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疟疾检测技术研究概况及其评价
疟疾检测技术主要包括病原形态学检查、血清免疫学检查、DNA探针检测和PCR检测.以形态学检测为主要内容的血涂片显微镜检查,是一种传统的检测技术,迄今仍是多数基层医疗单位主要或唯一的诊断手段,其检测敏感度可达到10~20个原虫/μl血[1],方法简便、经济,适于基层应用;缺点是结果判断受检验人员镜检水平和视力疲劳程度等因素的影响,对于低原虫血症或混合感染病例容易漏诊或误诊,且检查效率不高.一个镜检员每天多只能检查70~80张血片[2].免疫学诊断技术和单克隆抗体检测技术的发展,特别是20世纪80年代以后分子生物学技术的研究,为疟疾诊断提供了良好的技术手段.
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地高辛标记探针检测重组白细胞抑制因子-水蛭肽嵌合蛋白宿主DNA残留量的研究
重组白细胞抑制因子-水蛭肽嵌合蛋白( recombinant neutrphil inhibitory factor and hirulog hybrid,TNHH)是一种通过基因工程技术改造的新型嵌合蛋白,临床上可用于急性脑栓塞后的脑组织损伤修复,减少脑水肿,防止微小血栓形成从而改善微循环,是一种有前景的心脑血管疾病治疗创新药物,目前已进入临床 I、II 期研究[1-2]。由于在生产过程中使用了工程菌大肠杆菌,而宿主菌的残留 DNA 是重组药物中特有的潜在致癌性杂质,可能会随药物一同进入人体终致癌,因此对 TNHH 原液中外源性 DNA 残留量的检测极为重要[3]。
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一种特异的EBER-1原位杂交探针检测石蜡组织中的EB病毒
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光谱核型分析及其在血液系统肿瘤中的应用
染色体异常是导致先天性缺陷和肿瘤等疾病的主要原因,传统的细胞遗传学显带核型分析费时、费力,特别是对复杂染色体异常的分析尤为困难.经典的荧光原位杂交(FISH)技术采用特异探针检测已知的染色体异常更直观、灵敏和特异,但一次只能检测一个或几个候选位点,且仅能检测已知的染色体异常,不能像核型分析那样进行染色体异常的筛查.近年来,在FISH基础上发展出多色荧光原位杂交技术:光谱核型分析(spectral karyotyping,SKY)、多重FISH(M-FISH)和彩色显带FISH(Rx-FISH),一次成像可同时区分24条染色体,使得复杂染色体异常的筛查成为可能.自1996年首次报道SKY技术以来,它已广泛应用于人和鼠细胞分子遗传学研究[1].
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磁性氧化铁纳米粒子造影剂在MRI应用进展
近年来,磁性氧化铁纳米粒子(SPIO)已有广泛的体内应用:如磁共振成像,细胞标记、干细胞祖细胞示踪及组织修复,肿瘤生物探针检测,移植排斥反应的监测等方面,本文综述了USPIO的化学合成、表面修饰以及它们的生物医学应用进展.
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地高辛标记探针检测Vero细胞残余DNA试验条件的改进
目前,应用地高辛标记探针检测Veto细胞残余DNA含量仍是常用的检测方法,该方法具有特异性强、无放射污染、操作简便等特点.在实际操作中,地高辛探针的灵敏度及杂交的条件对检测结果均有很大的影响.为此,我们就提高探针灵敏度及优化杂交条件进行了摸索.
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地高辛标记的cDNA探针检测 IL-6mRNA表达的方法
IL-6(interleukin-6)是一种由多种细胞分泌的细胞因子,在血液病及心、脑疾病时有异常表达.IL-6被认为是目前治疗各种血小板减少症的佳药物,在治疗白细胞减少症及抗白血病、抑制肿瘤转移及骨髓移植方面也有重要作用.迄今,IL-6的检测多采用以细胞培养为基础的生物学活性检测,该方法不仅难以反映IL-6基因转录水平,而且特异性和灵敏度均受到限制.本文采用随机引物法对人IL-6cDNA探针进行地高辛标记,核酸分子原位杂交技术,建立了在转录水平上直观检测IL-6mRNA表达的实验技术,为研究IL-6的基因表达与调控奠定了基础.
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聚合酶链反应及DIG标记DNA探针检测猪囊尾蚴
猪带绦虫的幼虫猪囊尾蚴侵入宿主器官组织中寄生,可引起囊尾蚴病(俗称囊虫病),是一种世界性分布危害严重的寄生虫病.内蒙古自治区是囊虫病的高发区之一,近年来人群发病率呈上升趋势.因此,寻找敏感、特异性高的诊断方法以便及早诊断囊虫病的原发性感染甚为重要.目前,该病的诊断多依据临床表现、CT扫描和血清免疫学检测等,但特异性较差.我们根据猪囊尾蚴27 kDa蛋白基因保守序列设计了一对特异性引物,建立PCR与地高辛(DIG)标记特异性核酸探针相结合,快速、准确检测猪囊尾蚴的方法,现将结果报告如下
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中文文摘
1.量子点荧光探针检测人舌鳞状细胞癌荷瘤裸鼠模型早期下颌下淋巴结转移的研究/李艳芬…//华西口腔医学杂志.-2014,32(3).-273-277
传代培养人舌鳞状细胞癌 Tca8113细胞,接种于18只裸鼠舌体内(不过中线),建立人舌癌荷瘤裸鼠下颌下淋巴结转移模型。接种6周后,处死裸鼠,解剖下颌下淋巴结,将同一淋巴结分为两份。一份作石蜡包埋半连续切片,行 HE染色和 IHC 检测;另一份即刻液氮冷冻,制作冰冻切片行QDs605-CK(AE1/AE3)荧光探针检测。分别计算3种方法检测出的淋巴结转移率和微转移率。结果:量子点标记的免疫荧光染色检测出裸鼠下颌下淋巴结转移率为66.7%,其中微转移率为38.9%;IHC 染色检测的淋巴结转移率为61.1%,其中微转移率为33.3%;HE 染色检测的淋巴结转移率为27.8%。经统计学分析,3种方法的差异有统计学意义(P <0.05),量子点标记的免疫荧光染色和 IHC 检测都优于 HE 染色,但是量子点标记的免疫荧光染色和 IHC 染色间的差异无统计学意义(P >0.05)。结论:量子点标记的QDs605-CK(AE1/AE3)免疫荧光探针能准确定位于下颌下淋巴结转移的肿瘤细胞的细胞质内,发出红色荧光,其特异性强,分辨率高,背景清晰,能够用于淋巴结转移灶及微转移灶的检测。 -
电化学发光免疫测定(ECLI)技术及其临床应用
电化学发光免疫测定(Electrochemiluminescence immunoassay,ECLI)是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术,是电化学发光(ECL)和免疫测定相结合的产物.它是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应,实际上包括了电化学和化学发光二个过程.ECL不仅可以应用于所有的免疫测定,而且还可用于DNA/RNA探针检测.
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肾上腺素β3受体对大鼠逼尿肌细胞钙离子内流的影响
肾上腺素β3受体(β3-AR)是调节逼尿肌舒张的主要因素[1,2].我们以Flμo-3AM钙荧光探针检测逼尿肌细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i),利用激光共聚焦显微镜技术观察β3-AR激动剂BRL37344A对培养大鼠逼尿肌细胞内Ca2+浓度的影响,并探讨其机制.
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原位杂交技术及难点释疑
RNA原位杂交技术在基因分析和诊断方面能作定性、定位和定量分析、已成为有效的分子病理学技术,用寡核苷酸探针检测组织切片中相关的mRNA是较为常见的RNA原位杂交.该探针方法简便、探针较短,组织穿透性好,有较高的灵敏度.在大多数的恶性肿瘤中存在TERT-RNA,所以采用TERT-原位杂交检测方法,可以应用于众多的恶性肿瘤,我们用此方法对舌癌进行检测,经过反复的实践、改进、摸索出一套比较实用的方法,获得比较满意的结果,现报道如下.
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上转化纳米颗粒介导的光动力治疗对THP-1巨噬细胞凋亡机制研究
目的:探讨上转化纳米颗粒包覆的二氢卟吩( UCNPs-Ce6)介导的光动力治疗对THP-1巨噬细胞凋亡机制。方法:通过DCFH-DA检测光动力治疗后细胞内活性氧( ROS)的变化,通过钙黄绿素探针检测光动力治疗之后线粒体通透性转换孔( MPTP)开放。通过免疫荧光与Western blotting检测光动力治疗后Bax蛋白与细胞色素C蛋白在胞浆和线粒体的表达。结果:光动力治疗后巨噬细胞内活性氧明显升高,线粒体膜电位下降,MPTP开放。免疫荧光与Western blotting结果显示光动力治疗后Bax蛋白发生了胞浆到线粒体的转位变化,细胞色素C从线粒体释放入胞浆,引起caspase级联反应诱导细胞凋亡。NAC阻断光动力治疗后ROS的产生,有效减少了巨噬细胞凋亡发生。结论:UCNPs-Ce6介导的光动力治疗能通过活性氧爆发激活线粒体-caspase通路引起THP-1巨噬细胞凋亡。
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PTPIP51增加线粒体-肌浆网接触诱导心肌细胞凋亡
目的:蛋白酪氨酸激酶相互作用蛋白51(protein tyrosine phosphatase interacting protein 51,PTPIP51)定位于线粒体及肌浆网。拟研究其对心肌细胞线粒体及细胞功能的作用及作用机制。方法:冠脉左前降支结扎再通术建立缺血再灌注模型;H2 O2刺激乳鼠原代心肌细胞凋亡;流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡;MitoTracker Green、ER Tracker Red观察线粒体/肌浆网共定位;电镜检测线粒体/肌浆网接触面积;钙荧光探针检测胞浆和线粒体内钙变化。结果:缺血再灌注损伤心肌及H2 O2诱导的凋亡心肌细胞中,PTPIP51蛋白水平显著升高;过表达PTPIP51导致心肌细胞凋亡,敲低则抵抗H2 O2所致凋亡。 PT-PIP51使线粒体与肌浆网接触面积增加、线粒体钙浓度增高;抑制线粒体钙升高可以逆转PTPIP51引起的细胞凋亡。结论:缺血再灌注损伤时,心肌PTPIP51蛋白上调,通过增加线粒体与肌浆网的接触面积使线粒体内钙超载,参与诱导心肌细胞凋亡。
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下丘脑-垂体-性腺轴在FKBP12.6缺失介导的性别差异性心肌肥大发生发展过程中的作用及其分子机制
目的:我们的前期研究发现,敲除FKBP12.6基因可导致成年雄性小鼠心肌肥大。本研究旨在探讨FKBP12.6缺失导致性别差异性心肌肥大的分子机制。方法:手术摘除FKBP12.6基因敲除小鼠睾丸以观察对心肌肥大的影响;放射性免疫检测法(RIA)和ELISA法检测FKBP12.6敲除小鼠17β-estradiol (E2)、testosterone (T)、LHβ和FSHβ分泌变化情况;建立垂体神经元LβT2 FKBP12.6shRNA载体稳定干扰细胞系,采用Fluo3-AM荧光探针检测[ Ca2+] i;real-time PCR检测LHβ、FSHβ、calci-neurin(CaN)等mRNA表达变化;分离胞浆胞核蛋白,Western blot法检测CaN、MCIP1.4、NFAT3、Nur77、Pin1等蛋白表达和核浆分布情况。结果:摘除雄性FKBP12.6基因敲除鼠的睾丸可显著抑制心肌肥大的发生;FKBP12.6敲除小鼠心脏中可能促进心肌肥大的通路CaN和CaMKⅡ的表达和活性并未发生明显变化;血清E2、T、LHβ及FSHβ水平与WT相比显著上调,表明敲除小鼠性腺轴调控增强;LβT2 FKBP12.6干扰后[ Ca2+] i 显著上升;性腺轴相关基因LHβ、SF-1、Nur77和钙离子相关基因CaN、MCIP1.4、SERCA2的mRNA表达显著上调;胞浆中CaN和MCIP1.4蛋白水平上调;NFAT3、Nur77和Pin1核转位明显增加。结论:FKBP12.6缺失后垂体细胞内钙离子水平上调,激活CaN/NFAT3通路,进而促进LHβ和FSHβ转录,导致下丘脑-垂体-性腺轴激活,从而诱发性别差异性心肌肥大。
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尾加压素II介导卵圆细胞增殖的机制探讨
目的:探讨尾加压素II( UII)对肝脏干细胞即卵圆细胞内活性氧( ROS)的影响及其参与UII促细胞增殖的机制探讨。方法:通过流式细胞术,应用DCFH-DA探针检测UII孵育卵圆细胞WB-F344后,胞内ROS水平变化。通过Western blot方法检测胞内NADPH氧化酶亚基、细胞周期蛋白E、细胞周期蛋白依赖性激酶2及信号通路蛋白ERK表达水平。采用流式细胞术方式分析UII对于细胞周期的影响。应用BrdU掺入法检测细胞增殖情况。结果:UII刺激卵圆细胞可引起胞内ROS水平增加,同时NADPH氧化酶亚基表达上调。给予NADPH氧化酶抑制剂apocynin预处理后,明显改善UII介导的ERK磷酸化水平升高。此外,UII孵育组细胞周期比例S期明显高于G1期,而apocynin预处理组S期比例较UII刺激组有所降低,且细胞增殖检测结果显示apocynin预处理可使UII介导的促细胞增殖效应受到明显抑制。结论:UII可通过上调细胞内NADPH氧化酶介导ROS增加,继而促进ERK激活以及加速细胞从G1期进入S期,参与UII促细胞增殖作用。
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适配子芯片及其在医学检测研究中的应用
生物芯片是在固相载体表面构建微型生物化学分析系统,实现高通量快速检测生物靶分子,使分子生物信息的研究实现工程化、集约化、高效化和自动化.生物芯片近年来在生命科学领域发展迅速,根据芯片上固化的生物材料不同,可分为基因芯片、蛋白质芯片、细胞芯片和组织芯片.蛋白质芯片可检测液态生物样本中的蛋白质分子,它主要以抗体为探针检测相应的抗原,可用于分析蛋白表达水平、肿瘤生物标志物等[1-3].蛋白质芯片受制于抗体本身的一些缺陷,如容易变性、制备成本高、难以大规模集成于同一个检测平台等.适配子芯片以核酸适配子(aptamer)为探针,检测生物样本中包括蛋白质在内的靶分子,可在一定程度上克服蛋白质芯片的上述缺点,在医学研究的临床诊断方面具有良好的应用前景.本文对近年来适配子芯片在医学研究中的进展作一综述.
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TERT-原位杂交技术的使用难点及解决方法
RNA原位杂交技术在基因分析和诊断方面能作定性、定位和定量分析,已成为有效的分子病理学技术之一[1].用寡核苷酸探针检测组织切片中相关的mRNA是较为常见的RNA原位杂交[1],而Telomerase Reverse Transcriptase(TERT)又是较为常用的原位杂交检测试剂盒,其探针较短,组织穿透性好,有较高的灵敏度.由于在大多数的恶性肿瘤中存在着TERT-RNA,所以,TERT-原位杂交检测方法可以应用于众多的恶性肿瘤的诊断.但由于该方法存着消化时间、杂交时间、温度难以掌握以及杂交液滴加多少较难控制等技术难点,常常会使结果出现假阳性或假阴性.我们采用TERT-原位杂交检测方法对舌癌标本进行了检测,经过反复的实践、改进,解决了许多的难点,获得了比较满意的结果,现报道如下.
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RNA原位杂交技术难点及针对措施
利用互补RNA为探针进行原位杂交是分析组织或细胞内RNA分布行之有效的方法,通过对RNA分布的研究可以了解特定基因的表达情况.用寡核苷酸探针检测组织切片中相关的mRNA是较为常见的RNA原位杂交.该探针方法简便、探针较短,组织穿透性好,有较高的灵敏度.但是过程较长,操作繁琐,因而在一些实验中不能得到很好的使用,为此本文根据笔者的实际操作经验对该技术中的一些难点及相应措施作简要的介绍.
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应用地高辛标记的寡聚核酸探针检测副溶血弧菌
1前言副溶血弧菌是引起人类肠道急性传染病的肠道病原菌之一,也是国际水产品检验检疫的重要菌株.它通过受污染的鱼、贝类等感染人类从而引起以水样腹泻、呕吐及发热等为主要临床症状的疾病.目前,检验检疫部门对此菌株的检验标准为经典方法,检验周期长,一般需7天左右才能出结果,步骤繁琐且检验精度低.