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原位核酸杂交检测前列腺癌中结核杆菌L型DNA
目的:探讨结核杆菌L型DNA表达在前列腺癌发生与发展中的意义.方法:改良抗酸(Intensified kinyoun IK)染色和免疫组化染色(S-P法)检测58例前列腺癌组织中结核杆菌L型和结核杆菌抗原,原位核酸杂交,检测20例前列腺癌细胞内结核杆菌L型DNA.结果:结核杆菌L型阳性率37.9%,结核杆菌抗体(BCG)免疫组化染色阳性表达率39.7%.40%前列腺癌细胞核内有结核杆菌L型DNA阳性信号,前列腺癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级阳性信号分别为20%、30%、80%,随着前列腺癌级别的增加,结核L型感染率显著增高.改良抗酸(IK)染色、免疫组化染色和原位核酸杂交结果基本一致.结论:前列腺癌组织中常伴有结核L型感染,结核杆菌L型DNA可进入前列腺腺上皮细胞核内,引起细胞增生、异型增生和癌变,提示结核杆菌L型感染在前列腺癌发生、发展中起重要作用.
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内参照基因表达检测在宫颈石蜡组织原位杂交中的运用及意义
原位核酸杂交目前已广泛运用于组织和细胞基因表达定位和水平测定.但在实际运用中存在两个主要问题:(1)标本间的定量比较,缺乏比较的基准;(2)对于阴性结果,如何区别杂交失败的阴性结果和由于RNA的降解而出现的阴性结果.3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)和β-肌动蛋白为细胞的看家基因,其表达水平在不同活动中相对稳定,被广泛运用于基因表达水平检测的内参照基因[1-3],但尚未在原位杂交中作为内参照基因运用.我们通过制备GAPDH和β-肌动蛋白探针,对存档的正常和病理宫颈石蜡组织做了原位杂交检测,并与抑癌基因p53、癌基因c-myc的表达改变相比较,探讨其表达检测是否可作为组织和细胞原位杂交的阳性对照或基准.
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原位核酸杂交检测膀胱癌中结核菌L型DNA的意义
目的探讨结核菌L型DNA表达在膀胱移行细胞癌发生与发展中的意义.方法改良抗酸(IK)染色和免疫组化染色(S-P法)检测68例膀胱癌组织中抗酸菌L型和结核菌抗原;原位核酸杂交(ISH)检测20例膀胱癌细胞内结核菌L型DNA.结果抗酸菌L型阳性率35.2%,结核菌抗体(BCG)阳性表达率36.7%.40%膀胱癌细胞内有结核菌L型DNA阳性信号,膀胱癌I、Ⅱ、Ⅲ级阳性表达率分别为20%、30%、80%(P＜0.05),随着膀胱癌级别的增加,结核菌L型感染率显著增高.改良抗酸(IK)染色、免疫组化染色和原位核酸杂交结果具有一致性.结论膀胱癌中常伴有结核L型感染,结核菌L型DNA可进入膀胱移行细胞内,引起细胞增生和癌变,提示结核菌L型感染在膀胱癌发生、发展中起重要作用.
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石蜡包埋组织切片原位核酸杂交研究
目的:探讨石蜡包埋组织切片的原位核酸杂交方法,以检测克山病(KSD)尸检心肌中的RNA.方法:应用生物素标记的人工合成寡核苷酸探针,对72例心肌石蜡包埋组织切片进行原位核酸杂交.结果:各型克山病心肌石蜡组织切片的阳性杂交信号为80%～87.9%,而正常对照仅为14.3%.结论:应用人工合成寡核苷酸之原位核酸杂交技术,对长期保存的石蜡组织进行回顾性研究是可行的.
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柯萨奇病毒RNA阳性信号在克山病心肌中形态特征及其与发病的关系
目的探讨柯萨奇病毒RNA阳性信号在克山病心肌细胞中的形态特征及病毒感染与发病的关系.方法以65例不同型别克山病尸检心肌组织蜡块为研究对象,用寡核苷酸探针与组织切片进行原位核酸杂交,以检测柯萨奇B组和A组病毒RNA.结果急型、亚急型及慢型克山病的阳性杂交信号检出率分别为83.0%、87.9%及 80.0%.阳性信号在急型、亚急型克山病心肌中颗粒粗大,境界较清晰,但分布比较局限;在慢型克山病中阳性信号多散在分布于各部位心肌细胞内,但颗粒较细小,境界不清.结论心肌组织蜡块长期保存不影响杂交结果;吉林省各型克山病均与柯萨奇病毒感染密切相关,提示病毒感染是克山病复合病因的重要组成部分.
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克山病尸检心肌标本柯萨奇B组病毒RNA片段的序列分析
目的通过原位核酸杂交技术和RT-PCR技术探讨柯萨奇B组病毒感染与吉林亚急型克山病的关系.方法以柯萨奇B组病毒基因组的一段共同序列做寡核苷酸探针,于5′端行生物素标记,检测亚急型克山病患者尸检心肌组织标本中柯萨奇病毒的感染率;选取阳性标本做RT-PCR,并对PCR产物进行核苷酸序列分析,比较其与柯萨奇B组病毒各血清型之间的差异.结果 9例亚急型克山病患者尸检心肌组织标本中有7例原位核酸杂交结果阳性,阳性率为77.78%;所选3例原位核酸杂交结果阳性标本RT-PCR均有长541 bp的DNA条带出现,测序结果表明该片段与柯萨奇病毒B3同区域序列一致,与B1、B4、B5的同源性较大.结论亚急型克山病患者体内有柯萨奇B组病毒RNA存在,柯萨奇病毒可能在克山病的发生发展中扮演重要的角色.
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金葡菌L型DNA原位核酸杂交在小鼠肿瘤及癌前病变中的表达
目的探讨金葡菌L型感染后小鼠肿瘤及癌前病变中是否有金葡菌L型及其抗原或DNA.方法应用革兰氏染色、免疫组化及原位核酸杂交方法.结果小鼠肿瘤及癌前病变组织切片中,革兰氏染色金葡菌L型检出率分别为70.0%(7/10)和53.5%(7/13);免疫组化染色(S-P法)抗原阳性率分别为70.0%(7/10)和61.5%(8/13),两者结果相似,无显著性差异.金葡菌L型主要分布于肿瘤间质、癌巢或癌前病变的上皮细胞浆内.用金葡菌L型DNA探针原位核酸杂交,结果显示50.0%(5/10)肿瘤细胞核内和30.1%(4/13)癌前病变细胞核内有DNA阳性信号.结论小鼠肿瘤及癌前病变中有较高的金葡菌L型感染率,且金葡菌L型DNA已进入小鼠肿瘤细胞核内和癌前病变的体细胞核内.提示金葡菌L型感染小鼠可能诱发肿瘤的发生.
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HBV感染对肝细胞癌生物学行为及APE1表达的影响
[目的]检测乙型肝炎病毒(HBV) HBsAg和HBV DNA在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达,探讨HBV标志物协同脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(APE1)表达与HCC侵袭转移的关系及意义.[方法]利用免疫组织化学、原位核酸杂交和组织芯片技术,分别检测HCC 130例(HCC组)、肝内外转移灶29例(转移组)、癌旁肝脏组织96例(距肿瘤＜2 cm,癌旁组)、远癌肝脏组织(距肿瘤＞5 cm,远癌组)46例、肝良性肿瘤的瘤旁肝组织5例(正常组)中HBsAg和HBV DNA的表达,并结合各临床病理参数分析其与各指标之间的关系及意义.[结果]HBV蛋白与HBV DNA在癌旁组、远癌组中的表达明显高于HCC组和转移组,差异具有统计学意义(P＜0.001).除HBsAg表达与APE1 mRNA存在负相关,差异具有统计学意义(P=0.014)外,其余各指标之间均无相关(P＞0.05).[结论]H BsAg表达与APE1 mRNA存在负相关,HBV感染可抑制APE1的表达.
关键词： 原发性肝癌 脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1 乙型肝炎病毒 免疫组织化学 原位核酸杂交 -
原位杂交与免疫组化技术在HPV检测中的应用
目的:对两种HPV检测技术DNA原位杂交和免疫组化染色方法进行对比观察.方法:选取本院外阴尖锐湿疣病例95例,组织经固定、脱水、石蜡包埋、切片,分别采用原位杂交和免疫组化技术进行检测.结果:HPV-DNA阳性率为94.7%(90/95),阳性反应由鳞状上皮表层的空泡细胞核内延伸至棘层中下部近基底层的细胞核内;HPV-Ag阳性率为63.1%(60/95),阳性反应主要位于鳞状上皮表层的空泡细胞核内及角质层内,个别阳性细胞可在棘层出现.结论:原位杂交技术在敏感度、阳性率及阳性强度、背景染色等方面均优于免疫组化方法,为尖锐湿疣的确诊及临床治疗提供更准确、可靠的依据.
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HPV免疫组化和原位核酸杂交技术在女阴尖锐湿疣和假性湿疣诊断中的价值
目的探讨HPV免疫组化和原位核酸杂交技术在女阴尖锐湿疣和假性湿疣诊断中的价值.方法通过免疫组化和原位核酸杂交技术,回顾性分析233例女阴尖锐湿疣、假性湿疣以及湿疣样病变中HPV-Ag和HPV6/11的检出率并与病理组织学诊断作对比分析.结果193例尖锐湿疣HPV-Ag阳性102例(占52.85%),HPV6/11阳性187例(占96.89%),两种检测法阳性率的差异具有极显著意义(P<0.01).20例湿疣样病变HPV-Ag阳性3例(占15%),HPV6/11阳性7例(占35%).20例假性湿疣HPV-Ag和HPV6/11均阴性.病理上尖锐湿疣可见于诊断性挖空细胞、角化不全、棘层肥厚、基底细胞增生和上皮脚延长融合;而假性湿疣无诊断性挖空细胞,无明显棘层肥厚和基底细胞增生.结论HPV原位核酸杂交技术优于免疫组化技术,HPV6/11的检测有助于鉴别尖锐湿疣和假性湿疣以及湿疣样病变.
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应用原位杂交检测乳腺癌中大炎肽基因的表达
目的:探讨生物素标记的寡核苷酸探针,检测乳腺癌石蜡切片中大炎肽(daintain)基因的应用价值.方法:应用原位核酸杂交(ISH)和免疫组化(IHC)技术进行检测,并进行比较.结果:230例乳腺癌石蜡切片中,ISH检出的大炎肽基因阳性率为55%.ISH 法检测大炎肽基因阳性率高于IHC法测出的大炎肽阳性率(53%).大炎肽原位杂交信号主要出现在乳腺癌细胞核周边及其内外,相比之下,胞质区域的原位杂交信号较弱.原位杂交阳性率随乳腺癌淋巴结转移数目的增多而增高.结论:生物素标记的大炎肽寡核苷酸探针作为一种分子检测技术,可以较为理想地检测出乳腺癌组织中的大炎肽基因表达.
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柯萨奇病毒RNA阳性信号在克山病心肌中形态特征及其与发病的关系
目的探讨柯萨奇病毒RNA阳性信号在克山病心肌细胞中的形态特征及病毒感染与发病的关系.方法以65例不同型别克山病尸检心肌组织蜡块为研究对象,用寡核苷酸探针与组织切片进行原位核酸杂交,以检测柯萨奇B组和A组病毒RNA.结果急性、亚急性及慢性克山病的阳性杂交信号检出率分别为83.0%、87.9%及80.0%.阳性信号在急性、亚急性克山病心肌中颗粒粗大,境界较清晰,但分布比较局限;在慢性克山病中阳性信号多散在分布于各部位心肌细胞内,但颗粒较细小,境界不清.结论心肌组织蜡块长期保存不影响杂交结果;吉林省各型克山病均与柯萨奇病毒感染密切相关,提示病毒感染是克山病复合病因的重要组成部分.
