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补骨脂酚对HepG2的细胞毒性及BSEP、NTCP、FXR、CYP7A1的影响
目的 观察补骨脂酚对体外HepG2细胞的毒性和对胆汁酸转运体的影响.方法 用MTT法检测不同浓度补骨脂酚作用于HepG2细胞2、6和24 h对细胞增殖的影响,计算相应IC50值,并检测细胞培养基中AST和ALP活性.用实时定量PCR检测BSEP、NTCP、FXR和CYP7A1的mRNA.结果 HepG2细胞的存活率与补骨脂酚终浓度和作用时间呈负相关,在62.5～187.5 μmol/L之间有良好的量效关系.补骨脂酚作用HepG2细胞6h的IC50=177.9 μmol/L,24 h的IC50=41.6μmol/L.补骨脂酚作用24 h的细胞毒性明显,细胞培养基中的AST和ALP活性显著升高,而60 μmol/L的环孢菌素A(CsA)几乎可以完全对抗补骨脂酚对HepG2细胞的抑制作用.实时定量PCR检测表明,补骨脂酚作用于HepG2细胞2h时BSEP被抑制,而24 h时BSEP、NTCP、FXR和CYP7A1的mRNA增加.结论 补骨脂酚对HepG2细胞的细胞毒性可能需要通过线粒体,并可能与其影响肝细胞胆汁酸转运有关.
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补骨脂酚对TGF-β诱导人肝星状细胞损伤的保护作用
目的:探讨补骨脂酚对转化生长因子-β(TGF-β)诱导人肝星状细胞损伤的保护作用及其机制.方法:通过噻唑蓝(MTT)比色法检测各组人肝星状细胞活性,筛选出补骨脂酚安全有效浓度;本实验分为空白组、模型组、补骨脂酚组(1×10-5mol·L-1)及雌二醇组(1×10-6mol· L-1),同样检测各组细胞的活性,除空白组外,其余各组均加入10 μg· L-1TGF-β诱导人肝星状细胞损伤;分别采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),丙二醛(MDA)的水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞中基质金属蛋白酶-1(MMP-1),胶原蛋白-Ⅰ (Col-Ⅰ)mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中MMP-1,Col-Ⅰ蛋白的表达水平.结果:与模型组比较,1 ×10-5 mol· L-1补骨脂酚显著提高TGF-β诱导人肝星状细胞及细胞中SOD,GSH-Px活性,显著降低细胞中MDA含量及Col-Ⅰ,MMP-1 mRNA和蛋白的表达(P＜0.01).结论:补骨脂酚对TGF-α诱导人肝星状细胞损伤的保护作用,主要是通过提高细胞中抗氧化酶的活性、降低细胞中MMP-1,Col-Ⅰ mRNA和蛋白的含量.
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补骨脂酚的提取纯化工艺优选及其对骨质疏松症的治疗作用分析
目的:优选补骨脂酚的提取纯化工艺,并考察其对骨质疏松症的治疗作用.方法:使用乙醇回流法提取,经D101型大孔树脂纯化,通过单因素试验优选工艺条件,冷冻干燥后得到补骨脂酚;采用斑马鱼体内试验评价补骨脂酚对骨密度和骨骼发育钙化的影响.结果:优选的工艺条件为加8倍量85％乙醇浸泡过夜,回流提取3次,每次2h,边搅拌边往补骨脂酚粗提物中加入0.2％氢氧化钠水溶液至完全溶解,过预处理好的D101型大孔树脂柱处理,上样流速1 BV·h-1,静置4h,加水6 BV洗脱,用60％乙醇2 BV洗脱,加95％乙醇4 BV洗脱,收集95％乙醇的洗脱液;制备的补骨脂酚质量分数＞80％,收率＞10％.斑马鱼体内活性研究表明补骨脂酚能提高斑马鱼骨质疏松症的骨密度,且能促进正常斑马鱼骨骼发育钙化.结论:此工艺具有绿色环保、操作简便等优点,所得补骨脂酚的纯度和收率均比较理想,可开发成预防或治疗骨质疏松症的药品和食品.
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补骨脂酚对酪氨酸酶活性的影响及动力学分析
目的:采用酶促反应动力学方法研究补骨脂酚对酪氨酸单酚酶和二酚酶活性的影响,并考察补骨脂酚对酪氨酸酶的作川机制及动力学参数 方法:在pH6.8的磷酸盐缓冲体系中,分别以L-酪氨酸和左旋多巴为底物,37℃反应后在475 nm处测定吸光度,研究补骨脂酚对酪氨酸酶催化反应进程和酶活性抑制的影响,计算抑制动力学参数.结果:补骨脂酚对酪氨酸单酚酶和二酚酶均有抑制作用,半抑制浓度分别为1.49,0.41 mmol· L-1,其中对酪氨酸二酚酶的抑制作用表现为可逆抑制,其抑制作川表现为竞争性抑制,抑制常数0.955 mmol·L-.结论:在低浓度范围内,补骨脂酚对酪氨酸酶的抑制作用较熊果苷更明显,具有开发成天然酪氨酸酶抑制剂的潜力.
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补骨脂及其与甘草配伍单次给药大鼠的毒代动力学及肝肾毒性初探
研究补骨脂及补骨脂-甘草配伍水煎剂中对补骨脂酚在大鼠体内的毒代动力学,探讨单次经口给予高剂量补骨脂及其与甘草配伍水煎剂的肝、肾毒性,为临床安全用药提供新的科学依据.SD大鼠随机分为溶剂对照组、甘草组(20 g·kg-1)、肾毒性阳性对照组、补骨脂水煎液(40 g·kg-1)组(雄性、雌性)、补骨脂-甘草配伍合煎液(40 +20 g·kg-1)组(雄性、雌性),每组5只,单次灌胃给药.含补骨脂各组于给药后不同时间点静脉取血,HPLC测定血浆中补骨脂酚含量,DAS2.0软件拟合毒代动力学参数.测定各组大鼠给药24h后血中肝功能生化指标丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)以及肾功能生化指标尿素氮(BUN)、肌酐(Cr) 、β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)和人肾损伤分子1(Kim-1)水平,统计分析各组间差异.结果显示雌、雄大鼠单次灌胃补骨脂单煎液,血浆中补骨脂酚的毒代动力学参数明显不同,且补骨脂与甘草配伍后,补骨脂酚药时曲线下面积(AUC)、大血药浓度(Cmax)均升高,其中雌性大鼠AUC显著升高;血浆清除率(CL)降低;半衰期(t1/2)缩短,达峰时间(Tmax)延长;雄性大鼠表观分布容积(V)显著降低.各组ALT,AST与溶剂对照组比较无明显差异.补骨脂组及其与甘草配伍组NAG均显著升高(P＜0.05).研究表明补骨脂酚在雌、雄大鼠体内的代谢存在性别差异.补骨脂与甘草配伍,甘草增加了大鼠对补骨脂酚的吸收和暴露量,延长了补骨脂酚在大鼠体内的作用时间,使补骨脂酚消除减慢.提示甘草影响补骨脂酚在大鼠体内的代谢.单次大剂量经口给予补骨脂,可引起大鼠肾损伤,未见明显肝毒性.但长期服用补骨脂或与甘草配伍产生的影响还有待进一步实验研究.
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沉默信息调控因子1通路介导补骨脂酚抑制脂多糖诱导的乳鼠心肌细胞炎症反应及凋亡
目的 研究补骨脂酚(BAK)对脂多糖(LPS)诱导的SD乳鼠心肌细胞炎症反应模型的作用及其分子机制.方法 SD乳鼠心肌细胞经1 μM、5 μM或10 μM的BAK孵育4 h后,再用LPS(100 ng/ml)孵育12 h,造成炎性心肌细胞损伤.用CCK8法检测心肌细胞活力,TUNEL法检测心肌细胞凋亡水平.ELISA法检测培养基中炎性因子TNF-α和IL-1水平,Western-blot法检测SIRT1、Bax和Bcl-2的表达水平.使用沉默信息调控因子1(SIRT1)阻断剂EX527观察SIRT1信号通路在这一过程中的作用.结果 LPS处理可以诱导心肌细胞炎性因子肿瘤坏死因子-α和白介素-1释放(P<0.05 vs control组),降低心肌细胞活力并促进其凋亡.蛋白水平抑制SIRT1表达,Bcl2下调,Bax上调(P<0.05 vs control组).1 μM、5 μM和10 μM的BAK预孵育可浓度依赖性地抑制炎性因子释放、改善心肌细胞活力、上调SIRT1表达,提高Bcl2并降低Bax表达,抑制心肌细胞凋亡.SIRT1阻断剂EX527可显著抑制上述抗炎及抗凋亡作用.结论 BAK通过激活SIRT1信号通路,减轻LPS诱导的大鼠心肌细胞炎症反应.
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补骨脂酚的体外抗肿瘤活性及其关键中间体的合成研究
以他莫西芬为阳性对照物,考察了补骨脂酚的体外抗人乳腺癌细胞株生物活性.生物活性测试结果表明补骨脂酚在低剂量下即有抑制人乳腺癌细胞增殖作用,它对人乳腺癌细胞T-47D及MDA.MB.23l的IC_(50)分别为2.89×10-5mol·L~(-1)及8.29×10~(-3)mol·L~(-1).另一方面,本文以Ireland-Claisen重排为关键步骤,在合成补骨脂酚所需的关键中间体时,改进了常规Claisen重排反应的条件及试剂,避免了有毒试剂的使用.
关键词： 补骨脂酚 抗肿瘤活性 Ireland-Claisen重排 合成 -
补骨脂酚及其与补骨脂素合用对HK-2细胞的毒性及其机制
目的 研究补骨脂酚(bakuchiol)及补骨脂酚与补骨脂素(psoralen)合用的肾细胞毒性,并初步探讨其毒性机制.方法 采用人肾近曲小管上皮细胞(HK-2),研究补骨脂酚、补骨脂酚与补骨脂素合用以及在大鼠肝匀浆S9作用下,对HK-2细胞的毒性作用.实验分为空白对照、溶剂对照、阳性对照马兜铃酸Ⅰ(AAⅠ)、补骨脂素5 μmol·L~(-1)、补骨脂酚5,10,20,30和40 μmol·L~(-1),补骨脂酚与补骨脂素合用(20+5),(30+5),(40+5)μmol·L~(-1)组.MTT法检测细胞存活率;乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞膜损伤;倒置显微镜观察细胞形态改变;Annexin Ⅴ/PI染色法检测细胞凋亡;PI染色法检测细胞周期.结果 补骨脂素5 μmol·L~(-1)作用于HK-2细胞,未观测到毒性作用;补骨脂酚、补骨脂酚与补骨脂素合用分别与HK-2细胞作用4,24,48和72 h,在较高浓度下(20,30和40 μmol·L~(-1))细胞存活被明显抑制(P<0.01),补骨脂酚24,48和72 h的IC_(50)值分别为(26.4±4.8),(21.8±0.6)和(24.1±0.8)μmol·L~(-1);在大鼠肝匀浆S9作用下,补骨脂酚的细胞毒性明显降低(P<0.01).较高浓度(30和40 μmol·L~(-1))的补骨脂酚、补骨脂酚与补骨脂素合用分别与HK-2细胞作用24 h,LDH的释放率明显增高(P<0.01),呈浓度依赖性;倒置显微镜下观察细胞形态变化,HK-2细胞随着浓度的增高,作用时间的延长,细胞收缩、变小变圆和破裂脱落现象越明显.补骨脂酚40 μmol·L~(-1)、补骨脂酚与补骨脂素合用(20+5),(30+5)和(40+5)μmol·L~(-1)可诱导HK-2细胞发生不同程度的凋亡,并且引起明显的细胞死亡.补骨脂酚10,20,30和40 μmol·L~(-1)、补骨脂酚与补骨脂素合用均影响细胞周期,主要表现为G2期减少,G1和S期增加或减少.结论 补骨脂酚对HK-2细胞有明显的毒性,与补骨脂素合用不能降低其毒性,经大鼠肝匀浆S9作用后,补骨脂酚的细胞毒性明显降低.补骨脂酚对HK-2细胞毒性作用机制可能为:①直接对细胞膜造成损伤;②引发细胞凋亡;③抑制细胞内DNA合成,阻滞细胞有丝分裂,抑制细胞增殖.
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细胞色素P450介导的补骨脂酚代谢减毒
目的:分析补骨脂酚代谢的细胞色素P450( cytochrome P450,CYP)表型,并在体外研究人肝微粒体(human liver microsomes,HLM)对补骨脂酚代谢减毒的机制.方法:用HLM与化学抑制剂合用法以及人源重组CYP酶法分析代谢补骨脂酚的CYP酶亚型.用HPLC-MS法分析CYP亚型酶特异底物的代谢产物生成量,研究CYP酶广谱抑制剂1-氨基苯并三唑(1 -aminobenzotriazole,ABT)对HLM中CYP亚型酶活性的抑制作用.用HPLC法分析补骨脂酚在HLM孵育液中的浓度,研究ABT对其代谢的影响.应用MTT法检测人肾近曲小管上皮细胞(human kidney-2,HK-2)的存活率来评价补骨脂酚对HK-2的毒性作用以及HLM中CYP酶和ABT对其毒性的影响.结果:HLM中的CYP1 A2、CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4参与了补骨脂酚的代谢,其中以CYP2C19的代谢转化率高；2.5 mmol/L ABT能明显抑制0.5 g/L HLM中上述4种CYP同工酶活性,抑制率达到90％以上；2.5 mmol/L ABT对补骨脂酚在HLM的代谢抑制率为83.24％±2.13％.在HK-2细胞存活率实验中,ABT能显著降低HLM对30 ～90μmol/L补骨脂酚的代谢减毒作用(P＜0.05).结论:HLM减低补骨脂酚HK-2细胞毒性的作用与HLM中CYP酶将补骨脂酚代谢转化为无毒或毒性较小的代谢产物有关,应用CYP酶广谱抑制剂能逆转HLM对补骨脂酚的代谢解毒作用.
关键词： 补骨脂酚 细胞色素P450酶系统 微粒体 肝 -
反相高效液相色谱法在补骨脂提取物3种主要成分含量测定中的应用
目的 采用反相高效液相色谱法,建立同时测定补骨脂提取物中补骨脂素、异补骨脂素和补骨脂酚含量的方法.方法 采用Epic C18(250 mim×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相:甲醇-水,梯度洗脱;流速:1.0 mL/min;柱温:30℃;检测波长250 nm.结果 该法测定补骨脂素、异补骨脂素和补骨脂酚分别在0.0563～0.3379、0.0523～0.3139、0.1280～0.7680 μg范围内线性关系良好,相关系数均为0.9999.平均加样回收率分别为100.66％(n=6)、RSD=1.77％,100.43％(n=6)、RSD=1.45％和99.41％(n=6)、RSD=1.63％.结论 本方法简便、准确、灵敏、重复性好,可作为补骨脂提取物中补骨脂素、异补骨脂素和补骨脂酚的含量控制方法.
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补骨脂酚拮抗AR转录活性抑制雄激素诱导的前列腺癌细胞LNCaP的增殖
[目的]研究补骨脂酚对雄激素受体(AR)的亲和性和转录活性的调控在雄激素依赖的前列腺癌细胞LNCaP中的作用.[方法]用AR竞争性结合试剂盒检测补骨脂酚结合AR的能力；用荧光素酶报告质粒法检测补骨脂酚对睾酮诱导的AR转录活性的影响；用实时定量PCR法检测补骨脂酚对LNCaP细胞中雄激素应答的靶基因——前列腺特异抗原(PSA)表达的影响；用MTT法检测补骨脂酚对睾酮诱导的LNCaP细胞增殖的影响.[结果]补骨脂酚体外结合AR的能力与AR拮抗剂氟他胺相当；睾酮诱导的AR转录活性可以被补骨脂酚阻断；补骨脂酚可以抑制睾酮对LNCaP细胞PSA表达和增殖的上调作用.[结论]补骨脂酚经由AR抑制雄激素依赖的LNCaP细胞的增殖和基因表达,提示:补骨脂酚可以作为潜在的AR拮抗剂,用于雄激素依赖的PCa药物的开发.
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一种制备补骨脂酚的简单、高效的方法
[目的]本研究旨在建立一种制备补骨脂酚的简单、高效的方法.[方法]补骨脂药材粉碎,经石油醚冷浸提取,得到补骨脂酚粗提物,再经硅胶柱色谱分离,石油醚洗脱,得到补骨脂酚粗品;再经硅胶柱色谱分离,石油醚-乙酸乙酯(12∶1)洗脱得到补骨脂酚纯品.[结果]通过核磁共振波谱仪鉴定为补骨脂酚;经UPLC检测,在246 nm下补骨脂酚纯度＞98％,补骨脂酚得率1.0％.[结论]该方法具有简单、快速、高效的特点,能够大量制备补骨脂酚.
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D-优设计响应面法结合UHPLC优选补骨脂药材炮制工艺
目的 采用D-优设计响应面法结合UHPLC技术优选补骨脂药材炮制工艺.方法 以补骨脂药材炮制工艺的关键参数闷润时间、炒制温度及加盐量为自变量,进行D-优设计;以UHPLC检测获得的补骨脂药材中9种主要指标成分补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素、补骨脂定、补骨脂乙素、补骨脂宁、补骨脂查耳酮和补骨脂酚炮制前后的质量分数变化为因变量,进行响应面分析;并结合单因素试验优化炒制时间,优选出补骨脂药材炮制工艺.结果 补骨脂药材的佳炮制工艺为在100 g补骨脂药材中加入2.10g盐,闷润12h,在80℃炒制30 min.结论 利用D-优设计响应面法结合UHPLC能够优选补骨脂药材炮制工艺参数,提高炮制工艺的稳定性和重复性,为提高补骨脂盐炙品的质量均一性和临床用药安全性提供技术支持.
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补骨脂炮制前后纳入复方二神丸的提取物HPLC指纹图谱的建立及多种模式识别分析
目的 建立补骨脂炮制前后分别纳入复方二神丸的石油醚提取物的HPLC指纹图谱,初步建立炮制前后二神丸提取物的化学模式识别方法,为其内在质量的控制提供参考.方法 采用HPLC法,以思普乐C18(250 mim× 4.6 mm,5μm)为色谱柱,0.01％甲酸水溶液和甲醇-乙腈(1∶1)为流动相进行梯度洗脱,检测波长210nm,柱温30℃,体积流量l mL/min,进样量10μL,分别建立炮制前后二神丸的提取物指纹图谱,并且采用指纹图谱相似度评价,结合聚类分析和主成分分析(PCA)进行化学模式识别研究.结果 分别建立了炮制前后二神丸提取物的HPLC指纹图谱,各色谱峰分离较好,标定了20批次提取物的28个共有峰,明确了其中6个成分(补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚、甲基丁香酚、甲基异丁香酚、去氢二异丁香酚);10批炮制前、后提取物分别与对照图谱比较,相似度均大于0.9;PCA和聚类分析可将20批提取物很好地分为炮制前和炮制后2类,且分类结果一致,同时PCA结果提示了一些可区别炮制前后二神丸的指纹图谱特征性的色谱峰.结论 该方法稳定、可靠,为炮制前后二神丸提取物的质量控制提供了方法依据,同时结合化学模式识别研究可有助于炮制前后二神丸提取物整体质量控制及质量评价.
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炮制时间对盐补骨脂中10种化学成分的影响
目的 建立同时测定补骨脂Psoralea corylifolia中补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂定、补骨脂二氢黄酮甲醚、异补骨脂二氢黄酮、补骨脂二氢黄酮、异补骨脂查耳酮、补骨脂宁、新补骨脂异黄酮和补骨脂酚10种化学成分的方法,并探讨炒制时间对盐补骨脂中10种成分的影响.方法 采用UPLC法,色谱条件:C18柱(50 mm×4.6 mm,1.8μm),流动相为乙腈-水,采用梯度洗脱,体积流量1 mL/min,检测波长250 nm,柱温30℃.结果 被测定的10种成分色谱峰在15min分析时间内均有良好的分离度,精密度RSD均小于3％;在室温条件下24h内稳定;各成分均有较宽的线性范围和良好的线性关系(r≥0.997 0);平均加样回收率96％～105％,RSD均小于3％.结论 本方法操作简便,快速,测定结果准确可靠,可用于补骨脂的质量控制.随炒制时间的延长,香豆素类成分呈现先降后升再降趋势,黄酮类、补骨脂酚及10种成分总量有降低趋势.
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补骨脂酚对人肾上腺皮质癌H295R细胞中睾酮和雌二醇分泌的影响
[目的]研究补骨脂酚对人肾上腺皮质细胞(H295R)睾酮及雌二醇分泌的影响.[方法]实验分为空白对照组及补骨脂酚不同浓度组,分别使用CCK-8法及酶联免疫吸附法(ELISA法)检测补骨脂酚对H295R细胞活力、睾酮和雌二醇分泌的影响;同时采用实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测补骨脂酚对睾酮和雌二醇合成酶CYP17A1和CYP19A1 mRNA表达的影响.[结果]补骨脂酚对睾酮合成酶CYP17A1 mRNA无显著影响,但能上调雌二醇合成酶CYP19A1 mRNA含量,具有减少睾酮分泌增加雌二醇分泌的作用.[结论]补骨脂酚促进H295R细胞中雌激素的产生.
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补骨脂酚对小鼠肝功能和胆汁酸转运体BSEP、NTCP的影响
[目的]观察补骨脂酚对小鼠肝功能和胆汁酸转运体胆盐输出泵(BSEP)、钠牛磺酸胆酸共转移蛋白(NTCP)的影响.[方法]小鼠连续14 d皮下注射50 mg/kg补骨脂酚和10 mg/kgα-雌二醇,分别在给药1、3、7、14d后处死部分小鼠取材,检测血清生化,剖取肝脏称质量并进行肝脏病理组织学检查,取新鲜肝脏用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测BSEP、NTCP的蛋白表达.[结果]补骨脂酚和α-雌二醇对小鼠体质量没有明显影响.α-雌二醇皮下注射14d会使小鼠血清谷丙转氨酶(ALP)升高、肝脏肿大、肝系数升高,而补骨脂酚无此作用,但给药期间补骨脂酚可导致血清ALP一过性降低,14d时恢复正常.补骨脂酚对肝脏BSEP基本没有影响,而会导致NTCP逐渐升高,给药14d时NTCP显著高于溶剂组.给药14 d,补骨脂酚组小鼠肝脏无病变,而α-雌二醇组小鼠肝脏存在肝细胞变性.[结论]50 mg/kg补骨脂酚给药14d未见肝脏毒性,而10 mg/kgα-雌二醇肝毒性明显.
关键词： 补骨脂酚 小鼠 胆盐输出泵 钠牛磺酸胆酸共转移蛋白 -
酚-黄复方对痤疮致病菌的体外抗菌作用研究
[目的]通过体外抑菌实验,考察补骨脂酚与黄芩苷组合用药的体外抗痤疮菌活性.[方法]采用菌落计数法,以不同浓度补骨脂酚及加入黄芩苷后对表皮葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌生长的抑菌率为指标考察其抑菌效果.[结果]当补骨脂酚浓度达到2 560 mg/L时对表皮葡萄球菌及痤疮丙酸杆菌的抑菌率分别为100.0％、61.1％.在补骨脂酚溶液中加入黄芩苷后两药浓度分别为2 560 mg/L和800 mg/L,对两种痤疮菌的抑菌率均为100.0％,在此浓度下两药合用对痤疮丙酸杆菌的抑制作用更为明显,抑菌率是单用补骨脂酚的1.64倍.[结论]酚-黄复方对痤疮菌的抑菌率增加显著,表明酚-黄复方共同发挥抗痤疮菌作用,揭示酚-黄合用的必要性和合理性.
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D101大孔吸附树脂法富集补骨脂中补骨脂酚的研究
[目的]开发可工业化生产的补骨脂中补骨脂酚的富集方法.[方法]实验采用大孔吸附树脂技术有针对性地富集补骨脂提取液中的补骨脂酚,并尽可能去除补骨脂素和异补骨脂素等香豆素类化合物.[结果]经过大孔吸附树脂处理,可以有效去除补骨脂素和异补骨脂素,补骨脂酚含量达到45.6％.[结论]大孔吸附树脂方法用于补骨脂中补骨脂酚的富集,可以避免现有技术使用大量有机溶剂的缺点,该方法有效成分转移率高,成本低.
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补骨脂酚对口腔鳞状细胞癌增殖、迁移和凋亡的影响及其机制
目的 探究SIRT1是否介导补骨脂酚对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)增殖、迁移及凋亡的影响. 方法 将体外培养的OSCC细胞系分为4组:正常(control)组,补骨脂酚处理(BAK)组,补骨脂酚处理+SIRT1抑制剂(BAK+ EX527)组,SIRT1抑制剂(EX527)组.CCK-8法检测EX527和不同剂量BAK(1,2,5,10 μmol/L)对OSCC细胞活力的影响,TUNEL染色检测OSCC细胞凋亡率,Western blot检测蛋白SIRT1、Ac-FOXO1、Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达水平,划痕实验检测OSCC细胞迁移能力. 结果 与control组相比,补骨脂酚呈剂量依赖性地抑制OSCC细胞的细胞活力,而补骨脂酚剂量为5 μmol/L时效果佳,因此采用该剂量进行下一步机制研究.与control组相比,BAK组SIRT1、Bax和Caspase 3的表达量、OSCC细胞凋亡率和划痕实验细胞间距明显增加,而Ac-FOXO1、Bcl-2的表达量明显减少.EX527阻断SIRT1信号通路可明显减弱BAK的上述作用(均P＜0.05). 结论补骨脂酚可通过激活SIRT1信号通路,促进OSCC细胞凋亡,抑制OSCC细胞增殖和迁移.
