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白藜芦醇通过Sirtuins 1通路促进自噬减轻大鼠脑缺血/再灌注损伤
目的 观察白藜芦醇(Res)在大鼠局灶性脑缺血/再灌注(I/R)损伤中脑保护作用与自噬的关系.方法 随机将大鼠分成假手术组(S组)、脑缺血/再灌注模型组(I/R组)、低和高剂量(15和40 mg/kg) Res处理组(R1和R2组),其中将R2组另设2个亚组:R2+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组和R2+ Sirt1抑制剂Sirtinol组.线栓法构建大鼠I/R模型.缺血2h,再灌注24 h后,用尼氏染色观察皮质区的组织学形态;用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测脑组织的梗死体积;用real-time QPCR和Western blot检测脑组织中Sirt1和LC3的mRNA和蛋白表达.结果 与S组相比,I/R组大鼠可见明显的脑梗死灶,显微镜下见病理损伤改变,自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ、Sirt1表达均有上升.Res预处理后,能明显减轻I/R大鼠皮质区的病理损伤,减少脑梗死体积(P＜0.01),显著增加I/R大鼠脑组织中LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ和Sirt1的表达(P＜0.01);而Sirt1抑制剂及3-MA能削弱Res的作用.结论 Res减轻大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的脑保护作用可能与Res通过提高Sirt1的表达进而促进自噬来完成的.
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SIRT1信号通路介导紫檀芪抗内皮细胞抗缺血再灌注损伤的机制研究
目的 研究不同浓度紫檀芪(PTE)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)缺血再灌注损伤的保护作用及其可能的机制.方法 HUVECs经1μM/L和2μM/L的PTE处理后,接受模拟缺氧复氧(SIR)损伤(缺氧70 min,复氧4h),采用CCK-8法检测细胞活力,使用酶活性测定法检测细胞培养液中丙二醛(MDA)的释放量和超氧化物歧化酶(SOD)的水平,使用western blot法检测SIRT1、Ac-FOX01、Bax和Bcl-2的表达情况,使用SIRT1阻断剂EX527观察SIRT信号通路在这一过程中发挥的作用.结果 SIR处理可以抑制HUVECs活性,抑制SIRT1表达,上调Ac-FOX01表达,下调Bcl-2/Bax比例(与Control组比较,P ＜0.05).细胞培养基中MDA含量上升,SOD水平下降(与Control组比较,P＜0.05).1μM/L和2μM/L的PTE处理均可以发挥细胞保护作用,提高细胞活力,降低了MDA水平,提高了SOD水平(与SIR组比较,P＜0.05).此外,PTE处理上调了SIRT1表达,抑制了Ac-FOX01表达,并且提高Bcl-2/Bax比例(与SIR组比较,P＜0.05).EX527处理后细胞活力下降,凋亡增加(与SIR+PTE组比较,P＜0.05).结论 PTE可以保护HUVECs抵抗缺血再灌注损伤,其机制是激活SIRT1/FOXO1保护性信号通路,抑制HUVECs凋亡.
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沉默信息调控因子1通路介导补骨脂酚抑制脂多糖诱导的乳鼠心肌细胞炎症反应及凋亡
目的 研究补骨脂酚(BAK)对脂多糖(LPS)诱导的SD乳鼠心肌细胞炎症反应模型的作用及其分子机制.方法 SD乳鼠心肌细胞经1 μM、5 μM或10 μM的BAK孵育4 h后,再用LPS(100 ng/ml)孵育12 h,造成炎性心肌细胞损伤.用CCK8法检测心肌细胞活力,TUNEL法检测心肌细胞凋亡水平.ELISA法检测培养基中炎性因子TNF-α和IL-1水平,Western-blot法检测SIRT1、Bax和Bcl-2的表达水平.使用沉默信息调控因子1(SIRT1)阻断剂EX527观察SIRT1信号通路在这一过程中的作用.结果 LPS处理可以诱导心肌细胞炎性因子肿瘤坏死因子-α和白介素-1释放(P<0.05 vs control组),降低心肌细胞活力并促进其凋亡.蛋白水平抑制SIRT1表达,Bcl2下调,Bax上调(P<0.05 vs control组).1 μM、5 μM和10 μM的BAK预孵育可浓度依赖性地抑制炎性因子释放、改善心肌细胞活力、上调SIRT1表达,提高Bcl2并降低Bax表达,抑制心肌细胞凋亡.SIRT1阻断剂EX527可显著抑制上述抗炎及抗凋亡作用.结论 BAK通过激活SIRT1信号通路,减轻LPS诱导的大鼠心肌细胞炎症反应.
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白藜芦醇诱导细胞自噬在神经退行性疾病进展中的作用
细胞自噬是清除自身异常蛋白和受损细胞器的过程,在调节细胞内环境稳态、细胞生长、发育和衰老以及疾病发生发展中起重要作用.自噬功能障碍与神经退行性疾病如阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病等密切相关.这些疾病的大脑神经元内大多存在特定的病理性蛋白的异常聚集.白藜芦醇对自噬具有调节作用,能促进自噬流的发生,有效清除易形成聚集体的病理性蛋白,对神经退行性疾病具有一定的防治潜力.本文综述了白藜芦醇调节细胞自噬方面的功能及在神经退行性疾病防治的应用.
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SIRT1在帕金森病中的研究进展
沉默信息调控因子1(silence information regulator 1, SIRT1)是Sirtuins家族中的一员,在烟酰胺腺苷二核苷酸(NAD+)存在的情况下具有组蛋白脱乙酰化酶的作用.帕金森病(Parkinson''s disease, PD)是一种进行性中枢神经系统退行性疾病,因脑黑质多巴胺能(dopamine, DA)神经元进行性减少,对肌肉运动的抑制减弱,出现不自主震颤、肌肉强直收缩和姿势反射障碍等症状[1-2].流行病学调查显示,美国约有60万PD患者,且发病率呈逐渐上升趋势[3-4].近年研究发现SIRT1具有改善PD的作用[5-6].本文通过对SIRT1与PD相关研究的回顾,探讨SIRT1相关药物在PD治疗中的可行性.
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褪黑素通过激活SIRT1信号通路发挥抗肺缺血再灌注损伤作用
目的:研究褪黑素(Melatonin,Mel)在肺缺血再灌注损伤中的作用,明确沉默信息调控因子1(Silent information regulator 1,SIRT1)信号通路在这一过程中的关键作用.方法:建立大鼠肺缺血再灌注损伤(IR)模型,实验分为Control、IR、IR+10 mg/Kg Mel、IR+20 mg/Kg Mel、IR+30 mg/Kg Mel五组,通过检测支气管肺泡灌洗液中白细胞数目、蛋白含量和肺组织中丙二醛(MDA)水平、干湿重比等指标明确肺组织损伤程度,Western blot检测SIRTl通路相关分子及凋亡相关蛋白的表达水平,研究其作用机制.结果:与IR组相比,Me1处理显著降低了支气管肺泡灌洗液中白细胞数量、蛋白含量和肺组织MDA含量、干湿重比(P＜0.05);Mel还显著上调了SIRT1表达,降低了Ac-FOXO1表达(P＜0.05);此外,Mel显著提高了抗凋亡蛋白Bcl-2表达,下调了凋亡蛋白Bax表达(P＜0.05).结论:Mel具有明确的抗肺缺血再灌注损伤的作用,SIRT1信号通路在该过程中可能扮演重要角色.
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白藜芦醇对梗阻性黄疸大鼠肝损害的保护机制
目的 探讨白藜芦醇(Res)对大鼠梗阻性黄疸肝损害的保护作用及机制.方法 将雄性Wistar大鼠60只随机分为3组,A组:假手术组,B组:胆道结扎组,C组:胆道结扎同时Res干预组.取血清检测总胆红素(TB)、直接胆红素(DB)、谷丙转氨酶(A LT),Western blot检测肝组织沉默信息调控因子1(SIRT1)、核因子-κB (NF-κBp65)蛋白表达,实时定量聚合酶链反应(Real-timePCR)测肝组织SIRT1 mRNA及过氧化体增殖剂激活受体α(PPARα) mRNA,免疫组织化学法测肝组织PPARα蛋白表达,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)法测肝细胞凋亡.结果 B组与A组比较:血清ALT升高、SIRT1 mRNA及蛋白和PPARα mRNA及蛋白降低NF-κBp65蛋白升高、细胞凋亡率升高(P＜0.05);C组与B组比较:血清ALT降低、SIRT1 mRNA及蛋白和PPARα mRNA及蛋白增加、NF-κBp65蛋白降低、细胞凋亡率降低(P＜0.05);A、B、C组ALT、SIRT1 mRNA及蛋白、PPARαmRNA及蛋白、NF-κBp65、凋亡率指标为:A组(42.54±4.36) IU/L、1.000±0.000、0.320±0.007、1.000±0.000、73 134.33±6 775.63、0.14±0.02、(0.28±0.08)％;B组:(240.53 ±12.04) IU/L、0.430±0.030、0.190±0.005、0.390 ±0.028、38 417.33±3 039.34、0.54±0.05、(12.78±1.50)％;C组:(157.13 ±8.01) IU/L、0.740±0.027、0.240±0.012、0.630±0.031、55 173.00±4 222.83、0.41 ±0.04、(6.15±1.06)％.结论 Res能减轻梗阻性黄疸肝损害,可能通过激活SIRT1抑制NF-κB发挥抗炎、抗凋亡作用,促进PPARα的表达而发挥抗氧化作用.
关键词： 白藜芦醇 阻塞性黄疸 沉默信息调控因子1 过氧化体增殖剂激活受体α 核因子-κB -
α-倒捻子素抑制阿霉素诱导的小鼠局灶节段性肾小球硬化
目的:观察cc-倒捻子素(alpha-mangostin,α-MG)治疗对阿霉素诱导的局灶节段性肾小球硬化(focal segmental glomurular sclerosis,FSGS)的肾脏保护作用.方法:BALB/c小鼠尾静脉注射阿霉素(10 mg/kg)诱导阿霉素肾病(adriamycin nephropathy,AN)模型后分为两组:1)AN+生理盐水组,用生理盐水灌胃;2)AN+α-MG组,用α-MG (12.5 mg/kg)灌胃.灌胃每日1次,从阿霉素注射当日开始.另取10只小鼠作为对照组.6周后处死小鼠,在光学显微镜下观察肾组织病理学改变;检测血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、血胆固醇等肾功能相关生化指标水平;检测肾组织中超氧阴离子,丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)水平以及超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性;检测血清中IL-1β,IL-18,IL-10,脂联素水平;用免疫组织化学、RT-PCR和Western印迹检测肾组织中TGF-β1,Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ,ColⅠ),α-SMA,沉默信息调控因子1(silent information regulator 1,Sirt1),核苷酸结合结构域样受体蛋白3(NLRP3)水平.结果:α-MG治疗可降低AN小鼠血肌酐、蛋白尿、尿蛋白/尿肌酐、血胆固醇,增加肌酐清除率、血浆白蛋白(P＜0.0S);缓解肾小球硬化和间质纤维化;下调纤维化指标Col Ⅰ和α-SMA的表达(P＜0.05);减少肾组织超氧阴离子的产生,降低MDA和GSH水平以及增加CAT和SOD活性(P＜0.05);降低血清炎性因子IL-1β和IL-18水平,升高抗炎因子IL-10和脂联素水平(P＜0.05);促进肾组织中Sirt1表达,抑制NLRP3的表达(P＜0.05).结论:α-MG治疗能够改善阿霉素诱导的FSGS小鼠肾功能,延缓肾小球硬化和间质纤维化进程.α-MG通过促进肾脏Sirt1表达和抑制NLRP3表达而发挥抗炎和抗氧化作用.
