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D-优设计响应面法结合UHPLC优选补骨脂药材炮制工艺
目的 采用D-优设计响应面法结合UHPLC技术优选补骨脂药材炮制工艺.方法 以补骨脂药材炮制工艺的关键参数闷润时间、炒制温度及加盐量为自变量,进行D-优设计;以UHPLC检测获得的补骨脂药材中9种主要指标成分补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素、补骨脂定、补骨脂乙素、补骨脂宁、补骨脂查耳酮和补骨脂酚炮制前后的质量分数变化为因变量,进行响应面分析;并结合单因素试验优化炒制时间,优选出补骨脂药材炮制工艺.结果 补骨脂药材的佳炮制工艺为在100 g补骨脂药材中加入2.10g盐,闷润12h,在80℃炒制30 min.结论 利用D-优设计响应面法结合UHPLC能够优选补骨脂药材炮制工艺参数,提高炮制工艺的稳定性和重复性,为提高补骨脂盐炙品的质量均一性和临床用药安全性提供技术支持.
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补骨脂乙素对舌鳞状细胞癌 Tca8113细胞增殖的抑制作用和凋亡诱导作用及其机制
目的：观察补骨脂乙素（IBC）对人舌鳞状细胞癌 Tca8113细胞增殖和凋亡的影响，并阐明其可能的作用机制。方法：将体外培养的 Tca8113细胞分为对照组（0μmol·L－1）和不同浓度 IBC 组（10、20、40及80μmol·L－1）。通过 MTT 法检测细胞增殖抑制率，流式细胞术检测细胞凋亡率，Western blotting 法检测各组细胞中 Akt、p-Akt、Erk、p-Erk、Bax、Bcl-2和 Caspase-3蛋白的表达水平。结果：MTT 法检测，随着 IBC 浓度的增加和作用时间的延长，Tca8113细胞的增殖抑制率逐渐增加，12、24和48 h 半数抑制浓度（IC50）分别为（285.13±8.97）、（132.40±7.76）和（58.56±5.93）μmol·L－1，不同时间点 IC50比较差异有统计学意义（P ＜0.05）。流式细胞术检测，与对照组（1.69％±0.65％）比较，作用48 h 后20和40μmol·L－1 IBC 组细胞凋亡率（分别为8.21％±2.32％和22.45％±1.18％）明显升高（P ＜0.05）。Western blotting 法检测，与对照组比较，作用48 h 后20和40μmol·L－1 IBC 组细胞中 Bcl-2、p-Akt 和 p-Erk 表达水平明显降低（P ＜0.05）， Bax 表达水平明显升高（P ＜0.05）；Akt 和 Erk 蛋白表达水平无明显变化（P ＞0.05）；与对照组比较，作用48 h 后40μmol·L－1 IBC 组 Tca8113细胞中 Caspase-3蛋白表达水平明显升高（P ＜0.05）。结论：IBC 可抑制Tca8113细胞的增殖并诱导细胞凋亡，Akt 和 Erk 通路可能是其诱导肿瘤细胞凋亡的途径。
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补骨脂乙素诱导伊马替尼敏感和耐药的慢性粒细胞白血病细胞凋亡
目的 探讨补骨脂乙素对伊马替尼敏感和耐药慢性粒细胞白血病细胞的影响.方法 体外培养人慢性粒细胞白血病伊马替尼敏感细胞株K562s和伊马替尼耐药细胞株K562r,以不同浓度(0、5、10、20、40 μmol/L)补骨脂乙素(IBG)处理K562s和K562r细胞不同时间(0、24、48、72 h),锥虫蓝拒染法检测IBC对K562s和K562r细胞活性的影响,Annexin V/PI、Rh123/PI双染后流式细胞术检测细胞凋亡及线粒体跨膜电位的变化,Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达.结果 锥虫蓝拒染法检测结果显示:IBC对K562s和K562r均有增殖抑制作用,且呈时间-剂量依赖性.流式细胞术检测结果表明,经IBC处理的K562s和K562r出现明显时间-剂量依赖性的凋亡及线粒体膜电位的降低.Western blotting检测结果显示:经IBC处理的K562s和K562r细胞发生caspase-3活化和PARP-1的剪切.结论 IBC能够诱导K562s和K562r细胞凋亡,线粒体跨膜电位下降可能参与了这一过程.
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补骨脂乙素对 Tca8113细胞迁移及侵袭的抑制作用及其机制
目的：探究补骨脂乙素（Isobavachalcone，IBC）对人舌鳞状细胞癌 Tca8113细胞迁移和侵袭的抑制作用及其可能的作用机制。方法将不同浓度的 IBC 作用于体外培养的Tca8113细胞，通过 MTT 法检测细胞增殖抑制率；划痕实验和 Transwell 实验分别检测细胞迁移和侵袭能力；Western blot 法检测 Akt、p-Akt、MMP-2和 MMP-9蛋白的表达情况。结果IBC 以浓度和时间依赖的方式有效抑制 Tca8113细胞增殖。IBC 降低 Tca8113细胞迁移及侵袭能力。Western blot 法显示 IBC 能够以浓度相关性下调 p-Akt、MMP-2和MMP-9蛋白的表达，而 Akt 蛋白水平不受 IBC 处理剂量的影响。结论IBC 可抑制 Tca8113细胞的增殖，迁移和侵袭，其作用与下调 MMP-2和 MMP-9蛋白及抑制其上游 Akt 的磷酸化有关。
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补骨脂乙素对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制
目的 观察补骨脂乙素(IBC)对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 采用CCK-8法检测不同浓度IBC对CNE-2Z细胞活性的抑制作用;EdU掺入法检测细胞增殖能力的改变;平板克隆形成实验检测对 CNE-2Z细胞克隆形成能力的影响;流式细胞术AnnexinV-FITC/ PI双染法检测细胞凋亡情况;Western blot检测IBC作用后磷酸化核糖体S6激酶2(p-RSK2)、核糖体S6激酶2(RSK2)、c-Jun、B淋巴细胞瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的改变.结果 IBC对CNE-2Z细胞生长、增殖和克隆形成能力有明显的抑制作用,呈剂量依赖关系;与对照组相比,20、40 μmol/L IBC处理组细胞的凋亡率显著增高;IBC可引起CNE-2Z细胞中p-RSK2、c-Jun和Bcl-2表达明显减少,而Bax表达增高,与对照组相比,20、40 μmol/L IBC处理组Bcl-2/Bax比值分别下调47.24％和 69. 50％.结论 IBC可明显抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞的增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与抑制RSK2活性,进而调控 c-Jun和Bcl-2/Bax的表达有关.
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HPLC法同时测定补乌酊中4种补骨脂类成分的含量
目的:建立同时测定补乌酊中4种补骨脂类成分含量的方法.方法:采用高效液相色谱法.色谱柱为Dikma Diamonsil C18,流动相为乙腈-0.2%冰醋酸(梯度洗脱),流速为1 ml/min,检测波长为246 nm,柱温为30℃,进样量为15μl.结果:异补骨脂素、补骨脂甲素、补骨脂定、补骨脂乙素的检测质量浓度线性范围分别为13.00~208、26.00~416、24.50~392、37.88~606 μg/ml (r≥0.999 6);精密度、稳定性、重复性试验的RSD<2.00%;加样回收率分别为95.22%~97.23%、100.24%~104.64%、102.28%~104.39%、97.68%~100.17%,RSD分别为0.87%、1.62%、1.47%、0.97%(n=6).结论:该方法操作简便、重复性好,可作为控制补乌酊质量的方法.
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补骨脂乙素诱导HepG2细胞凋亡及对Bcl-2家族表达的影响
目的:观察补骨脂乙素对人肝癌细胞HepG2凋亡及其相关蛋白的影响.方法:用不同浓度补骨脂乙素(3、4、5、6和7mg/ml)处理HepG2细胞24h后,MTT法检测药物对细胞增殖的影响,并用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western印迹法检测凋亡相关蛋白的表达.结果:补骨脂乙素4mg/ml即能抑制HepG2细胞的增殖并诱导其凋亡,7mg/ml时凋亡率可达94.57％,在浓度4～7 mg/ml之间有良好的量效关系.补骨脂乙素浓度为7mg/ml时促凋亡蛋白Bax、Bid表达明显增加、抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少.结论:补骨脂乙素4mg/ml能诱导HepG2细胞凋亡,可能与其影响Bcl-2家族蛋白的表达有关.
