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对分光光度法用于测定蓝莓果中维生素分析
维生素C也可以被称为L-抗坏血酸,主要存在于各种水果以及蔬菜中,能够起到美白养颜,提升人体免力的功效,可以有效预防癌症、心血管等疾病的发生,是维持人体正常代谢的必需物质.蓝莓果作为一种新型食用水果,其良好的保健功效深受人们喜爱,所以,对蓝莓果中维生素C含量的测定更具重要意义.通常来说,维生素C含量的测定方法较多,例如,2, 4-二硝基苯肼法、荧光分光光度法等,其中,为常用的是分光光度法,这主要是基于其操作较为简便且费用经济,因此,本文基于上述方法对蓝莓果中的维生素C含量加以测定.
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2-01 铅对肾上腺皮质细胞线粒体的氧化损伤
目的研究铅对肾上腺皮质细胞氧化应激和线粒体功能的影响,为了解其肾上腺皮质毒作用机制提供依据.方法原代分离培养豚鼠肾上腺皮质细胞,以0、6.25、12.5、25、50、100 μmol/L醋酸铅(PbAc)处理细胞,观察PbAc诱导肾上腺皮质细胞活性氧(ROS)产生和线粒体损伤作用.ROS检测采用荧光分光光度法,线粒体膜电位(MMP)和细胞存活状态采用Rh123和PI双标记、流式细胞术检测,细胞ATP水平采用化学发光法测定.结果 PbAc染毒后肾上腺皮质细胞ROS形成水平随剂量增加而增加,具有剂量-效应关系[^y=4.16+10.21×1g(x+1),P＜0.01,R2=0.641];线粒体膜电位呈剂量依赖性降低,Rh123的平均荧光强度(MFI)在6.25～100μmol/L各剂量组依次为1.01、0.94、0.96、0.95和0.91,与对照组(1.35)比较,差异有显著性(P＜0.01);染毒后细胞死亡率轻度增加,与对照组(1.02%)比较,50μmol/L和100 μmol/L剂量组分别为3.16%和3.40%,差异有显著性(P＜0.05);ATP水平降低与PbAc剂量之间存在剂量-效应关系[^y=212 965.7-51 592.5×1g(x+1),P＜0.01,R2=0.568],剂量和时间对ATP水平的影响呈协同抑制作用(P＜0.01).结论线粒体氧化应激介导肾上腺皮质细胞毒性可能是PbAc毒作用机制之一,线粒体损伤是铅致肾上腺皮质毒作用的早期细胞和分子事件.
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三价铕-敌鼠荧光增敏体系研究及在尿液残留测定中的应用
目的 建立一种简便、准确、灵敏的尿液中敌鼠残留的荧光分光光度测定方法.方法 利用敌鼠与稀土元素三价铕离子在DL-组氨酸、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)及氨性缓冲溶液存在下形成敌鼠-铕-DL-组氨酸-NH3-PvP的多元络合荧光体系,并进一步经稀土元素三价钇离子增敏,采用330nm为激发波长,以612nm为发射波长进行荧光光度法测定.结果 荧光分析体系的佳试验条件为:氨性缓冲溶液pH为9.0,铕离子为10.0mg/L,钇离子为20.0mg/L,DL-组氨酸为0.01%,PVP为0.05%.在此条件下,尿液中敌鼠浓度在0.2～10.0mg/L范围内与体系的荧光强度成线性关系,其平均回收率在87.0%～97.3%范围,日内RSD在3.4%～4.7%范围,日间RSD在4.8%～6.6%范围,低定量检出限为0.2mg/L.结论 该方法简便,结果准确可靠,用于尿液样品的测定,可获得满意的结果,该方法能用于敌鼠中毒病人的临床快速检测.
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荧光分光光度法测定纸质食品包装材料中的荧光增白剂
目的 建立纸质食品包装材料中荧光增白剂(FWAs)快速筛选的荧光分光光度测定方法.方法 以C.I.220为定量标准,试样用重蒸无水乙醇-水(1∶4,V/V)经三次超声提取,提取液在激发波长为350 nm和发射波长为430 nm条件下用荧光分光光度仪测定.结果 C.I.220在12.5 ～ 400 ng/ml范围内呈良好的线性相关(r=0.999 7),3个添加浓度水平(1.5、2.5和6.0 μg/g)的平均回收率为84.4％ ～90.9％,定量限为1.2 μg/g.结论 该方法简便、灵敏和准确,适合纸质食品包装材料中FWAs的快速筛选检测要求.
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8-羟基喹啉荧光分光光度法测定油炸食品中铝
目的 改进8-羟基喹啉荧光分光光度法并用于油炸食品中铝含量测定.方法 采用湿法消解对食品进行前处理,使铝元素与8-羟基喹啉形成稳定荧光络合物,用荧光光度计检测其荧光强度从而测定铝含量.结果 铝离子在5～600μg/L浓度范围内与荧光强度呈线性关系,相关系数R2=0.997 1;回收率在90.1%～106.0%之间.结论 该方法操作简便快捷,测定结果准确,灵敏度高,非常适合于基层的工商、卫生和质检部门在日常工作中分析油炸食品中铝的含量.
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薄层色谱-荧光分光光度法测定黄连及香连丸中盐酸小檗碱的含量
目的 建立黄连和香连丸中盐酸小檗碱的含量测定方法 .方法 样品经提取、薄层展开后,采用薄层色谱-荧光分光光度法对黄连和香连丸中盐酸小檗碱进行含量测定,展开剂为苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-氨水(6:3:1.5:1.5:0.5),激发波长Ex=365 nm,发射波长Em=409 nm.结果 盐酸小檗碱在0.473～3.784μg范围内线性关系良好,r=0.999 3.黄连的回收率为99.03%,RSD=1.86%.香连丸的回收率为97.10%,RSD=1.09%.结论 该法操作简便,分离效果好,灵敏度高.
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荧光衍生法测定中药二氧化硫残留量研究
目的:采用衍生化反应,建立荧光分光光度法测定中药中二氧化硫的残留量.方法:对影响荧光强度的因素进行研究,确定佳衍生条件.在激发波长321 nm,发射波长384 nm处测定荧光强度.结果:荧光强度与Na2SO3对照品加入量在0.999 7～17.99 nmol线性关系良好,r=0.999 9,平均回收率102.3％,RSD 4.6％.结论:该法具有简便易行,快速准确,灵敏度高等特点,可为中药材二氧化硫残留量的测定提供参考.
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本地自产蔬菜和水果中维生素C含量测定
维生素C是维持人体正常生理功能的必需化合物,对缺铁性贫血和坏血病有预防和治疗作用[1].人体所需的维生素C主要由蔬菜水果提供,测定蔬菜水果中维生素C含量对评价人群维生素C摄入量有重要意义.因品种、栽培方法和地区不同,食物中维生素C的含量差异甚大.以往本县对各种食物中的维生素C未进行过较系统的测定,本文用邻苯二胺荧光分光光度法对本县自产的常见蔬菜、水果中维生素C进行了测定,方法灵敏、准确度高,为不同人群的膳食计划制定和有关科研提供了必要的基础数据.现将结果报道如下.
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黄连素对HT-29人结肠癌细胞系Ca2+的抑制作用
目的:探讨黄连素对人结肠癌细胞系HT-29的作用及与Ca2+有关的机制,为黄连素作为一种新的结肠癌化学治疗药物进行理论上的准备和提供相关实验结果.方法:0.1 μmol/L,0.3μmol/L,3.0 μmol/L,30.0 μmol/L的黄连素加入到HT-29结肠癌细胞系培养液中.分别在第1 d,第2 d,第3 d测量各有关值.以bapta-AM(33 μmol/L)为细胞内Ca2+螯合剂,verapamil(50 mmol/L)为细胞膜Ca2+通道拮抗剂,分别抑制细胞内Ca2+和细胞膜Ca2+通道,对比观察黄连素对细胞内Ca2+的影响及结肠癌细胞在不同Ca2+浓度条件下各有关值.细胞记数检测细胞的生长和增生,用免疫荧光分光光度法检测细胞内Ca2+浓度.结果:黄连素在浓度大于0.3 μmol/L时则有明显的量效关系抑制结肠癌细胞的生长.黄连素在浓度大于0.3 μmol/L时对细胞内Ca2+的释放有抑制作用.结论:黄连素能够抑制Ca2+的释放可能为黄连素抑制HT-29细胞生长和增生的一个机制.
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运动对N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶及其同工酶活性变化的影响
监测运动员运动后尿中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)及其同工酶NAG-A,NAG-B的活性变化,对于评价运动员的运动训练及其身体机能状况具有重要意义.实验结果表明:运动后同工酶NAG-B的酶活性显著升高,而且NAG-B酶活性恢复较快,因此NAG-B可以作为一个新的灵敏的生化指标来监测运动员的运动训练及身体机能状况.
关键词： 运动 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶 同工酶 荧光分光光度法 -
荧光分光光度法测定苯甘孢霉素的含量
目的建立荧光分光光度法测定苯甘孢霉素的含量.方法采用荧光分光光度法以激发波长348nm,发射波长444nm测定荧光强度.结果浓度在0～5.0μg·ml-1范围内呈良好的线性关系.回归方程Y=0.48+50.6X,r=0.9994.方法的平均回收率为98.76%.RSD为1.35%(n=5).结论方法简便易行,快速准确,可用于该制剂的质量控制.
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凝胶电泳法及荧光光度法测定siRNA阳离子脂质体的含量和包封率
建立siRNA含量测定方法,用于阳离子脂质体中siRNA的含量和包封率测定.利用荧光染料SYBRGold和Ribogreen与siRNA结合后能发出强烈荧光的原理,分别采用电泳法和荧光分光光度法测定脂质体中的siRNA含量,计算阳离子脂质体的包封率.SYBR Gold电泳法的检测线性范围为0.2～2.0μmol·L-1(R=0.9930),高、中、低3个浓度的回收率分别为96.35%、96.92%和100.74%(n=3);日内日间精密度的RSD均小于5%(n=5).Ribogreen荧光分光光度法的检测线性范围为10～50 nmol·L-1(R=0.9971),高、中、低3个浓度的回收率分别为98.22%、99.88%和99.64%(n=3);日内日间精密度的RSD均小于5%(n=5).利用这两种方法所测得3批阳离子脂质体中siRNA平均含量分别为98.52%和97.85%,平均包封率分别为99.20%和96.45%,经方差分析,两种方法无显著性差异.两种方法准确可靠、稳定性高和方便实用,均可用于阳离子脂质体中siRNA的含量和包封率测定.
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大茴香酸-硫酸荧光体系测定黄芪甲苷
黄芪甲苷(astragaloside)是中药膜荚黄芪Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge.和蒙古黄芪Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge. var. mongholicus (Bge.) Hsiao的主要活性成分,有抗炎、降压、镇痛、镇静、升高血浆中cAMP水平、促进小鼠再生肝DNA的含量[1,2]以及促进免疫功能等生理活性.黄芪甲苷的测定方法主要有：紫外分光光度法[3,4]、薄层扫描法[5,6]和HPLC法[7,8].
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荧光分光光度法检测裸鼠移植瘤组织中阿霉素浓度
目的建立裸鼠移植瘤组织中阿霉(Dox)素浓度的荧光分光光度法检测方法.方法建立KB、KBv 200细胞裸鼠移植瘤模型,经鼠尾静脉给予不同剂量阿霉素,3 h后,处死裸鼠,分离及匀浆肿瘤组织,用含0.3mol·L-1 HCl的60%乙醇抽提,离心取上清液,用荧光分光光度计在λex/em为470/590 nm测定其荧光值,通过标准曲线方程计算阿霉素浓度.结果样本扫描未见杂峰,日内精密度＜6.4%,日间精密度小于5.7%,阿霉素于肿瘤组织匀浆中抽提回收率＞75.9%,KB细胞移植瘤组织中阿霉素浓度为KBv 200的2.53～4.54倍.结论本方法专属性高,快速、简便,结果准确可靠,适用于裸鼠移植瘤组织中Dox药代动力学研究.
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叶绿素非离子表面活性剂囊泡的制备及其理化性质的表征
目的:制备叶绿素非离子表面活性剂囊泡(chlorophyll nonionic surfactant vesicles,Chl-NS),并对其理化性质进行表征.方法:以非离子表面活性剂脂肪酸山梨坦-80(Span-80)和聚山梨酯-80(Tween-80)复配并结合胆固醇为膜骨架,采用薄膜超声分散法制备叶绿素非离子表面活性剂囊泡;利用透射电镜和Malvern粒度仪分别考察其形态、粒径、分散系数、Zeta电位及稳定性;并进一步考察囊泡对叶绿素的包封率以及包载于囊泡中的叶绿素荧光强度的变化.结果:叶绿素非离子表面活性剂囊泡呈核壳层球形结构,大小均匀,平均粒径为(130.2±10.0) nm,多分散指数(polydispersity index,PDI)值为(0.240±0.01),Zeta电位为(-30.0±5.0)mV,对叶绿素包封率达到(45.2±2.1)％;叶绿素包载于囊泡后,体系的荧光强度明显增强且具有较高的稳定性.结论:本实验制备了稳定性高、粒径均匀、对叶绿素具有良好的包封作用,具有较强近红外荧光特征的非离子表面活性剂囊泡,该囊泡体系有望应用于体内成像系统的相关研究,具有重要临床意义.
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荧光分光光度法测定赤土茯苓中的赤土茯苓苷
目的：建立测定赤土茯苓中赤土茯苓苷含量的方法。 方法：荧光分光光度法。用无水乙醇作溶媒，以Ex＝388 nm，Em＝503 nm 测定荧光强度。结果：浓度在0.4～8.0μg/ml范围内，浓度与荧光强 度呈良好线性关系，回归方程为F＝0.3161＋6.8615C，r＝0.9995。平均加样回收率为99.1 4%，RSD为0.98%。测得赤土茯苓中赤土茯苓苷的含量为0.53%。结论 ：本法快速、简便、灵敏，可用于赤土茯苓药材及制剂的含量测定及质量控制。
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荧光分光光度法测定注射用盐酸拓普替康的含量
目的:建立注射用盐酸拓普替康的荧光光度测定法.方法:以水为溶剂,采用荧光分光光度法测定注射用盐酸拓普替康的含量,测定波长为ex-380.8nm,em=521.6nm.结果:平均回收率99.81%,RSD为0.87%,线性范围为0.16～1.6μg·ml-1.结论:该方法简便,准确,适用于注射用盐酸拓普替康的含量测定.
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荧光分光光度法测定奥沙普嗪肠溶胶囊的含量
目的:建立奥沙普嗪肠溶胶囊的荧光测定法.方法:以无水乙醇为溶剂,采用荧光分光光度法测定奥沙普嗪肠溶胶囊的含量,测定波长为Ex=287.0nm,Em=368.0nm.结果:平均回收率99.71%,RSD为0.89%,线性范围为0.2～1.0μg·ml-1.结论:该方法简便、灵敏、准确,适用于奥沙普嗪肠溶胶囊的含量测定.
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唾液中核黄素药-时曲线的测定
目的：考察唾液与血浆中核黄素药-时曲线的相关性。方法：成人口服核黄素片后，用荧光分光光度法测定唾液中的核黄素，其激发波长为475.4nm,发射波长为524.7nm。结果：核黄素的回收率可达96%，其线性范围为5ng.ml-1～3μg.ml-1，检出限量为5ng.ml-1,回归方程为△F′=0.116c+0.232,r=0.9999。结论：测得唾液中核黄素药-时曲线与文献报道的血浆药-时曲线形状相似。
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荧光分光光度法测定大山楂丸中黄酮类化合物的含量
目的：建立一种新的测定大山楂丸中黄酮类化合物的荧光分光光度法。方法：以槲皮素为对照品，设定荧光激发/发射波长为281/352 nm，激发和发射光狭缝宽度为5 nm，在300～500 nm波长范围内测定荧光光谱。对酸度、表面活性剂、温度、反应时间及铝离子浓度等影响因素进行考察，优化试验条件。结果：在盐酸酸性介质中、无表面活性剂、常温下、反应时间30 min、铝离子浓度为2×10-4 mol/L时，体系的荧光强度大且稳定。当槲皮素的浓度范围在0.2×10-5～1.5×10-5 mol/L之间时，荧光强度（F）和槲皮素浓度（c）呈良好的线性关系；检测限为2.4×10-8 mol/L。3批大山楂丸中总黄酮的平均含量分别为24.56、27.85、25.13 mg/g，与《中国药典》方法测定结果基本一致。结论：本方法操作简便、快速、准确，可用于测定大山楂丸中总黄酮的含量。
