0.1780；0.8030±0.2082）比较差异无统计学意义。结论四逆散能够通过刺激 SOCS1活性，抑制 STAT6活性表达来调节 IL-4/ STAT6通路，进而干预实验性溃疡性结肠炎。其中，柴芍配伍作用明显；芍枳甘配伍对 STAT6活性的影响作用明显，但对 SOCS1的影响不显著；柴枳甘配伍对 SOCS1、STAT6的影响均不显著。
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SOCS1调节树突状细胞抗肿瘤免疫的研究进展
细胞因子是一类由细胞分泌的调节细胞生长、分化、增殖的多肽小分子,它们不能直接进入细胞内发挥作用,而是通过细胞因子受体介导,经相应信号传导途径发挥其生物学效应.细胞因子作用的时间、空间和强度均受到严格的调控,其过度刺激会对机体造成伤害.细胞因子信号抑制因子(Suppressor of cytokine signaling,SOCS)是信号传导通路JAK/STAT(Janus kinase/signal transduction and activators of transcription)的一个负性调控分子家族.SOCS参与广泛的生物学过程,是先天和适应性免疫的关键生理调节因子.它们正向和反向调节巨噬细胞和树突状细胞(Dendritic cell,DC)活化,是T细胞发育和分化必不可少的.因此,深入研究SOCS可能为研究肿瘤等疾病的发生发展机理、寻找相应的诊断和防治措施提供新方法[1].
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纳米粒子-siRNA复合物抑制脐血树突状细胞SOCS1基因表达的实验研究
目的:构建复合纳米粒子载体,传递siRNA序列,抑制脐血树突状细胞SOCS1基因表达.方法:构建PEI包覆的以SiO2和Fe3O4为主要成分的复合纳米粒子载体,以LipofectamineTM2000为对照,琼脂糖凝胶电泳检测纳米粒子-siRNA的结合效率；荧光显微镜和流式细胞术检测纳米粒子-SOCS1-siRNA序列被细胞摄入的效率；Western blot检测纳米粒子-siRNA复合物转染脐血树突状细胞后对SOCS1基因表达的抑制.MTT法检测纳米粒子-SOCS1-siRNA处理的脐血DCs对肿瘤细胞的杀伤活性.结果:纳米粒子可以高效结合siRNA序列,纳米粒子-SOCS1-siRNA序列可被脐血树突状细胞摄取,但是单独的纳米粒子抑制SOCS1基因表达效率比较低,在外加磁场的作用下,基因沉默作用显著增强,抗肿瘤作用也相应提高.结论:纳米粒子载体传递siRNA安全性好,效率高,可以高效沉默脐血树突状细胞SOCS1基因表达,能为设计更有效的以树突状细胞为基础的抗肿瘤疫苗提供新思路和实验依据.
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SOCS1与T细胞分化发育及功能调控的研究进展
细胞因子参与介导了机体天然免疫和获得性免疫应答反应,SOCS家族是近年来发现的通过JAK/STAT途径抑制细胞因子信号转导通路的负性调控蛋白.目前SOCS家族成员中以SOCS1的研究为深入.SOCS1的缺失会导致T细胞胸腺选择受阻,以IFNγ为主的多种细胞因子的过量分泌,T细胞表面活化分子表达增加等等.因此,SOCS1的正常表达对于T细胞的分化发育和自身稳定发挥了重要作用.
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SOCS1与肿瘤发生、发展和治疗的研究进展
SOCS1是细胞因子信号转导抑制因子(SOCS)蛋白家族的重要成员,近年来随着对SOCSl研究的深入,它的各种功能逐渐被发现.SOCS1的作用机制复杂,可以被体内多种细胞因子诱导,然后抑制下游的细胞因子和生长因子受体信号活化.SOCS1参与了体内多种急慢性炎症反应、先天性及获得性免疫反应、激素的调节以及多种肿瘤的生成和发展等,尤其是它与肿瘤的关系成为近期研究的热点.SOCS1基因目前被认为是一种新的抑癌基因,研究表明SOCS1基因甲基化、突变以及缺失导致的SOCS1表达减少在肿瘤的形成、发展过程中起重要作用.近年来对于恢复SOCS1的表达可以用来治疗肿瘤方面的研究逐渐增多,有些方法已经应用于临床,而且取得了一定的成果.本文就近年来SOCS1在肿瘤领域中的研究进展进行了综述.
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IL-12基因修饰DC中SOCS1基因沉默对体外诱导特异性CTL的影响
利用重组腺病毒载体pAd CMV/V5-DEST-IL-12转染小鼠骨髓来源的树突状细胞(IL-12/DC),探讨SOCS1基因沉默IL-12/DC在体外诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的效能,及其免疫杀伤肺癌细胞株LLC的能力.采用重组腺病毒介导IL-12基因和SOCS1 SiRNA基因共同修饰C57BL/6小鼠骨髓来源的DC,经反复冻融法提取LLC抗原,致敏基因修饰的DC;用ELISA法检测各组DC分泌IL-12和IL-10的水平,及各组DC刺激后的T细胞分泌IFN-γ的水平;MTT法检测DC刺激同源小鼠T细胞的增殖能力,微量细胞毒法检测CTL的活性并收集刺激后的T细胞,流式细胞术分析CD8+/CD4+比例和CD4+ CD25+ Treg的水平;统计学分析各组间的差异.SOCS1 SiRNA和IL-12基因共同修饰能有效下调DC中SOCS1蛋白的表达并上调IL-12蛋白的表达;IL-12的分泌水平也明显高于SOCS1 SiRNA或IL-12单基因转染组;基因共同修饰的DC表型更加成熟,能明显促进CTL的增殖和活化,减少Treg的生成;CTL分泌高水平的IFN-γ,产生对LLC特异性的细胞免疫.
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SOCS1基因沉默增强DC疫苗对肺癌动物模型的治疗效果
尽管树突状细胞(dendritic eell,DC)是机体内有效的抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC),但由于逃逸机制的存在,基于DC的肿瘤疫苗效果并不如人意.因此,采用一定方法增强DC提呈抗原的能力是提高疫苗效能的关键.本研究中,采用RNA干扰技术(RNA interference,RN Ai),沉默DC中细胞因子信号转导抑制因子1(suppressor of cytokine signaling 1,S0CS1)的表达,使之提呈抗原的能力显著提高,从而有效激发针对肿瘤的特异免疫应答,疫苗的治疗效果得以明显增强.
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SOCS1对LIGHT诱导的骨髓来源DC分化成熟的影响
为探讨SOCS1是否参与LIGHT诱导的骨髓来源树突状细胞(BmDC)分化成熟,及其在此过程中的作用.RT-PCR检测受LIGHT刺激后小鼠BmDC、小鼠脾脏来源树突状细胞(sDC)中SOCS1 mRNA水平及BmDC SOCS1 mRNA水平的时间动力学;利用反义核苷酸技术抑制SOCS1的表达,通过流式细胞术(FACS)测定BmDC表面分子CD40、CD86的表达水平来分析阻断SOCS1对LIGHT诱导的BmDC分化成熟的影响.结果显示LIGHT刺激后,BmDC SOCS1 mRNA水平迅速增高,并呈峰度变化,在4 h时达到高峰;正常无SOCS1 mRNA表达的sDC在加LIGHT后可检测到SOCS1 mRNA;所设计SOCS1反义寡核苷酸能特异阻断SOCS1 mRNA;在LIGHT作用下,SOCS1抑制组较非抑制组的CD40表达明显升高(P＜0.05),CD86呈中度升高(P＜0.05).LIGHT在刺激BmDC分化成熟过程中上调了SOCS1的表达,阻断SOCS1使BmDC对LIGHT的反应更敏感,从而使BmDC成熟度更高;SOCS1对LIGHT诱导的BmDC分化成熟有负反馈调节作用.
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SOCS1基因与肝细胞癌的关系研究进展
SOCS1基因位于16p12-p13.1,它编码蛋白SOCS1并属于SOCS蛋白家族,通过抑制JAK-STAT信号转导通路发挥作用,其失活机制主要是甲基化和杂合性缺失.SOCS1在肝细胞癌中广泛甲基化和表达明显降低,提示SOCS1可能是抑癌基因,在肝细胞癌的发生发展中起十分重要的作用.
