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微型支抗种植体即刻加载的界面研究
1.材料和方法:在两条成年杂种犬下颌骨共植入10枚Absoanchor系列微型支抗种植体,施以200 g水平力.植入后第3、6、9、10周分别给犬注射二甲酚橙、钙黄绿素及两次四环素钠.犬处死后,随机取1块有种植体的新鲜标本,行扫描电镜及X线能谱分析.其余9块标本制成硬组织切片,Von-Giesa苦味酸-品红染色,行光镜、荧光镜、偏光镜观察.以病理图像分析软件计算标本横截面图像的骨结合率.
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超滤-紫外可见分光光度法测定钙黄绿素囊泡包封率
目的:建立携载钙黄绿素的胆固醇琥珀酸酯三羟基氨基甲烷盐囊泡包封率的测定方法.方法:采用超滤法分离囊泡与钙黄绿素;紫外可见分光光度法测定钙黄绿素的含量,检测波长为484 nm,计算包封率.结果:钙黄绿素在1.11-11.1 mg·L-1范围内线性良好(r＝0.999 8);不同截留分子量的超滤膜对钙黄绿素的膜透过率没有影响;利用超滤法可以使囊泡与钙黄绿素得到良好的分离,钙黄绿素的膜透过率在96.7%～97.0%,回收率在96.2%～97.0%,囊泡不能够通过超滤膜.利用该方法测得的钙黄绿素包封率为(37.1 4-2.4)%.结论:超滤.紫外可见分光光度法可以作为钙黄绿素囊泡包封率的测定方法,胆固醇琥珀酸酯三羟基氨基甲烷盐制备的囊泡可以作为水溶性药物的优良载体.
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具有温敏释放特性的钙黄绿素复合磷脂脂质体的处方优化
目的 优化复合磷脂温敏脂质体的处方组成.方法 采用薄膜水化法制备不同磷脂组成二棕榈酰磷脂酰胆碱-溶血磷脂-二硬脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DPPC-MSPC-DSPE-PEG2000)=86:10:4;F(20％氢化大豆磷脂+80％二棕榈酰磷脂酰胆碱)-溶血磷脂-(二硬脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000)=92:4:4的钙黄绿素温敏脂质体,并利用钙黄绿素的荧光自淬灭特性,比较两者在各自相变温度(Tm)以及37℃(正常体温)下的释放行为.结果 与经典温敏脂质体相比,基于复合磷脂技术制备的温敏脂质体在溶血磷脂用量减少了60％的条件下,仍可以实现良好的温敏释放性能,且其在37 ℃时对药物的包封更加稳定.结论 用复合磷脂技术有助于增强温敏释放效果.
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钙黄绿素脂质体的细胞转运及其机制研究
目的 研究钙黄绿素脂质体的细胞转运及其入胞机制.方法 用薄膜分散法制备钙黄绿素脂质体,比较钙黄绿素水溶液和脂质体的体外释放过程,研究脂质体包裹对钙黄绿素在A549细胞内蓄积、分布和入胞途径的影响.结果 钙黄绿素脂质体具有良好的缓释作用,可释放长达1周.相对于钙黄绿素水溶液,脂质体包裹使被动跨膜的钙黄绿素通过大胞饮和网格蛋白(clathrin)介导的内吞途径入胞,大幅度提高钙黄绿素入胞量,主要分布于溶酶体内.结论 小分子水溶性药物可以通过脂质体包裹改变入胞途径,提高入胞能力,影响胞内分布.该结论为研究载有水溶性药物脂质体的细胞递送过程,进一步合理设计脂质体处方提供参考和依据.
关键词： 缓释 细胞摄取 大胞饮 clathrin介导内吞 钙黄绿素 -
荧光光度法研究不同药物载体制成5-FU纳米粒的靶向性
目的 研究抗癌药物五氟尿嘧啶用不同的药物载体制成的纳米粒在小鼠体内的靶向性分布.方法 应用荧光分光光度法测定包裹钙黄绿素的纳米粒的钙黄绿素量,选择激发波长和发射波长分别为365 nm,513 nm,测定小鼠组织中的钙黄绿素荧光强度.结果 线性回归方程为:C=0.493 51+0.987 9(R2=0.999 8),浓度在1×10-7mol/L～1×10-6mol/L范围内线性良好.结论 抗癌药物的靶向载体叶酸偶联白蛋白靶向性优于白蛋白.
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利用环介导恒温扩增法快速检测空肠弯曲菌
目的 利用环介导恒温扩增技术,以空肠弯曲菌的VS1基因设计引物,建立快速检测空肠弯曲菌的方法,以期能应用于急性腹泻和肠炎等疾病的快速检验.方法 ①通过基因比对与引物设计,设计针对空肠弯曲菌的环介导恒温扩增检测(LAMP)方法；②用钙黄绿素、亚甲基蓝、结晶紫、溴化乙锭4种DNA染料对扩增产物进行染色,评价各染料染色效果；③检测该LAMP方法对空肠弯曲菌及其他干扰菌的扩增情况,评价其特异性；④将该LAMP方法与培养法比较,进行统计学分析.结果 ①设计出针对空肠弯曲菌的LAMP检测方法；②钙黄绿素与扩增产物结合后颜色变化明显,是该LAMP方法中较好的DNA染料物质；③本LAMP检测方法只针对空肠弯曲菌有扩增,对其他干扰菌不扩增,显示出良好的特异性；④试验共检测了60株临床和标准菌株,对于菌株的培养物,LAMP检测结果与培养鉴定法比较差异无统计学意义(x2 =0.3333,P＞0.05).结论 本试验设计出了针对空肠弯曲菌LAMP检测方法,该LAMP法较好的DNA染料物质是钙黄绿素,该方法具有良好的特异性,与培养鉴定法比较具有较高的阳性、阴性及总体符合率,能够用于空肠弯曲菌的快速检验.
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靶向熊果酸脂质体的制备及其体外靶向性研究
目的 制备靶向熊果酸脂质体,并评价其对宫颈癌HeLa细胞的体外靶向性.方法 采用化学合成方法制备新型的靶向性功能材料叶酸-CONH-聚乙二醇-NH-胆固醇,以薄膜分散法制备靶向熊果酸脂质体;构建以钙黄绿素为荧光探针标记物的脂质体,用荧光共聚焦倒置显微镜观察靶向脂质体对HeLa细胞的穿透能力;以流式细胞术考察靶向脂质体的摄取效率.同时,考察靶向熊果酸脂质体对HeLa细胞的生长抑制作用.结果 薄膜分散法制备的靶向熊果酸脂质体对HeLa细胞具有明显的靶向作用,并且具有显著的细胞增殖抑制作用.结论 靶向熊果酸脂质体可有效穿透HeLa细胞,且具有较强的杀伤宫颈癌细胞活性的作用.
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基于钙黄绿素的荧光分光光度法测定谷胱甘肽
目的:基于钙黄绿素的荧光分光光度法建立一种测定谷胱甘肤的新方法.方法:在pH=8.0介质中,铜(Ⅱ)与钙黄绿素配位引起荧光猝灭,由于谷胱甘肤与铜(Ⅱ)的亲和力很强,可从钙黄绿素-铜离子的络合物中夺取铜离子而使钙黄绿素游离出来使荧光强度得以恢复,荧光恢复的程度与加入谷胱甘肽的浓度在一定浓度范围内成线性.结果:据此建立了一种测定谷胱甘肽的新方法,该方法的线性范围为2.0x10-6～1.4×10-5mol·L-1,F=8.1964C+196.43,检测限为1.0x10-6mol/L.结论:用此法测定谷胱甘肽简便快速,灵敏度高.
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基于钙黄绿素-铜(Ⅱ)荧光体系测定乙酰半胱氨酸
目的:基于钙黄绿素.铜(Ⅱ)荧光体系测定乙酰半胱氨酸.方法:在pH=8.0的Na2HPO4·12H2O-KH2PO4缓冲液中,以492nm为激发波长,520姗为发射波长测定乙酰半胱氨酸溶液的荧光强度.结果:在pH＝8.0的Na2HPO4·12H2O-KH2PO4缓冲液中,二价铜离子与钙黄绿素配位引起荧光猝灭.由于乙酰半胱氨酸中巯基上的硫离子与Cu2+的亲和力很强,可从钙黄绿素-铜(Ⅱ)的络合物中夺取铜离子而使钙黄绿素游离出来,从而使体系的荧光得以恢复,并且荧光恢复的程度与加入乙酰半胱氨酸的量在一定范围内成线性.结论:建立了一种测定乙酰半胱氨酸的荧光分析新方法,该方法的线性范围为6.010-6～1.4 10-5mol/L,检出限为4.010-6moi/L.
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含胆盐脂质体体外稳定性影响因素的研究
以钙黄绿素为小分子水溶性荧光探针,采用薄膜分散法制备了平均粒径为150～200nm的胆盐脂质体(含甘氨胆酸钠,SGC-Lip)和普通脂质体(含胆固醇,CH-Lip).通过比较两种脂质体在生理范围内的pH、渗透压、胆盐溶液环境中药物的泄漏率,粒径及多分散系数(PDI)的变化来考察胆盐脂质体的稳定性,结果表明,pH和胆盐浓度是影响脂质体稳定性的主要因素,渗透压对脂质体的稳定性影响较小.SGC-Lip在pH1.2、2.0及低浓度牛黄胆酸钠(＜5mmol/L)溶液中比CH-Lip更稳定.SGC-Lip在不同溶液中粒径和PDI无显著改变,提示胆盐对脂质膜的作用可能是通过对膜的溶蚀形成孔道,而不是使脂质体完全破裂.
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壳聚糖季铵盐温敏凝胶的制备及性能考察
目的 研究壳聚糖季铵盐温敏凝胶及性质.方法 采用试管倾斜法测定胶凝时间,考察壳聚糖季铵盐的浓度、体积比、温度等对胶凝时间的影响,采用吸光度经时变化法测定相变动力学,并用透析法测定载药凝胶的体外释放.结果 56％ GPS/2％ HTCC体积配比1:5、温度37℃时,胶凝时间为3.53min,钙黄绿素载药凝胶具有良好的缓释性能,24h累积释放75％.结论 壳聚糖季铵盐凝胶体系具有良好的温敏性能,可以用作温敏给药系统的载体.
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经诱导的大鼠成肌细胞应用于组织工程化人工骨的实验研究
[目的]探讨骨形态发生蛋白诱导的大鼠成肌细胞应用于组织工程化人工骨修复大鼠胫骨缺损的效果.[方法]32只体重在200～250 g的雄性SD大鼠随机分成4组,每组8只.A组:聚乙烯管内植入诱导2周的成肌细胞复合透明质酸钠.B组:聚乙烯管内植入成肌细胞复合透明质酸钠.C组:聚乙烯管内植入透明质酸钠.D组:聚乙烯管内注入生理盐水.术后12周,进行X线观察、大体观察、组织学观察(HE染色)以及四环素和钙黄绿素标记.[结果]术后12周时大体观察发现,A、B组骨缺损处可见大量类骨样组织填充,未触及反常活动,C、D组可见少量胶冻样组织及类骨样组织填充,无反常活动.X线观察可见A和B组骨痂吸收,髓腔再通,C、D组有少量新骨痂,髓腔未通.组织学观察可见A和B组有大量新生骨小梁,四环素和钙黄绿素染色可见黄绿色荧光.[结论]初步结果显示经诱导的大鼠成肌细胞可作为骨组织工程的种子细胞,用于修复骨缺损.
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荧光淬灭法研究热敏脂质体的体外释放行为
目的 建立一种简单且精确评价热敏脂质体(TSL)体外释放行为的方法.方法 采用薄膜分散法制备钙黄绿素热敏脂质体(CTSL),利用荧光自淬灭法研究热敏脂质体的体外释放,通过差示扫描量热法测定热敏脂质体的相变温度.结果 制备热敏脂质体能成功包裹高浓度荧光素,被包裹的钙黄绿素能屏蔽自身的发射光.钙黄绿素在0.000 1～0.001 mmol·L-1浓度范围内,荧光强度与浓度之间存在良好的线性关系.CTSL在37和41℃下10 min的释放度分别为0.1％和45.4％.CTSL的相转变温度约为41℃.结论 通过荧光淬灭法研究评价热敏脂质体的热敏释药特性,方法准确、简单、可行.
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聚乙二醇修饰的钙黄绿素脂质体的制备与评价
目的:介绍冷冻融解法结合微滤膜挤出法制备聚乙二醇修饰的钙黄绿素脂质体的工艺.方法:用负染色法对其外观形态进行透射电镜观测,同时运用Zeta电势·粒径分析仪对超声波作用前后钙黄绿素脂质体的粒径分布及其Zeta电势进行检测.对超声波作用下脂质体内包覆的钙黄绿素的释放特性进行了评价.结果:制得的脂质体Zeta电势为负,其直径分布于80～285nm之间,平均直径为150nm.超声波作用后脂质体平均粒径减小,其内所包钙黄绿素快速释放.结论:表明超声波对脂质体内容物的释放具有明显的增强效果.
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SARS冠状病毒环介导等温扩增可视化检测方法的建立
目的 应用环介导等温扩增(LAMP)技术建立SARS冠状病毒可视化快速检测方法.方法 针对SARS冠状病毒RNA聚合酶编码基因保守区设计LAMP引物及环引物,反应体系加入钙黄绿素作为LAMP扩增反应指示剂,结合LAMP浊度仪优化扩增条件,根据钙黄绿素的颜色变化进行结果判定,评价所建立LAMP方法的特异性和灵敏性.结果 本方法低检出限约为10拷贝/反应管,高于普通PCR;检测特异性高,仅SARS冠状病毒反应管钙黄绿素颜色由褐色变为黄绿色,而甲型H1N1病毒、高致病性H5亚型禽流感病毒、普通流感病毒均不发生变色反应；体系的扩增效率高于普通PCR,35 min内出结果.结论 所建立的基于颜色判定的SARS病毒检测方法具有特异、灵敏、设备要求简单等特点,适用于SARS冠状病毒现场快速检测.
关键词： SARS病毒 可视化检测 环介导等温扩增(LAMP) 钙黄绿素 -
上转化纳米颗粒介导的光动力治疗对THP－1巨噬细胞凋亡机制研究
目的：探讨上转化纳米颗粒包覆的二氢卟吩（ UCNPs－Ce6）介导的光动力治疗对THP－1巨噬细胞凋亡机制。方法：通过DCFH－DA检测光动力治疗后细胞内活性氧（ ROS）的变化，通过钙黄绿素探针检测光动力治疗之后线粒体通透性转换孔（ MPTP）开放。通过免疫荧光与Western blotting检测光动力治疗后Bax蛋白与细胞色素C蛋白在胞浆和线粒体的表达。结果：光动力治疗后巨噬细胞内活性氧明显升高，线粒体膜电位下降，MPTP开放。免疫荧光与Western blotting结果显示光动力治疗后Bax蛋白发生了胞浆到线粒体的转位变化，细胞色素C从线粒体释放入胞浆，引起caspase级联反应诱导细胞凋亡。NAC阻断光动力治疗后ROS的产生，有效减少了巨噬细胞凋亡发生。结论：UCNPs－Ce6介导的光动力治疗能通过活性氧爆发激活线粒体－caspase通路引起THP－1巨噬细胞凋亡。
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穿琥宁粉针剂体外抗HIV-1作用
目的: 探讨穿琥宁粉针剂在体外是否具有抗HIV作用. 方法:采用荧光染料Calcien AM标记HIV感染的慢性H9细胞(H9/HIV-1ⅢB)与不同稀释浓度的穿琥宁药物作用后,与靶细胞MT-2细胞混合培养,观察MT-2和H9/HIV-1ⅢB融合细胞的变化;MTT法检测穿琥宁对HIV感染细胞的保护作用;HIV-1P24抗原试剂盒检测药物作用后的细胞培养上清P24抗原含量的变化. 结果:穿琥宁粉针剂能够抑制MT-2和H9/HIV-1ⅢB细胞融合(其抑制融合的EC50为5.49 mg/L,选择指数SI为327.6);能够保护HIV感染细胞的死亡(EC50为64.57 mg/L,SI为27.85)和减少HIV-1 P24抗原的表达(EC50为194.67 mg/L,SI为9.23). 结论:穿琥宁粉针剂在体外具有抗HIV-1的作用.
