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紫花牡荆素与EGCG联合应用对肺腺癌A549细胞的增殖抑制及凋亡作用
目的:研究紫花牡荆素(casticin,CAS)与表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-Epigallocatechin gallate,EGCG]联合用药对肺腺癌A549细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用.方法:培养肺腺癌A549细胞,取对数生长期细胞活性＞95％的细胞进行实验.SRB法考察CAS(0.5,1,5,10,15,20 μmoL·L-1)联合EGCG(1,5,10,15,20,25 μmoL·L-1)对A549细胞的增殖抑制作用;激光共聚焦显微镜观察CAS+EGCG联合用药在A549细胞中的分布行为;流式细胞仪检测CAS+ EGCG联合用药对A549细胞的凋亡作用;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CAS+EGCG用药对A549细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的干预作用.结果:不同浓度各药物在24,48 h对肺腺癌A549细胞增殖的抑制率比较,差异有统计学意义(P＜0.05);各浓度CAS+EGCG用药对肺腺癌A549细胞增殖的抑制率均高于同浓度CAS或EGCG单独用药(P＜0.05).培养至24 h时,5μmoL·L-1CAS与10 μmoL·L-1 EGCG联合用药对肺腺癌A549细胞的增殖抑制率呈协同作用.培养至48 h时,0.5 μmoL·L-1CAS与1μmoL·L-1 EGCG,1 μmoL·L-1CAS与5μmoL·L-1EGCG,15μmoL·L-1 CAS与20 μmoL·L-1 EGCG,20 μmoL·L-1CAS与25μmoL·L-1EGCG联合用药对肺腺癌A549细胞的增殖抑制率呈相加作用;通过激光共聚焦显微镜观察,CAS(5μmoL·L-1)联合EGCG(10 μmoL·L-1)组进入A549细胞的数量高于同浓度CAS或EGCG单独用药.流式细胞仪检测表明,给药后将细胞培养至24 h时,各浓度CAS+EGCG用药对肺腺癌A549细胞凋亡率高于相同CAS或EGCG浓度下单独用药(P＜0.05).Western blot检测显示,与单用药组相比,CAS+ EGCG联合用药可增强Bax蛋白的表达量以及减少Bcl-2蛋白的表达量(P＜0.01).结论:与单用药相比,CAS+EGCG联合用药能够显著增强对A549细胞抑制及诱导凋亡作用,且诱导凋亡作用机制与Bcl-2和Bax蛋白相关.
关键词： 紫花牡荆素 表没食子儿茶素没食子酸酯 A549细胞 凋亡 抗增殖作用 -
紫花牡荆素壳聚糖微球的制备及体外释药性能考察
目的:制备紫花牡荆素壳聚糖微球,优化其制备工艺,并考察其体外释放性质.方法:以山梨糖醇酐单油酸酯和聚山梨酯-80为乳化剂,液体石蜡为油相,戊二醛作交联剂,采用乳化交联法制备紫花牡荆素壳聚糖微球.利用Design-Expert8.0.6软件优化紫花牡荆素壳聚糖微球的制备工艺,扫描电镜观察目标微球形态,动态透析法检测目标微球的体外释药性能.结果:紫花牡荆素壳聚糖微球佳制备工艺条件为油水相比例6∶1,交联时间3h,转速1 400 r·min-1;目标微球形态较圆整、粒径分布较为均匀,平均粒径7.92μm,载药量29.20％,包封率39.23％.紫花牡荆索壳聚糖微球在4 h的药物累计释放率26.75％,之后释药平缓,释放变慢,48 h的药物累计释放率95％.微球在磷酸盐缓冲溶液(pH 7.4)中的释放遵循Higuchi方程.结论:优化的制备工艺简单易行.紫花牡荆素壳聚糖微球载药量较高,具有一定的缓释作用.
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活性氧在荆花牡荆素诱导人肺癌A549细胞凋亡中的作用
目的 探讨紫花牡荆素(CAS)诱导人肺腺癌A549细胞凋亡及其机制.方法 体外培养A549细胞.MTT法测定CAS对A549细胞增殖的抑制;Annexin V/PI双染色分析细胞凋亡率;H2DCFH-DA探针流式细胞术分析活性氧(ROS)生成.结果 CAS能抑制人肺癌A549细胞增殖,呈浓度依赖性.Annexin V/PI法检测结果显示10 μmol/L的CAS作用A549细胞12 h、24 h、48 h后,其凋亡率分别为22.39%、38.66%、64.82%.H2DCFH-DA探针流式细胞术分析表明,完全培养基组、溶媒(0.1% DMSO)组对A459细胞作用0 h;CAS(10 μmol/L)对A549细胞作用3 h、6 h、12 h;N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC,10 mmol/L)+CAS(10 μmol/L)组对A549细胞作用6 h的ROS生成水平分别为8.47、15.26、66.2、74.1、82.2、67.3,随着CAS作用时间延长,细胞内ROS水平增加.NAC对细胞凋亡有抑制作用.结论 CAS可诱导A549细胞凋亡,其作用机制可能与提高细胞内ROS产生增加有关.
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紫花牡荆素抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖与侵袭能力的研究
目的 观察紫花牡荆素对乳腺癌MCF-7细胞株增殖与侵袭能力的影响并探讨其分子机制.方法 应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法与侵袭实验检测紫花牡荆素对MCF-7细胞增殖与侵袭能力的影响,应用反转录PCR、Western blot法、Tunel法检测紫花牡荆素对基因表达、蛋白表达、细胞凋亡的影响.结果 不同浓度紫花牡荆素均抑制MCF-7细胞增殖水平,同未加药对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),5、10、20 μmol/L紫花牡荆素作用后,MCF-7细胞迁移数与未处理组相比分别降低20.3％、44.4％和50.3％(P＜0.05).以10 μmol/L紫花牡荆素处理后,凋亡细胞数增多,可以上调Bax 与Caspase-3蛋白的表达水平,下调基质金属蛋白酶(MMP )-2与MMP-9的mRNA和蛋白表达水平.结论 紫花牡荆素对于乳腺癌细胞恶性增殖与侵袭能力具有显著抑制作用.
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欧洲药典(第5版增补本5.4):穗花牡荆果实(Agnus castus fruit)
本品为马鞭草科植物穗花牡荆Vitex agnus-castus L.成熟、干燥的全果.紫花牡荆素(分子式C19H18O8;分子量374.3)至少0.08%.其肉眼和显微镜下特征见鉴别试验A和B.
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紫花牡荆素干预食管鳞状细胞癌细胞转移的分子机制
目的 研究紫花牡荆素对人食管鳞状细胞癌(食管鳞癌)细胞恶性转移能力的抑制效应并探讨其分子机制. 方法 人食管鳞癌细胞株EC9706与EC109细胞经紫花牡荆素处理后,以MTT比色法测定细胞增殖能力,侵袭与迁移实验检测细胞转移能力,Western blot检测转移相关蛋白表达变化. 结果 不同浓度紫花牡荆素处理可显著抑制EC9706与EC109细胞的增殖、侵袭与迁移能力,同未加药组比较差异均有统计学意义(P<0. 05);紫花牡荆素处理下调兔抗人血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloprotein-ase2,MMP2)与基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase9,MMP9)表达水平,上调上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、周期素依赖性激酶10(cyclin-dependent kinase 10, CDK10)与兔抗人受体O型蛋白质酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phos-phatase receptor type O, PTPRO)表达. 结论 紫花牡荆素对食管鳞癌细胞恶性转移能力有明显的抑制作用,下调VEGF、MMP2与MMP9表达,上调E-cadherin、CDK10与PTPRO可能是其抑制转移的分子机制.
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紫花牡荆素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的研究
目的:研究紫花牡荆素(Casticin)对肝癌HepG2细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用,并探讨其作用机制.方法:用终浓度为0、0.5、1.0、2.0umol/L的Casticin作用于HepG2细胞,于12、24、48 h后采用MTT法检测细胞增殖抑制率;Hoechst33342核染色,观察细胞形态学变化;24h后收集各组肝癌HepG2细胞,流式细胞术检测细胞周期及凋亡率;RT-PCR检测survivin mRNA表达.结果:MTT法检测显示,Casticin对肝癌HepG2细胞有增殖抑制作用,并存在浓度和时间依赖关系;Hoechst33342染色后,可见核染色质凝集,凋亡细胞呈致密浓染,与对照组相比,Casticin处理后凋亡细胞比例增加;Casticin作用24h后,细胞被阻滞于G2/M期,随药物质量浓度的增加,细胞凋亡率逐渐增加;RT-PCR结果显示,Casticin下调肝癌HepG2细胞survivin mRNA表达.结论:Casticin在体外对肝癌HepG2细胞有明显的增殖抑制和凋亡诱导作用,初步推断Casticin诱发肝癌细胞凋亡与其对survivin基因表达的抑制有关.
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新疆一枝蒿总黄酮提取物中2种成分在模拟胃肠道溶液中的稳定性
目的 研究新疆一枝蒿Artemisia rupestrisL.总黄酮提取物中紫花牡荆素、6-去甲氧基-4-O-甲基茵陈色原酮在模拟胃肠道溶液中的稳定性.方法 采用HPLC法测定2种成分含有量,分别评价提取物中两者及其单体在不同pH值(2.5、5.8、8.0)溶液、不同时间点(0、0.5、1、2、4、6、8h)下的稳定性.结果 紫花牡荆素、6-去甲氧基-4-O-甲基茵陈色原酮的单体或两者共存于提取物中的酸碱稳定性均良好,后者稳定性略高于前者;胃蛋白酶和胰蛋白酶不影响其酸碱稳定性.结论 总黄酮提取物中紫花牡荆素、6-去甲氧基-4-O-甲基茵陈色原酮单体之间可能形成一定的相互作用,从而增加了两者的稳定性.
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紫花牡荆素体内抗炎作用的研究
目的:探讨中药蔓荆子中主要成分紫花牡荆素的抗炎作用.方法:通过急性抗炎模型--二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验、鸡蛋清致大鼠足跖肿胀实验以及腹腔注射0.7%醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的实验,观察紫花牡荆素的抗炎作用.结果:紫花牡荆素对二甲苯所致小鼠耳廊肿胀、鸡蛋清所致大鼠足肿胀以及醋酸所致小鼠毛细血管通透性增加均有明显的抑制作用.结论:紫花牡荆素具有明显的体内抗炎作用,为蔓荆子抗炎作用的有效成分.
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紫花牡荆素体外抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖的研究
背景与目的:紫花牡荆素(Casticin)是一种从蔓荆子中提取的具有广泛药理活性的多甲基黄酮化合物.有研究表明Casticin能诱导多种肿瘤细胞凋亡,但其对人宫颈癌细胞的作用尚缺乏文献资料.本研究旨在探讨Casticin抑制体外培养人宫颈癌HeLa细胞增殖作用及其机制.方法:MTT法检测Casticin对人宫颈癌HeLa细胞活性的抑制作用;平皿集落形成法检测Casticin对HeLa细胞集落形成率的影响;流式细胞术(FCM)检测Casticin对HeLa细胞周期的影响;采用Western blot分析蛋白表达的变化.结果:Casticin对人宫颈癌HeLa细胞增殖活性有较强的抑制作用,呈剂量和时间依赖性,作用48 h的IC50值为2.82 μ g/mL;与对照组比较,细胞集落形成率明显下降(P＜0.05);Casticin作用48 h,以浓度依赖方式阻滞HeLa细胞于G2/M期,同时降低Cyclin B1蛋白表达,增高P21蛋白表达.结论:Casticin抑制HeLa细胞的增殖作用可能与其降低Cyclin B1蛋白表达、活化P21蛋白有关.
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紫花牡荆素对胰腺癌细胞凋亡的作用及其机制
目的:探讨紫花牡荆素对人胰腺癌细胞凋亡的作用及其可能的作用机制.方法:应用CCK-8法检测0、10、20、30和40 μmol/L紫花牡荆素处理24、48和72 h后,胰腺癌Miapaca-2和Panc1细胞的增殖情况.应用克隆形成实验、FCM法和蛋白质印迹法分别检测0、10、20和30 μmol/L紫花牡荆素对胰腺癌Miapaca-2和Panc1细胞克隆形成、细胞凋亡及剪切型caspase-3、剪切型caspase-9、剪切型多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(phosphorylated phosphatidylinositol-3-kinase,p-PI3K)及磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-PKB,p-AKT)蛋白表达的影响.结果:10、20、30和40 μmol/L紫花牡荆素可明显抑制胰腺癌Miapaca-2和Panc1细胞的增殖,且呈剂量和时间依赖性(P值均＜0.05).紫花牡荆素对Miapaca-2和Panc1细胞的克隆形成也有明显的抑制作用(P值均＜0.01),且能促进Miapaca-2和Panc1细胞的凋亡(P值均＜0.05).经紫花牡荆素处理后,Miapaca-2和Panc1细胞中剪切型caspase-3、剪切型caspase-9和剪切型PARP蛋白的表达水平均显著上调(P值均＜0.05),而p-PI3K和p-Akt蛋白的表达水平均显著下调(P值均＜0.01).结论:紫花牡荆素可抑制胰腺癌细胞的增殖,并促进其凋亡,这一作用可能与紫花牡荆素调控线粒体凋亡途径相关蛋白的表达水平有关.
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正交试验优选蔓荆子提取工艺研究
目的:依据蔓荆子中有效成分的理化性质,优选蔓荆子的提取工艺条件.方法:采用L9(34)正交试验设计,以药材中总黄酮和紫花牡荆素的提取率作为考察指标,采用UV法和HPLC法测定,所得结果进行方差分析,综合两个指标结果确定佳工艺.结果:蔓荆子药材粗粉,用20倍量的95%乙醇作提取溶剂,回流提取3次,每次1 h为佳工艺.结论:优选出的工艺稳定,方法可行.
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维药一枝蒿中紫花牡荆素成分的分离制备、鉴定及含量测定
目的 研究维药一枝蒿中指标成分紫花牡荆素的单体制备方法,并建立其含量测定方法.方法 利用HPD-450型大孔树脂吸附法提取富集紫花牡荆素,配合Sephadex LH-20柱色谱技术与波谱手段,分离纯化并鉴定其化学结构;含量测定色谱条件:采用色谱柱为Agilent HC-C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-水(70:30);柱温30℃,检测波长350 nm,流速1.0 mL·min-1.结果 紫花牡荆素纯度为99.7％,在9.42～ 75.36μg·mL-1(r=0.999 6)内呈良好的线性关系,平均回收率为109.2％(RSD=2.12％).结论 大孔吸附树脂纯化可以获得高纯度紫花牡荆素;建立的含量测定方法简便、准确、稳定,可以用于维药一枝蒿的质量控制.
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顺铂联合紫花牡荆素抑制人卵巢癌细胞增殖的研究
目的:探讨顺铂( DDP)是否具有敏化紫花牡荆素(CAS)抑制体外培养人卵巢癌SKOV3细胞生长增殖的作用.方法:体外培养SKOV3细胞；用MTT和平皿克隆法检测顺铂、CAS在亚细胞毒性浓度下,以及两者联合对SKOV3细胞生长增殖的影响；用FCM检测CAS对SKOV3细胞周期的影响；Western blot分析p21和cyclin B1蛋白表达的变化.结果:顺铂具有敏化CAS抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖活性的作用；与亚细胞毒性浓度的顺铂和CAS相比,顺铂和CAS联合作用SKOV3细胞集落形成率明显下降(P＜0.01)；经亚细胞毒性浓度的顺铂和CAS联合作用48h后SKOV3被阻滞于G2/M期,同时cyclin B1蛋白表达降低,p21蛋白表达增高.结论:顺铂具有敏化CAS抑制体外培养人卵巢癌SKOV3细胞生长增殖的作用,其机制可能是通过降低cyclin B1表达、活化p21实现的.
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紫花牡荆素对肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响
目的 探讨紫花牡荆素对肺癌A549细胞(简称肺癌细胞)增殖及凋亡的影响,为其用于临床治疗肺癌提供依据.方法 取对数生长期的肺癌细胞,分别加入终浓度为0.1、0.5、1、5、10、25、50、100 μmol/L紫花牡荆素溶液,分别作用24、48 h,采用SRB法检测增殖抑制率,计算50％抑制浓度(IC50).取对数生长期的肺癌细胞,分别加入终浓度为0、5、15 μmol/L紫花牡荆素溶液,Hoechst33258染色后共聚焦显微镜下观察细胞凋亡形态;采用流式细胞术检测细胞周期时相分布.结果 随紫花牡荆素浓度升高,作用24、48 h的肺癌细胞增殖抑制率均呈上升趋势.经0.5～ 100 μmol/L紫花牡荆素作用48 h的肺癌细胞增殖抑制率均明显高于同一浓度作用24h的肺癌细胞(P均＜0.05).紫花牡荆素作用24、48 h时的IC50分别为14.74、8.16 μmol/L.随紫花牡荆素浓度升高,作用24h的肺癌细胞核染色质固缩偏向一边、核裂解和细胞碎片等细胞凋亡形态学改变越来越明显;与同浓度紫花牡荆素作用24h比较,作用48 h的肺癌细胞凋亡形态学改变更明显.经0、5、15 μmol/L紫花牡荆素作用24、48h的肺癌细胞凋亡率均逐渐升高,处于G1、S期的比例均逐渐降低,处于G2/M期的比例均逐渐升高(P均＜0.05).与同一浓度紫花牡荆素作用24h的肺癌细胞比较,经5、15 μmol/L紫花牡荆素作用48 h的肺癌细胞凋亡率均升高,处于G1、S期的比例均降低,处于G2/M期的比例均升高(P均＜0.05).结论 紫花牡荆素可将肺癌细胞阻滞于G2/M期,具有增殖抑制作用和凋亡促进作用,并呈时间、浓度依赖性.
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紫花牡荆素对宫颈癌HeLa细胞上皮间质转化、侵袭和迁移作用的影响
目的 探讨紫花牡荆素(CAS)对宫颈癌HeLa细胞上皮间质转化(EMT)、侵袭和迁移作用的影响及其可能机制.方法 将体外培养的HeLa细胞用不同浓度的人转化生长因子β1处理,倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化;用HE染色法观察不同浓度CAS对间质转化的HeLa细胞形态学的影响;用Transwell法检测细胞侵袭、迁移能力;用Westem blot分析细胞E-cadherin、N-cadherin和Twist蛋白表达情况.结果 CAS能抑制HeLa细胞向间质细胞形态转化,并下调N-cadherin蛋白的表达及上调E-cadherin蛋白的表达;与对照组相比,CAS作用72 h后能抑制宫颈癌HeLa细胞的侵袭和迁移能力,并下调Twist蛋白的表达.结论 CAS能抑制宫颈癌HeLa细胞EMT、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与其下调Twist蛋白表达相关.
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紫花牡荆素抗肿瘤作用及其作用机制
多甲氧基黄酮类化合物紫花牡荆素是中国传统中草药蔓荆子的主要活性成分之一,具有抗炎、抗肿瘤等功效.本文对紫花牡荆素的来源、构效关系、抗肿瘤作用及其作用机制等的研究进展进行总结,以期为紫花牡荆素抗肿瘤作用机制的深入研究和临床开发应用提供参考.
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紫花牡荆素抑制氧化应激诱导的HUVEC细胞凋亡
目的 研究紫花牡荆素(CAS)对H2 O2氧化应激诱导的HUVEC细胞凋亡的影响及其可能机制.方法 体外培养HUVEC细胞,在添加H2 O2氧化应激诱导之前先加入不同浓度的CAS(5、10和20 μmoL/L)预孵30min,用MTT法观察各组细胞生长活性;用AO/EB染色和FCM法检测HUVEC细胞凋亡情况及其凋亡率;用Western blot检测细胞凋亡相关蛋白表达活性.结果 MTT提示与H2O2组相比较,CAS呈浓度和时间依赖性增加H2 O2氧化应激诱导的HUVEC细胞的生长活性(P＜0.05),降低HUVEC细胞的凋亡数量及凋亡率(P＜0.05);同时下调Cytochrome C、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达降低(P＜0.05),激活Bcl-2蛋白表达(P＜0.05),而Bax蛋白表达不变(P＞0.05),Bcl-2/Bax上升(P＜0.05).结论 CAS拮抗H2 O2氧化应激诱导的HUVEC细胞凋亡可能与其调节内源性线粒体凋亡途径有关.
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紫花牡荆素对人宫颈癌裸鼠移植瘤生长的影响及其机制
目的：研究紫花牡荆素（CAS）对人宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长的影响及其机制。方法建立人宫颈癌HeLa细胞裸鼠皮下移植瘤模型，并随机分成5组，每组5只：生理盐水组、顺铂组、低剂量CAS组、中剂量CAS组和高剂量CAS组。观察和比较各组裸鼠移植瘤的体积和重量，裸鼠体重的变化，裸鼠血清乳酸脱氢酶、谷丙转氨酶、肌酐值和外周血白细胞计数的变化；FCM测定瘤组织细胞凋亡率；Western blot分析瘤组织细胞内p21和cyclin B1的蛋白表达。结果 CAS可显著抑制人宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤的体积和重量的增加，呈作用剂量和时间依赖性；而对裸鼠的体重、谷丙转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酐值和外周血白细胞计数均无明显的影响。CAS作用16天后，裸鼠移植瘤细胞的凋亡率呈剂量依赖性增加，cyclin B1的蛋白表达降低，p21的蛋白表达增高。结论 CAS具有抑制人宫颈癌裸鼠移植瘤生长的作用，可能与其降低cyclin B1的蛋白表达，增加p21的蛋白表达，促进细胞凋亡有关。
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紫花牡荆素对肝癌细胞凋亡的影响及其机制研究
目的 研究紫花牡荆素(casticin) 诱导肝癌细胞凋亡的作用及其分子机制.方法 体外培养人肝癌PLC/PRF/5 和Hep G2 细胞系.通过碘化丙啶(PI)染色流式细胞术分析细胞凋亡率,ELISA 法检测组蛋白/DNA 碎片的含量,琼脂糖凝胶电泳观察DNA 断裂条带,Western blotting 检测细胞内DR4 和DR5 蛋白表达水平.结果 Casticin以浓度依赖方式增加PLC/PRF/5 和HepG2 细胞系sub-G1 细胞的百分率和组蛋白/DNA 片段的含量(P<0.05),casticin(30 μmol·L-1) 作用细胞24 h 后可出现DNA 梯度条带;casticin 可以浓度依赖性方式诱导PLC/PRF/5 内DR5蛋白水平的表达,但对DR4 蛋白表达无影响;DR5/Fc 嵌合蛋白预处理能有效降低casticin 诱导的细胞凋亡.结论 Casticin 可以浓度依赖性方式诱导肝癌细胞凋亡,其机制可能与上调细胞的DR5 蛋白表达有关.
