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2006-2008年广东省水产品和食物中毒患者副溶血性弧菌分离株血清分型研究
目的 研究2006-2008年广东地区副溶血性弧菌食物中毒患者分离株和水产品分离株的血清型分布.方法 采用血清玻片凝集试验对2006-2008年我中心收集的279株副溶血性弧菌进行血清分型,这些菌株均由广东省食品污染物监测网和省食源性致病菌监测网分离获得,分离地区覆盖广东的粤西、粤北、粤东和珠三角地区,其中食物中毒患者分离株176株,水产品分离株103株.结果 2006-2008年收集的279株副溶血性弧菌中,在176株食物中毒患者分离株中完全分型168株,分型率为95.45%,共分出15个血清型,以O3:K6为主,占73.30%(129/176);在103株水产品分离株中完全分型57株,分型率为55.34%,其血清型别分布较分散,未见优势菌型,共分出40个血清型,主要集中在O1,O2,O3,O4,O5,O10,O11等7个菌群.结论 2006-2008年广东各地区上送的副溶血性弧菌食物中毒患者分离株以O3:K6为主,血清型地区差异不明显;水产品分离株血清型呈多样性,且与食物中毒患者分离株的血清型不一致.
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原花青素的提取分离及药理作用研究进展
通过查阅国内外相关文献,对植物中黄酮类化合物原花青素的植物资源分布、分离提取、药理作用及其在医药等领域的应用进行综述,旨在为原花青素的进一步研究利用及综合开发提供依据.
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黄蜀葵花中金丝桃苷的提取分离及纯度检测
目的 研究黄蜀葵花中金丝桃苷的提取、分离、纯化方法.方法 采用聚酰胺柱层析、梯度洗脱方法提取分离黄蜀葵花中的金丝桃苷,以氢谱和碳谱鉴定其结构,以薄层色谱法、HPLC法进行纯度检查.结果 制得的金丝桃苷经薄层色谱法检查无杂质斑点,经HPLC法检测其纯度98.5%以上.结论 所建立的分离、纯化方法简便,成本低.
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重组蟹金属硫蛋白的分离纯化及其在兔体内的抗氧化作用
并提高其纯度.GST-MT在短期内可增强实验兔体内抗氧化酶活性.
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HPV检测在宫颈癌筛查中的应用
目的 探讨女性人乳头瘤状病毒(HPV)感染阳性率及临床意义.方法 以2008-01-2009-12抚宁县妇幼保健院HPV检测的患者,对HPV阳性者行活检及病理学检查.结果 该组人群1 452例,HPV阳性者429例,阳性率29.55％.阴道镜活检373例,病理为炎症者265例(71.05％),正常者20例(5.36％),CIN 88例(23.59％),其中CIN Ⅰ 68例(18.23％％);CINⅡ13例(3.49％);CINⅢ7例(1.88％).其年龄20～50岁,高危型HPV感染在各年龄组之间差异有统计学意义.结论 高危型HPV感染是CIN发生的主要病因,结合组织活检,提高CIN的检出率.
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蛋白组学研究中血管内皮细胞膜蛋白的分离与纯化的概述
本文简要介绍了血管内皮细胞膜蛋白的蛋白组学分析中对于膜蛋白的分离和纯化所遇到的技术困难和解决方案。主要从分离、纯化血管内皮细胞膜蛋白的目的，所遇到的困难和解决方案以及分离、纯化技术的新进展三个方面进行阐述。细胞膜及其相关蛋白是细胞内外通道的重要生物学组成部分。膜蛋白的研究日益受到重视，作为基础膜蛋白的分离和提纯是整个实验的成功关键。
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成人肝脏干细胞研究现状及展望
Malcolm等[1]认为所谓干细胞(stem cell)为不分化而长期生存,且保持多种分化潜能的一种细胞群,而祖细胞(progenitor cell)则为一类具有分化能力、自我更新、自我维持能力受限制,仅有单向或双向分化潜能且生存时间相对较短的细胞群.近年来,成人肝脏干细胞(hepatic stem cell, HSC)的研究成了国内外研究的热点.胚胎4～6个月时,肝脏是造血的主要场所,即是红细胞、骨髓细胞、B细胞、T细胞和巨核细胞生成的场所.出生后不久,这些造血功能就停止.近年来,许多学者发现当肝组织受到严重破坏时,肝组织内幼稚细胞有分化的证据,如肝组织内一种卵圆细胞(oval cell )可分化为肝细胞、胆管上皮细胞[2,3].这种卵圆细胞被认为来自赫氏小管区(the canal of hering)和胆管树终末处[4].同时也发现了这种幼稚细胞表达大量干细胞表面的标志物,如CD34、CD45、CD38、CD69、C-kit等抗原[5-12].有学者成功分离和提纯C-kit阳性细胞,并进行了体外培养[7].于是许多学者确信成人肝组织内所存在的这种幼稚细胞来自于肝脏干细胞[5-7].但也有许多学者研究了骨髓干细胞在肝细胞再生中的作用,发现成人肝组织内的幼稚细胞直接来源于骨髓干细胞[1,8、13-15].也有学者推测这种幼稚细胞可能一部分来自于骨髓干细胞,一部分来自于肝脏自身干细胞[13].不管成人肝组织内是否真正存在自身干细胞,但祖细胞肯定存在.现已证实成人肝组织内确实存在着一种能使干细胞向淋巴细胞和肝细胞分化的微环境,且干细胞在肝损伤修复、免疫排斥和肿瘤免疫反应中发挥一定作用.我们就这些问题作一综述.
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扛板归化学成分的研究
目的:研究扛板归(Polygonum perfoliatum L.)的化学成分.方法:利用硅胶、Sephadex LH-20柱色谱等方法对扛板归进行分离纯化,根据理化性质、波谱数据(质谱、核磁共振谱)鉴定化合物的化学结构.结果:分离鉴定出12个单体化合物,分别为槲皮素(quercetin, 1)、异鼠李素(isorhamnetin,2)、金丝桃苷(hyperrosid,3)、槲皮苷(quercitrin,4)、原儿茶酸(protocatechuic acid,5)、没食子酸(gallic acid,6)、鞣花酸(ellagic acid,7)、3,3'-二甲氧基-鞣花酸(3,3'-di-O-methyl ellagic acid,8)、1-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖(1-O-galloyl-B-D-glucose,9)、黏酸二甲酯-2-O-没食子酰基(mucic acid dimethyl ester-2-O-gallate,10)、咖啡酸乙酯(ethyl caffeate,11)、黏酸二甲酯(mucic acid dime-thyl ester,12).结论:化合物10和12首次从该属植物中分离得到,化合物2、3、7、8和9首次从扛板归中分离得到.
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噬菌体裂解与BACTECMGIT960检测结核菌方法比较
目的:比较两种检测结核菌方法的差异.方法:我院肺结核患者痰标本160份分别做噬菌体裂解法与BACTECMGIT960法.结果:噬菌体裂解法阳性率为50.6%,BACTECMGIT960法阳性率为51.8%.结论:两种方法有高度一致性,但噬菌体裂解法特异性高,报告时间短,操作简单,无需昂贵的自动化仪器,便于在一般实验室使用.
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蚯蚓脱氧核糖核酸酶纯化及酶学性质
目的:从蚯蚓组织中纯化得到一种脱氧核糖核酸酶(取名为蚯蚓脱氧核糖核酸酶,简称EDNase)并研究其酶学性质.方法:采用丙酮沉淀、离子交换层析、高效液相层析、SDS-PAGE电泳,毛细管等点聚焦电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱等方法.结果:经证实这种纯化方案的纯化倍数是137,酶得率为45.6%.EDNase的相对分子质量约为63 000.Mg2+,Mn2+和ca2+对酶活性有较强的抑制作用,而Na+则轻微的提高酶的活性.在pH 4.4～5.2的范围内EDNase酶活性稳定,其适pH值为4.8.该酶的适温度为37℃,在40℃范围内酶具有较高的稳定性.EDNase的等电点为6.20.在以小牛胸腺DNA为底物的条件下,酶的Km为1.52 g/L,Vmax为4.89 mg/(mL·min).该酶可有效降解超螺旋质粒DNA,线状λ-噬菌体DNA和细菌染色体DNA,对RNA未见任何降解作用.结论:这种酶具有独特的酶学性质,不同于以往所知的脱氧核糖核酸酶.
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人PSMP重组蛋白在CHO细胞中表达、纯化及功能鉴定
目的:构建新的具有趋化作用的人类细胞因子PSMP的真核表达载体,在仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO)中表达并纯化,为PSMP的功能机制研究奠定基础.方法:从pcDNA3.1-PSMP-myc/His中切下PSMP-myc/His片段,插入pMH3表达载体.利用电穿孔法将该表达载体转染CHO细胞,G418抗性筛选稳定克隆株.以Dot blot及Western blot法检测上清液中PSMP蛋白的表达,利用有限稀释法对抗性筛选出的混合克隆单克隆化,悬浮无血清大批培养工程细胞,通过镍亲和层析法纯化蛋白,SDS-PAGE电泳分析蛋白纯度,Boyden小室体外趋化实验分析蛋白功能活性.结果:PSMP-myc/His基因插入pMH3载体后成功构建真核表达载体pMH3-PSMP,转染CHO细胞后经2次克隆化获得稳定表达PSMP的基因工程细胞株.镍亲和层析纯化的重组蛋白PSMP纯度达95％以上且具有生物学活性.结论:成功构建了PSMP蛋白的真核表达载体,并获得其稳定表达的CHO细胞株,获得了较高纯度的、具有生物学活性的重组蛋白,为下一步PSMP功能和机制研究提供有用工具.
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红树植物白骨壤化学成分的分离鉴定
目的:研究红树植物白骨壤(Avicennia marina)叶子部位次生代谢产物的结构多样性.方法:采用多种色谱方法进行分离纯化,通过波谱方法,并对照文献鉴定化合物结构.结果:分离并鉴定了21个苯丙素和萘醌类化合物,包括3个新化合物,分别是erythro-guaiacylglycerol-β-ferulic acid ether(1),marinnone A(16)和marinnone B(17);18个已知物,分别是threo-guaiacylglycerol-β-ferulic acid ether(2),eleutheroside E2(3),(+)-lirioresinol A(4),dihydroxymethyl-his(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)tetrahydrofuran-9-O-β-glucopyranoside(5),(+)-lyonire-sinol 3α-O-β-D-glucopyranoside(6),(-)-lyoniresinol 3α-O-β-D-glucopyranoside(7),epi-pinoresinol(8),leucoseceptoside A(9),jionoside C(10),salsaside A(11),ilicifolioside A(12),acteoside(13),isoacteoside(14),ethyl ferulate(15),avicennone D(18),avicenone E(19),avicennol C(20),stenocarpoquinone B(21),其中化合物1和2互为差向异构体,16和17互为同分异构体.结论:化合物1,16,17为新化合物,13个已知化合物2～12,14,15为首次从该属植物中获得.
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人成熟转化生长因子β1蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定
目的 构建人成熟转化生长因子β1(hmTGF-β1)的原核表达载体,表达并纯化hmTGF-β1蛋白.方法 应用RTPCR方法 获得hmTGF-β1基因,连接至自带6His标签表达载体pET23b,构建原核表达质粒pET23b-hmTGF-β1,诱导表达hmTGF-β1融合蛋白,镍亲合层析法纯化融合蛋白,并对纯化产物进行纯度分析.结果 成功构建了hmTGF-β1原核表达质粒pET23b-hmTGF-β1,IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE电泳分析,在约15kD处出现了一条新的蛋白条带,Western Blot结果显示该条带能够与His抗体特异性结合.应用Ni-NTA亲和层析法纯化目的 蛋白,分析纯度达95%.结论 成功构建了hmTGF-β1蛋白的原核表达质粒,并成功表达与纯化hmTGF-β1蛋白,为进一步复性、获得有活性的hmTGF-β1打下基础.
关键词： 转化生长因子β1(TGF-β1) 原核表达 重组蛋白 分离和提纯 -
立止血致过敏性休克1例护理体会
1 药物介绍1.1 立止血是由巴西蛇的毒液制备得到的,是经过分离和提纯的血凝酶,绝对不含神经毒素及其他毒素.适用于须减少或止血的各种医疗手段,如外科、内产、妇产科、眼科、耳鼻喉科、口腔科等临床科室的出血及出血性疾病.预防手术前用药,可减少出血倾向,避免手术部位及手术后出血.
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重组人白介素18的发酵、纯化及功能鉴定
目的:利用构建的重组菌株Pichia pastoris X-33/hlL-18,在3.7L发酵罐中表达重组人自介素18(hIL-18),探讨其大规模发酵及纯化工艺.方法:复苏工程菌X-33/hIL-18于BMGY培养基,在其A600鲫达到6左右时转入发酵罐进行高密度发酵.发酵液经过滤浓缩柱、疏水层析和阴离子交换层析分离纯化.结果:工程菌在3.7 L发酵罐采用甲醇诱导补料批式发酵,在pH 6.0,溶氧值(DO)20%～30%,温度28℃,甲醇诱导48 h重组hIL-18的表达产量为202 mg/L,发酵液经纯化后纯度可达97%以上,并初步证明重组hIL-18能协同IL-2诱导PBMCs分泌IFN-γ和协同IL-2增强NK细胞的杀伤活性.结论:利用Pichia pastoris分泌型表达系统和建立的分离纯化方法,能获得大量较高纯度的重组hIL-18,为进一步研究其活性和功能奠定基础.
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虾有效致敏组分的提取及在sIgE检测中的初步应用
目的：通过改善虾类包被抗原质量，提高血清特异性IgE(sIgE)检测的敏感性。方法制备中华对虾蛋白溶液，经酶联免疫印迹实验鉴定主要的致敏蛋白组分，葡聚糖凝胶层析法初步分离大于55 ku的蛋白组分，SDS-PAGE技术分析其蛋白。分别使用虾蛋白溶液和分离的蛋白作为包被抗原包被96微孔板，采用酶斑点印迹和间接酶联免疫吸附法（间接ELISA法）初步评价纯化后的抗原是否能够提高血清sIgE检测结果的敏感性。结果酶联免疫印迹实验显示中华对虾蛋白溶液中>55 ku的蛋白组分是主要的致敏蛋白，葡聚糖凝胶层析法初步分离了>55 ku的蛋白组分，其中主要包含10条明显蛋白条带；酶斑点印迹显示，以纯化后蛋白作为包被抗原，可提高弱阳性血清斑点光密度。同时，两种包被抗原的间接ELISA结果显示，虾有效致敏成分作为包被抗原时，92.9%的虾过敏患者血清sIgE检测值升高。结论采用中华对虾有效致敏原组分作为虾过敏检测抗原能提高血清sIgE检测结果的敏感性。
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乳痛消结颗粒中4味药材的薄层色谱鉴别
乳痛消结颗粒是本院经多年临床实践研制出来的治疗乳腺增生病的有效方药,由昆布、丹参、白芍药、当归、淫羊藿等15味中药组成,具有软坚散结、疏肝解郁、活血调经、理气止痛、助阳通络之功.
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1例立止血致速发型超敏反应的急救与护理
立止血是从巴西蛇的毒液中分离和提纯后精制而成.它是一种单链糖蛋白,由17种氨基酸组成.它具有很好的止血作用,不良反应极低,偶见过敏样反应.
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海洋生物废弃物核酸提取工艺研究(不同萃取液对提取率的影响)
应用多种萃取液体系,从海洋生物废弃物鱿鱼肝脏中提取核酸,针对传统有机溶剂提取工艺进行改进.改进后的工艺与原工艺比较,核酸提取量提高30%～60%,整体工艺得到简化,而且避免了有机物残留,显示出良好的应用前景.
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我院2005-2007年奥曲肽和生长抑素市场状况分析
生长抑素(somatostatin,SST)是1973年由Brazeau等从羊的下丘脑分离和提纯的生长激素释放抑制因子[1].研究证实,SST几乎对机体所有的生理性内分泌反应均有抑制作用,而且能广泛抑制细胞增殖活性,具有广泛的生理学作用,并与许多疾病的发生和发展有着密切关系,主要有4项抑制作用:神经传递、腺体分泌、平滑肌收缩和细胞增殖.
