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P44/42MAPK及P38MAPK介导氯化镉致肾上腺皮质细胞凋亡的作用
目的 观察氯化镉对豚鼠肾上腺皮质细胞凋亡的影响，并探讨P44/42MAPK及P38MAPK在此过程中的可能作用。
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2-01 铅对肾上腺皮质细胞线粒体的氧化损伤
目的研究铅对肾上腺皮质细胞氧化应激和线粒体功能的影响,为了解其肾上腺皮质毒作用机制提供依据.方法原代分离培养豚鼠肾上腺皮质细胞,以0、6.25、12.5、25、50、100 μmol/L醋酸铅(PbAc)处理细胞,观察PbAc诱导肾上腺皮质细胞活性氧(ROS)产生和线粒体损伤作用.ROS检测采用荧光分光光度法,线粒体膜电位(MMP)和细胞存活状态采用Rh123和PI双标记、流式细胞术检测,细胞ATP水平采用化学发光法测定.结果 PbAc染毒后肾上腺皮质细胞ROS形成水平随剂量增加而增加,具有剂量-效应关系[^y=4.16+10.21×1g(x+1),P＜0.01,R2=0.641];线粒体膜电位呈剂量依赖性降低,Rh123的平均荧光强度(MFI)在6.25～100μmol/L各剂量组依次为1.01、0.94、0.96、0.95和0.91,与对照组(1.35)比较,差异有显著性(P＜0.01);染毒后细胞死亡率轻度增加,与对照组(1.02%)比较,50μmol/L和100 μmol/L剂量组分别为3.16%和3.40%,差异有显著性(P＜0.05);ATP水平降低与PbAc剂量之间存在剂量-效应关系[^y=212 965.7-51 592.5×1g(x+1),P＜0.01,R2=0.568],剂量和时间对ATP水平的影响呈协同抑制作用(P＜0.01).结论线粒体氧化应激介导肾上腺皮质细胞毒性可能是PbAc毒作用机制之一,线粒体损伤是铅致肾上腺皮质毒作用的早期细胞和分子事件.
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白细胞介素18与1型糖尿病
白细胞介素18(IL-18),以往也称干扰素γ(IFN-γ)诱导因子(IGIF),是一个新近克隆成功和命名的早期致炎性细胞因子,其分子量为18～19kD[1,2].本文拟对IL-18的分子结构、生物合成、受体特性以及生物学效应等方面进行阐述,并重点讨论IL-18在1型糖尿病发病机理中的作用.一、IL-18的分子结构及其特征小鼠IL-18基因编码了由192个氨基酸组成的无生物活性的单链前体多肽即IL-18原,其中N末端含有35个氨基酸组成的非信号序列.IL-18具有3个半胱氨酸残基[1].人IL-18原由193个氨基酸组成,与小鼠IL-18原具有65%的同源性[2].人和小鼠IL-18之间的生物学效应存在种属特异性[3].通过比较氨基酸序列及其构象,发现IL-18与IL-1具有相似的构象特征,但IL-18在IL-1样构象中有三个关键性氨基酸与IL-1不同[3].二、IL-18的生物合成及其调控IL-18基因位于小鼠第9对染色体[4],由2.6万个以上的碱基对组成,含有7个外显子[5].外显子1和外显子2是5'非编码外显子.启动子1位于外显子1上游,主要控制可诱导性转录,而位于外显子2上游的启动子2可控制基础性(体质性)转录[5].另有研究表明,两个启动子均有脂多糖(LPS)可诱导性活性,只是启动子1略高于启动子2,而两个启动子的基础活性大致相等.提示两者均参与调控体质性和可诱导性的转录过程[6].现已证实,IL-18可以表达在免疫系统的巨噬细胞、树突状细胞和T淋巴细胞[1,5,6]以及非免疫细胞,如皮肤角朊细胞[7]、成骨细胞[8]、关节软骨细胞[9]、大脑星形胶质细胞[10]、垂体和肾上腺皮质细胞[11]、肠上皮细胞[12]、支气管上皮细胞和成纤维细胞[5].本文作者首次发现胰岛β细胞也可表达IL-18[13].这与IL-12仅在有限的细胞中表达[5]有显著的区别,提示IL-18比IL-12具有更广泛的细胞来源和相应的生物学效应.
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PARP及NF-κB在重症急性胰腺炎大鼠肾上腺细胞中的表达及5-AIQ/PDTC的干预作用
目的 探讨ADP核糖聚合酶(PARP)/核因子(NF)-κB在大鼠重症急性胰腺炎(SAP)肾上腺损伤中的表达情况及PARP抑制剂5-氨基异喹啉酮(5-AIQ)/吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)的干预作用.方法 将原代培养的肾上腺皮质细胞进行细胞定量后分为6组:空白对照(SO组)、胰腺炎组(SAP组)、PDTC药物对照组(SO+ PDTC组)、PDTC干预组(SAP+ PDTC组)、5-AIQ药物对照组(SO +5-AIQ组)和5-AIQ干预组(SAP+ 5-AIQ组).以胰腺炎大鼠血清刺激SAP组和2个干预组,之后以适浓度加入每组相应药物,在给药后继续培养12h,观察各组细胞皮质酮分泌情况及PARP/NF-κB的表达情况.结果 体外培养肾上腺细胞呈圆形或类圆形,胞质内有分泌颗粒,培养第2天贴壁率约60％,可被3β-HSD染色.SAP组皮质酮水平为(216.4±15.7) μg/L,明显低于SO组(294.8±16.3)μg/L(P ＜0.05),5-AIQ干预组和PDTC干预组皮质酮水平分别为(258.6±19.0)μg/L及(264.3±18.2)μg/L,明显高于SAP组但低于SO组和药物对照组(P ＜0.05)；SAP组和PDTC干预组肾上腺细胞PARP-1的表达高于SO组,5-AIQ干预组PARP-1的表达明显低于SAP组和PDTC干预组,但高于SO组和药物对照组；SAP组肾上腺细胞NF-κB的表达高于SO组,5-AIQ干预组和PDTC干预组NF-κB的表达明显低于SAP组,但高于SO组和药物对照组.结论 PARP/NK-κB通路参与重症急性胰腺炎肾上腺损伤过程,应用5-AIQ及PDTC可在一定程度上减轻肾上腺细胞功能的损伤程度.
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镉对肾上腺皮质细胞线粒体功能的影响
目的研究镉对肾上腺皮质细胞线粒体功能的影响，为探讨其内分泌毒作用机制提供依据。方法原代分离培养豚鼠肾上腺皮质细胞，用氯化镉(CdCl2)0、6．25、12．50、25．25、50．00、100．00、200．00μmol／L处理细胞1 h，以50 μmol／L CdCl2处理细胞0、15、30、60、120、240 min，观察CdCl2对肾上腺皮质细胞线粒体功能毒作用的剂量-效应及时间-效应关系。应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)试验检测线粒体酶活力，用流式细胞仪结合罗丹明123(Rh123)和碘化丙啶(PI)双标记法检测线粒体膜电位(MMP)和细胞存活状态。结果CdCl2引起细胞线粒体酶活力及MMP降低：以6．25～200．00μmol/L CdCl2染毒细胞1 h，对照组MTT的平均吸光度(A570nm)值为0．164，CdCl2各组为0．138～0．067，比对照组明显降低；染CdCl2组细胞MMP也降低，Rh123平均荧光强度为2．44～1．02(对照组为2．63)。50 μmol／L CdCl2染毒后不同时间(15～240 min)，MTTA570nm值和MMP均降低，前者为0．093～0．049(对照组为0．180)，MMP为1．37～0．93(对照组为1．85)。从低剂量组(6．25 μrol／L CdCl2)和短染毒时间(15 min)起，MTTA570nm值和MMP的变化与对照组相比，差异均有显著性(P<0．05)；CdCl2对线粒体酶活力的半数抑制浓度(IC50)为61．29μmol／L；细胞死亡率随着染毒剂量和时间的增加而增加，50μmol／L CdCl2染毒60 min即明显增加，细胞死亡明显晚于MMP和MTT值的改变。上述指标与CdCl2染毒之间存在剂量-效应、时间-效应关系(剂量-效应：rMTT=-0．816，rMMP=-0．775，r细胞死亡率=0．967，均P<0．01；时间 -效应：rMTT= -0．706，rMMP=-0．406，r细胞死亡率＝0．980，均 P<0．01)。结论 CdCl2可引起肾上腺皮质细胞损害。线粒体损伤可能是镉毒作用的早期现象。
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肾上腺皮质细胞的单层培养方法
目的: 体外单层培养大鼠肾上腺皮质细胞,以便为肾上腺皮质细胞的有关实验提供必要条件.方法: 采用胶原酶Ⅱ、透明质酸酶消化等步骤分离Wistar大鼠的肾上腺皮质细胞;分离的细胞于含15% NBS的DMEM培养基、37℃、5% CO2的环境中培养,3β-羟基类固醇脱氢酶特异染色鉴定.结果: 培养的肾上腺皮质细胞呈梭形,胞体较大、有少量突起,3β-羟基类固醇脱氢酶特异染色后胞体显著着蓝色.肾上腺皮质细胞不呈典型的"S"形增殖趋势,适于作原代培养.上皮样细胞和成纤维样细胞同时存在.结论: 通过细胞形态观察及特异酶染色鉴定,本文培养的细胞为大鼠肾上腺皮质细胞.
关键词： 肾上腺皮质细胞 单层培养 3β-羟基类固醇脱氢酶 -
补骨脂酚对人肾上腺皮质癌H295R细胞中睾酮和雌二醇分泌的影响
[目的]研究补骨脂酚对人肾上腺皮质细胞(H295R)睾酮及雌二醇分泌的影响.[方法]实验分为空白对照组及补骨脂酚不同浓度组,分别使用CCK-8法及酶联免疫吸附法(ELISA法)检测补骨脂酚对H295R细胞活力、睾酮和雌二醇分泌的影响;同时采用实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测补骨脂酚对睾酮和雌二醇合成酶CYP17A1和CYP19A1 mRNA表达的影响.[结果]补骨脂酚对睾酮合成酶CYP17A1 mRNA无显著影响,但能上调雌二醇合成酶CYP19A1 mRNA含量,具有减少睾酮分泌增加雌二醇分泌的作用.[结论]补骨脂酚促进H295R细胞中雌激素的产生.
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氯化镉致豚鼠肾上腺皮质细胞凋亡作用
目的 探讨P44/42丝裂素活化蛋白激酶(P44/42MAPK)在CdCl2诱发豚鼠肾上腺皮质细胞凋亡中的作用机制.方法 原代培养豚鼠肾上腺皮质细胞,以0,12.5,25,50.100和200 μmol/L CdCl2处理细胞2 h,及100μmol/L的CdCl2处理0,0.5,1,2,3和4 h,以Annexin V碘化丙啶(PI)联合染色,流式细胞仪检测细胞凋亡率;0,12.5,25,50,100和200 ttmol/L CdCl2处理1 h,或者100 μmol/L的CdCl2处理0,15,30,60,90和120 min;采用蛋白印迹(Western Blot)法分析P44/42总蛋白量、磷酸化水平以及c-Fos的表达水平.结果 CdCl2以时间和剂量依赖的方式诱导细胞凋亡,0,12.5,25,50,100和200 μmol/L CdCl2处理细胞2 h后,凋亡率分别为1.99%,14.79%,35.28%,44.62%,55.91%及73.48 7%;100μmol/L CdCl2染毒0,0.5,1,2,3和4 h,细胞凋亡率分别为1.04%,14.70%,33.99%,49.36%,61.57%及71.55%.CdCl2诱发P44、P42磷酸化水平升高及C-fos的高表达,以25,50,100和200gmol/L CdCl2染毒1 h,P44磷酸化水平分别升高了1.0,1.2,2.1和3.2倍;100和200μmol/L CdCl2染毒1 h.P42磷酸化水平升高了0.8和1.3倍;12.5.25,50,100和200 μmol/L CdCl2处理细胞1 h,c-Fos的表达水平升高了0.6,1.2,1.4,2.3和1.8倍.100 μmol/L CdCl2作用细胞15,30,60,90和120 min后,P44磷酸化水平分别升高了0.5,3.1,4.9,5.9和5.3倍;P42的磷酸化水平分别升高了0.1,0.5,0.9,1.1和1.1倍,同时c-Fos蛋白水平分别升高了1.6,2.3,2.3,3.1和2.8倍.结论 一定剂量CdCl2作用肾上腺皮质细胞后,P44/42呈现过度磷酸化,并可能通过诱发c-Fos高表达,导致细胞凋亡.
关键词： 氯化镉 肾上腺皮质细胞 凋亡 P44/42丝裂素活化蛋白激酶 c-fos -
雷公藤甲素诱导大鼠肾上腺皮质细胞凋亡研究
目的:了解雷公藤甲素诱导大鼠肾上腺皮质细胞凋亡的发生.方法:体外分离培养大鼠肾上腺皮质细胞,以蛋白因子添加素V和碘化丙啶(PI)联合标记,流式细胞仪检测,观察雷公藤甲素诱导细胞凋亡的特征.结果:雷公藤甲素以时间和剂量依赖的方式诱导细胞凋亡,0、12.5、25、50、100和200μg/L雷公藤甲素处理细胞2h,凋亡率分别为1.67%、16.54%、32.53%、47.62%、57.12%及77.45%;100μg/L雷公藤甲素染毒0、0.5、1、2、3和4h,细胞凋亡率分别为1.12%、14.37%、35.26%、49.75%、62.65%及78.46%.结论:雷公藤甲素可诱导肾上腺皮质细胞凋亡.
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P44/42MAPK介导雷公藤甲素致肾上腺皮质细胞凋亡作用
目的:了解P44/42丝裂素活化蛋白激酶在雷公藤甲素诱导大鼠肾上腺皮质细胞凋亡中的作用.方法:体外分离培养大鼠肾上腺皮质细胞,以不同浓度梯度雷公藤甲素染毒相同时间,或相同浓度雷公藤甲素染毒不同时间,以蛋白因子添加素V和碘化丙啶联合标记,流式细胞仪检测细胞凋亡率;蛋白印迹法分析P44/42总蛋白量、磷酸化水平以及c-Fos的表达水平.结果:雷公藤甲素以时间和剂量依赖的方式诱导细胞凋亡;雷公藤甲素诱导P44、P42磷酸化水平升高及c-Fos的高表达.结论:一定剂量雷公藤甲素作用于肾上腺皮质细胞后,P44/42过度磷酸化,诱导c-Fos的高表达,导致细胞凋亡.
关键词： 雷公藤甲素 肾上腺皮质细胞 凋亡 P44/42丝裂素活化蛋白激酶 c-fos -
雷公藤内酯醇药物血清对体外培养的大鼠肾上腺皮质细胞分泌功能的影响
目的:研究雷公藤内酯醇药物血清对体外培养的大鼠肾上腺皮质细胞分泌功能的影响.方法:将SD大鼠30只随机分成对照组、泼尼松组和低、中、高剂量雷公藤内酯醇组,相应药物灌胃7 d制备药物血清.分离正常大鼠肾上腺皮质细胞,分别加入药物血清常规培养48 h后,采用免疫组织化学法观察增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达,并计算PCNA阳性细胞数;透射电子显微镜观察肾上腺皮质细胞的超微结构;酶联免疫吸附测定法检测细胞培养上清液中皮质酮水平;实时荧光定量聚合酶链式反应法检测肾上腺皮质细胞3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD) mRNA表达水平.结果:各个浓度雷公藤内酯醇药物血清组肾上腺皮质细胞培养上清液中皮质酮水平及细胞中3β-HSD mRNA表达水平较对照组明显升高;中、高剂量雷公藤内酯醇组PCNA阳性细胞比率高于对照组(P<0.05),泼尼松组上清液中皮质酮水平、细胞中3β-HSD mRNA表达水平和PCNA阳性细胞比率均低于对照组(P<0.05).结论:雷公藤内酯醇对体外培养的大鼠肾上腺皮质细胞有刺激作用,可以促使肾上腺皮质细胞分泌皮质酮.
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大鼠肾上腺皮质细胞原代培养分离与鉴定
目的 体外培养大鼠肾上腺皮质细胞原代细胞,并为临床实验提供对照和补充.方法 采用胶原酶Ⅱ、透明质酸酶消化法分离Wistar大鼠的肾上腺皮质细胞,在不同离心转速下离心后分为三组(A组1200r/min、B组1500r/min和C组1800r/min);分离出的细胞于全料培养基恒温培养;采用免疫组织化学法、培养基上清皮质酮水平测定及电镜下观察细胞形态分别鉴定.结果 三组中B组培养得到肾上腺皮质细胞较多,A、C组得到正常的皮质细胞较少;光镜下培养的肾上腺皮质细胞呈梭形、胞体较大、有少量突起,3β-羟内固醇脱氢酶特异性染色后胞质内可见大量棕黄色甲蜡沉淀;培养3d后换液,取培养基上清测定皮质酮水平特异性增高.结论 通过皮质酮水平测定、光镜和电镜下细胞形态观察及特异酶染色鉴定,本实验培养的细胞为原代大鼠肾上腺皮质细胞,该方法 培养出的肾上腺皮质细胞为肾上腺体外实验研究提供了技术基础.
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小儿卵巢非特异性类固醇细胞瘤一例
卵巢类同醇细胞瘤又称脂质细胞瘤,是一组具有相似的形态特征,即瘤细胞呈大圆形或多边形,酷似黄体细胞、间质细胞及肾上腺皮质细胞,并分泌各种类同醇激素而产生临床综合征的肿瘤.
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应激活化蛋白激酶介导氯化镉致肾上腺皮质细胞凋亡作用探讨
目的 了解氯化镉(CdCl2)对豚鼠肾上腺皮质细胞应激活化蛋白激酶(stress activated protein kinase, SAPK)活性的影响及与凋亡的可能关系。方法 以0.625、1.25和2.50 mg/kg CdCl2整体腹腔注射染毒雄性豚鼠，分别于染毒1 h和12 h处死动物，取肾上腺皮质进行SAPK活性测定(免疫沉淀-蛋白印迹杂交-化学发光法)和电镜观察细胞凋亡。结果 整体染毒1 h，SAPK活性随CdCl2染毒剂量的增加呈增加的趋势；染毒12 h，各组SAPK活性变化不明显。电镜观察染毒1 h肾上腺皮质细胞未见凋亡征象；但染毒12 h可见早期细胞凋亡。结论 SAPK活化在CdCl2诱导肾上腺皮质细胞凋亡过程中可能起重要作用。
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更年汤对肾阳虚围绝经期模型大鼠肾上腺皮质中Bax和Bcl-2蛋白表达的影响
目的:探讨中药复方更年汤对肾阳虚型围绝经期模型大鼠肾上腺皮质中Bax、Bcl-2表达的影响.方法:建立自然衰老的雌性肾阳虚型围绝经期大鼠模型,11～12月龄60只,随机分为更年汤组、利维爱组、生理盐水组,每组20只;4月龄20只作为青年组;18月龄20只作为老年组.用免疫组化法检测肾上腺皮质Bax、Bcl-2的表达.结果:与生理盐数组比较,利维爱组肾上腺皮质Bax表达降低、Bcl-2的表达升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).更年汤组肾上腺皮质Bax阳性总积分表达低于利维爱组、生理盐水组,Bcl-2阳性总积分表达高于利维爱组、生理盐水组,差异均有统计学意义(P＜0.05),更年汤组稍优于利维爱组.结论:自拟更年汤能降低肾阳虚型围绝经期模型大鼠肾上腺皮质Bax的表达,提高肾上腺皮质Bcl-2表达水平,平衡围绝经期内分泌失调.
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右肾上腺髓样脂肪瘤1例
患者女,38岁.因体检发现右肾上腺肿瘤1个月,于2006年4月22日入院.查体:系统检查未见明显异常;B超示:右肾上腺区强回声实性占位.CT检查:右肾上腺区肿物,其内可见脂肪密度,考虑为右肾上腺髓样脂肪瘤.行手术切除.病理检查,肉眼:灰黄灰褐色球形肿物一个,大小为7.5 cm×6 cm×3 cm,表面有不完整包膜,切面实性黄褐色,有灶性出血.镜下:肿瘤组织由大量分化成熟的脂肪组织构成,在脂肪组织间有弥散分布的骨髓成分,可见巨核细胞、粒细胞、红细胞和淋巴细胞被脂肪细胞浸润,局部周边见残留肾上腺皮质细胞(图1).病理诊断:(右)肾上腺髓样脂肪瘤.
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儿童系统使用糖皮质激素临床经验
糖皮质激素属于类固醇,分为内源性及人工合成两大类.内源性糖皮质激素在体内由胆固醇肾上腺皮质细胞中合成并分泌,主要为皮质醇,也称“氢化可的松”,部分转化为皮质素,也称“可的松”,属于肾上腺皮质激素;目前临床使用的主要是人工合成糖皮质激素,包括氢化可的松、可的松、甲泼尼龙、泼尼松、泼尼松龙、倍他米松、地塞米松等.
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1例肾上腺脑白质营养不良患儿的护理
儿童肾上腺脑自质营养不良(ALD)是一种遗传性代谢性疾病呈X一连锁隐性遗传，临床较为少见。主要分为脑型和肾上腺脊髓神经病型，本例为儿童脑型，临床表现为原本正常的婴儿或儿童出现进行性精神运动障碍，视、听障碍，视神经萎缩，智力低下，全身性或限局性癫痫发作，痉挛性瘫痪[1]。儿童期发病者为80豫，儿童平均年龄为7岁，大多数患者病情呈进行性加重，多在发病后0.5~50年死亡，但也有个别病例超过25年[2]。在肾上腺皮质细胞中聚集可引起肾上腺皮质细胞膜表面的ACTH受体功能下降，细胞内类固醇合成受抑制，而致肾上腺功能减退[3]。
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复方升汞擦剂的制备及临床应用
斑秃又名圆形脱发、圆秃,中医称鬼剃头、油风,是一种头皮毛发骤然发生的局限性脱发,呈斑片状脱落,局部皮肤正常,无自觉症状,严重者可呈全秃[1].其发病原因至今尚未完全清楚,不少人认为可能与精神过度紧张、机体过度劳累、遗传等因素有关[2].也有人认为是自身免疫性疾病,在患者血清中可查见多种自身抗体,如抗甲状腺抗体、抗胃壁细胞抗体、抗肾上腺皮质细胞抗体等.一般认为其发病机制可能是血管运动中枢机能紊乱,交感及副交感神经失调引起患部毛细血管持久性收缩,毛乳头供血障碍引发毛发营养不良而导致发病[3].临床上治疗斑秃方法较多,效果各异,但尚无理想的药物.我院药剂科与皮肤科合作研制的复方升汞擦剂(又称生发水),配合一定的口服药物治疗斑秃,经临床使用多年,效果显著,现报道如下.
