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应用DNA探针检测石蜡包埋组织中结核杆菌DNA的研究
结核病是严重危害人类健康的传染病,近年来发病呈上升趋势.由于外界理化环境的影响及菌体的变异,传统抗酸染色阳性率大为降低.
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抗原受体基因重排PCR分析的石蜡包埋组织DNA提取方法的探讨
抗原受体基因(ARG)重排PCR克隆性分析是淋巴瘤辅助诊断重要分子技术.该项技术从上个世纪90年代应用以来,经历了许多重要的技术上的改进,包括DNA提取、引物设计、产物检测手段等[1-4].
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石蜡包埋组织中提取结核杆菌-DNA的比较
20世纪80年代以来,结核病出现疫情回潮现象,卫生部今年公布的我国传染病发病率中,结核病居首位.早期诊断、早期治疗是控制传染源并使其有效治疗的关键.用PCR技术检测临床标本中的结核杆菌,为结核病的诊断提供了快速有效的方法.在实际工作中,我们发现由于某些干扰因素的存在,组织中结核杆菌-DNA的检测仍存在诸多问题[1],模板的有效提取直接影响扩增效率.从实际应用的角度出发,我们选取了4种方法进行结核杆菌-DNA提取的比较,现报道如下.
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石蜡组织提取DNA 4种方法的比较
目前,从石蜡包埋组织中提取DNA在数量和质量上都不能令人满意[1].而按常规酚氯仿法抽提DNA,过程长,有毒性,用于PCR扩增,成功率较低.我们应用4种不同方法从石蜡包埋人胃癌组织中提取DNA,用于PCR扩增,从中摸索出一个简便,经济,实用的方法,现报道如下.
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成批蜡块修切法在常规制片中的应用
常规石蜡组织块(简称"蜡块")切片方法大致分两类:①用废旧刀粗修蜡块,接着更换或移动新刀进行细切,形成短时内"一修一切"的操作;②直接用新刀修切蜡块.两者相比,前者切片质量较佳、节省刀片,但频繁更换刀片操作烦琐、费时;后者省时但费刀.我们取前者的优点并辅助其他技巧对蜡块成批修切,在制片中收到良好效果.
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介绍一种石蜡组织标本RNA与DNA共提取的方法
近几年,随着对恶性肿瘤发生发展分子机制的深入研究,靶向治疗在肿瘤的治疗领域发挥着越来越重要的作用,因此个体化分子检测肿瘤中是否存在靶向药物的相应分子靶点[1],已成为临床医师实施靶向药物治疗的依据.由于石蜡组织同时提取DNA和RNA时需要的标本量较大,尤其对于穿刺组织因标本量的局限性,有的只能开展部分检测项目.本文介绍一种石蜡组织标本RNA和DNA共提取的方法,可以大大减少标本的使用量.
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重复使用二甲苯对荧光原位杂交的影响
二甲苯具有脱蜡彻底,透明能力强,时间短的优点.然而病理科的二甲苯都不能做到每日更换,更换期限多是根据经验而定.荧光原位杂交(FISH)在乳腺癌的靶向用药检测、淋巴瘤的辅助诊断上有着举足轻重的地位,用二甲苯对组织切片脱蜡,是FISH实验必不可少的一步,然而重复使用二甲苯脱蜡对FISH实验的影响尚未见报道.本实验拟分析观察二甲苯经过多次重复使用后对FISH检测HER2基因和C-MYC基因的影响,以摸索稳定理想的检测方法.
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低温冻存对非霍奇金淋巴瘤石蜡组织DNA质量的影响
基于DNA水平的基因重排检测是一项淋巴瘤早期诊断高准确性的方法,而DNA活性与完整性维持有赖于低温环境.长期低温冻存是否对其造成影响是个需要关注的问题,就此,本实验探讨低温保存对非霍奇金淋巴瘤石蜡标本DNA质量的影响,以期建立合理的DNA保存条件.
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浅谈石蜡组织切片的标准化操作规程
石蜡组织切片的质量直接影响染色的效果,而制定和实施石蜡组织切片的标准化操作规程(SOP)可确保切片操作过程准确无误,使切片质量提高[1].我科结合工作实际并参照相关标准制定了石蜡组织切片的SOP,并应用于实际工作中,颇有成效,现介绍如下.1 器材MICRO HM340E切片机2台,Leica RM2245切片机1台,YABO200漂烘片仪3台,干净的毛笔、镊子、蒸馏水和铅笔等.2 人员配备常规制片组技术人员:主切、次切操作者2人,捞片2人;人员每月轮换1次.
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转化生长因子β1及其受体和Smad2、Smad4蛋白在横纹肌肉瘤中的表达
转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGFβ1)是一种对各种细胞具有刺激或抑制作用的多功能细胞生长因子,其信号通路中某一成分缺失,抗增殖作用丧失而可诱发上皮性肿瘤[1].而在横纹肌肉瘤中,TGFβ1及其受体(TGFβR)的过表达或异常表达可能促进肿瘤的发展和演进[2,3].尚不清TGFβ1受体的下游分子Smads在横纹肌肉瘤细胞和正常细胞之间是否存在差异.我们运用免疫组织化学技术半定量检测横纹肌肉瘤石蜡组织中TGFβ1、TGFβR Ⅰ、TGFβRⅡ、Smad2、Smad4的蛋白表达情况.
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内参照基因表达检测在宫颈石蜡组织原位杂交中的运用及意义
原位核酸杂交目前已广泛运用于组织和细胞基因表达定位和水平测定.但在实际运用中存在两个主要问题:(1)标本间的定量比较,缺乏比较的基准;(2)对于阴性结果,如何区别杂交失败的阴性结果和由于RNA的降解而出现的阴性结果.3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)和β-肌动蛋白为细胞的看家基因,其表达水平在不同活动中相对稳定,被广泛运用于基因表达水平检测的内参照基因[1-3],但尚未在原位杂交中作为内参照基因运用.我们通过制备GAPDH和β-肌动蛋白探针,对存档的正常和病理宫颈石蜡组织做了原位杂交检测,并与抑癌基因p53、癌基因c-myc的表达改变相比较,探讨其表达检测是否可作为组织和细胞原位杂交的阳性对照或基准.
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一种特异的EBER-1原位杂交探针检测石蜡组织中的EB病毒
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胰癌组织p15、p16抑癌基因CpG岛甲基化
目的:检测胰腺癌中p15、p16基因CpG岛的异常甲基化情况,分析其与胰腺癌发生、发展的关系;探索其在临床早期基因诊断和治疗中的意义以及与胰腺癌病理生理特征的相关性.方法:运用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP),对29例胰腺癌和3例慢性胰腺炎的石蜡组织、2例正常肝组织、以及12例正常成人外周血白细胞DNA的p15、p16抑癌基因启动子区CpG岛甲基化状态进行了检测.结果:对照组p16、p15基因CpG岛甲基化扩增均呈阴性,非甲基化扩增均阳性.胰腺癌中p16、p15基因CpG岛甲基化阳性率分别为37.9%和27.5%,p16、p15基因CpG岛甲基化总检出阳性率为:44.8%.癌组织中同时存在p16、p15基因CpG岛异常甲基化为6例.结论:胰腺癌p15、p16基因CpG岛甲基化是早期事件,可试作为早期基因诊断的分子标志,有可能尝试进行基因治疗.p16、p15基因CpG岛异常甲基化,同患者的病理特征无明显的相关关系.
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原位杂交检测HPV DNA改良方法的介绍
目的建立稳定、可靠、简便的HPV原位杂交检测方法.方法采用北京中杉金桥生物技术公司的HPV定型(6/11、16/18、31/33)原位杂交试剂盒,利用病理科宫颈癌石蜡组织、妇科宫颈及外阴活检组织经10%甲醛固定,常规石蜡包埋后,用防脱片制成4μm石蜡切片,操作步骤基本按试剂盒说明进行(其中有些改动).结果DNA阳性定位清晰准确,在上皮组织的挖空细胞核中,且背景透明干净.结论该法操作简便,直观准确,可稳定地用于临床HPV感染的检测,方便了患者,也为临床对症治疗提供了依据.
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免疫组化、原位杂交及PCR法检测霍奇金淋巴瘤石蜡组织中EB病毒
霍奇金淋巴瘤(HL)与EB病毒(EBV)密切相关[1,2].然而,不同作者所报道HL中EBV的检出率为20%~95%[1,2].为探讨造成差异的原因,我们选取广东地区39例HL蜡块组织,采用3种常用的EBV测定方法--PCR检测EBV的DNA、免疫组织化学检测EBV潜伏膜蛋白1(Latent membrane proteins,LMP1)、原位杂交检测EBV编码的mRNA(Epstein-stein-Barr Encoded RNAs1,EBER1),进行了比较研究.
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免疫荧光双标记法在子宫平滑肌肿瘤中的应用
随着激光共聚焦显微镜及其技术的推广,石蜡组织免疫荧光标记的方法也日益广泛运用,尤其是荧光双标或多标的方法,因其具有敏感性高、信号分明的特点,成为广大科研工作者喜欢使用的技术方法。荧光双标实验过程较为复杂,它的成功与否会受到很多因素的影响,如果某些环节处理不恰当,会直接导致实验失败[1]。本研究以子宫平滑肌肿瘤为研究对象,分为子宫平滑肌肉瘤组(LMS)、普通型子宫平滑肌瘤组(OUL)、正常子宫平滑肌组(NUSM)3组,选择Survivin和Ki-67两种与细胞增殖和凋亡相关的蛋白,采用免疫荧光双标记法检测各组中2种蛋白的表达情况,取得了较为满意的效果,现以异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)与四甲基异硫氰酸罗丹明(tetramethyl rhodamine isothio-cyanate,TRITC)的荧光双标为例,介绍免疫双荧光切片制备及运用激光共聚焦显微镜采集信号数据的方法。
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巨细胞病毒在胃部疾病中的检测及意义
经口腔和咽部引起感染有:疱疹病毒、EB病毒、巨细胞病毒.本文介绍应用PCR-DNA扩增技术检测124例胃部病变组织的单纯疱疹病毒(HSV)、EB病毒和巨细胞病毒(HCMV).其中炎症56例,本院胃镜室取材,无菌取胃粘膜组织,均浆器均浆后,做DNA扩增.癌症68例,取自本院病理科石蜡包埋标本.取10 μm厚的石蜡组织3~5片经常规脱蜡,水化,消化后取上清置-20℃备用.试剂购自华美生物技术有限公司.美国PE公司480型DNA扩增仪按说明书进行操作.
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人胃肠道和胃肠外间质瘤microRNA表达谱的比较
目的:比较消化道原发胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors,GISTs)与胃肠外间质瘤(extra-gastrointestinal stromal tumors,EGISTs)nucroRNA(miRNA)表达谱的差异,分析其与肿瘤原发部位、突变类型等因素间的关系.方法:收集西京医院病理科的8例石蜡样本(5例GISTs,3例EGISTs),利用安捷伦人miRNA表达谱芯片(芯片覆盖866个人miRNA)进行分析.同时通过PCR扩增后直接测序,明确8例样本的基因突变类型.结果:芯片数据经非监督层次聚类分析,显示8例样本分为3簇,具有相同突变类型的1例胃部GIST和1例EGIST构成第1簇,2例胃部GISTs构成第2簇,其余4例(2例小肠GISTs和2例EGISTs)构成第3簇.将5例GISTs按部位分成2组(胃部和肠道),3例EGISTs分别加入miRNA表型相似的组,2组比较后发现12个miRNA表达有显著差异;预测的靶基因多数参与KIT/PDGFRA的信号转导,其中有5个在肠道组显著下调,部分已有报道与肿瘤的演进相关.比较GISTs和EGISTs的表达谱,发现仅有3个miRNA的表达差异具有统计学意义.结论:GISTs和EGISTs的miRNA表型相似,均与肿瘤部位及突变类型关系密切,因此miRNA表型的分析可能有助于GISTs在分子水平上的分类.
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新疆Kaposi肉瘤组织中人类疱疹病毒8型潜伏期相关核抗原的检测
人类疱疹病毒8型(HHV-8)又称为Kaposi肉瘤相关疱疹病毒,与Kaposi肉瘤相关疾病的发生有密切关系[1,2].HHV-8潜伏期相关核抗原(LANA)是HHV-8的开放阅读框73(ORF73)编码的一种病毒衣壳蛋白,潜伏感染状态病毒稳定表达LANA,它在病毒基因整合到宿主基因组的过程中起重要作用,而且可以抑制P53蛋白转录活性,因其较好的表达稳定性和特异性常用来检测HHV-8的感染状态.我们用免疫组化方法在43例新疆Kaposi肉瘤石蜡组织中检测了LANA的表达情况,并探讨了在Kaposi肉瘤发病中的作用.
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C3d在大疱性类天疱疮患者皮损组织中的表达
目的 探讨C3d在石蜡包埋的大疱性类天疱疮患者皮损组织中的表达及临床意义.方法 免疫组化SP法在25例大疱性类天疱疮、10例大疱性表皮松解症及10例正常成人皮肤组织标本中进行C3d、IgG、IgA进行检测,并对其在大疱性类天疱疮皮损中阳性率进行比较.结果 大疱性类天疱疮皮损中C3d、IgG、IgA的阳性率分别为96%、72%、0%.C3d、IgG在BP组织中表达阳性率的差异有统计学意义(x2=4.17,P< 0.05),C3d、IgA在BP组织中表达阳性率的差异有统计学意义(x2=22.04,P< 0.01).C3d、IgG、IgA在10例EB及正常成人皮肤组织标本中表达均为阴性.结论 免疫组化方法检测C3d的表达可以协助在石蜡组织中进行大疱性类天疱疮的诊断.