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二神丸中药物炮制前后对肠道菌群和UCP2基因表达的影响
目的:观察二神丸中补骨脂、肉豆蔻炮制前后对脾肾阳虚泄泻模型大鼠肠道菌群和肾脏线粒体解偶联蛋白2(UCP2)基因表达的影响,探讨二神丸中药物炮制增效的机制.方法:将24只SD雄性大鼠随机等分为正常组、模型组、二神丸生品组(补骨脂生品+肉豆蔻生品)和二神丸炮制品组(盐补骨脂+煨肉豆蔻),运用复合造模方法复制大鼠脾肾阳虚泄泻模型,后二组灌胃给药量3.5 g·kg-1,正常组和模型组给予同等体积生理盐水.采用实时荧光定量聚合酶链式反应技术检测各组肠道菌群,研究二神丸对肠道菌群的影响;使用免疫组化染色SP法测定各组大鼠肾脏组织UCP2基因表达.结果:脾肾阳虚泄泻大鼠肠道菌群和UCP2含量与造模前相比发生明显变化,其中长双歧杆菌、乳酸杆菌菌群异常低下,大肠埃希菌、粪肠球菌含量显著增加,肾脏组织UCP2含量明显升高.给予二神丸后,对肠道菌群失调和UCP2异常均有明显的调节和改善作用,尤以炮制组(盐补骨脂+煨肉豆蔻)效果为佳.结论:由盐炙补骨脂和麸煨肉豆蔻组方的二神丸促进脾肾阳虚泄泻模型有益菌的增殖、抑制有害菌以及下调肾脏组织UCP2效果更加明显,提示其增效可能与调节肠道菌群及机体基础代谢率相关.
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“二神丸”中补骨脂、肉豆蔻炮制前后对脾肾阳虚泄泻大鼠血清代谢组学的影响
运用代谢组学的方法,研究“二神丸”中补骨脂、肉豆蔻炮制前后干预脾肾阳虚泄泻大鼠血清内源性代谢物的变化,筛选出与脾肾阳虚泄泻相关的差异代谢物,探讨与脾肾阳虚泄泻相关的代谢模式及“二神丸”中补骨脂、肉豆蔻炮制增效机制.检测分析各组SOD,MDA,应用GC-MS检测不同时段的大鼠血液代谢图谱,采用主成分分析(PCA)方法和偏小二乘法判别分析方法(PLS-DA)分析,通过变量重要性投影(VIP)和t检验筛选潜在生物标志物.结果显示,“二神丸”能使SOD活性升高,MDA含量降低.确定了10个与脾肾阳虚泄泻相关的差异代谢物.与模型组比较,“二神丸”干预后代谢物水平不同程度回调,且“二神丸”Ⅳ组(盐炙补骨脂+麸煨肉豆蔻)效果好,推测“二神丸”中补骨脂、肉豆蔻炮制增效可能从抑制过氧化、改善糖脂、氨基酸及能量代谢等多层面协同发挥作用,具有多靶点性.
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二神丸不同提取部位温脾止泻的谱效关系研究
目的 阐明二神丸中药物炮制后(盐炙补骨脂+麸煨肉豆蔻)其不同提取部位的指纹图谱特征峰所代表的化学成分及其对温脾止泻药效贡献的大小,表征二神丸的药效物质基础.方法 采用HPLC法建立二神丸不同提取部位的指纹图谱,以不同提取部位对番泻叶所致急性腹泻小鼠腹泻指数的影响研究其止泻作用,采用灰关联分析法建立其谱效关系.结果 建立了二神丸不同提取部位的指纹图谱,相似度均大于0.90;二神丸温脾止泻的药效是多种成分共同作用的结果,各特征峰所代表的化学成分对其止泻药效贡献的大小顺序(按特征峰编号)为6号＞18号＞7号＞20号＞14号＞21号＞1号＞25号＞24号＞23号＞4号＞3号＞8号＞11号.结论 所构建的二神丸不同提取部位HPLC指纹图谱方法简单,重复性好,可为二神丸的质量评价提供参考;不同部位指纹图谱与其止泻药效之间有一定的对应关系,为进一步研究二神丸的炮制机制奠定了基础.
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补骨脂炮制前后纳入复方二神丸的提取物HPLC指纹图谱的建立及多种模式识别分析
目的 建立补骨脂炮制前后分别纳入复方二神丸的石油醚提取物的HPLC指纹图谱,初步建立炮制前后二神丸提取物的化学模式识别方法,为其内在质量的控制提供参考.方法 采用HPLC法,以思普乐C18(250 mim× 4.6 mm,5μm)为色谱柱,0.01％甲酸水溶液和甲醇-乙腈(1∶1)为流动相进行梯度洗脱,检测波长210nm,柱温30℃,体积流量l mL/min,进样量10μL,分别建立炮制前后二神丸的提取物指纹图谱,并且采用指纹图谱相似度评价,结合聚类分析和主成分分析(PCA)进行化学模式识别研究.结果 分别建立了炮制前后二神丸提取物的HPLC指纹图谱,各色谱峰分离较好,标定了20批次提取物的28个共有峰,明确了其中6个成分(补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚、甲基丁香酚、甲基异丁香酚、去氢二异丁香酚);10批炮制前、后提取物分别与对照图谱比较,相似度均大于0.9;PCA和聚类分析可将20批提取物很好地分为炮制前和炮制后2类,且分类结果一致,同时PCA结果提示了一些可区别炮制前后二神丸的指纹图谱特征性的色谱峰.结论 该方法稳定、可靠,为炮制前后二神丸提取物的质量控制提供了方法依据,同时结合化学模式识别研究可有助于炮制前后二神丸提取物整体质量控制及质量评价.
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二神丸与四神丸对脾虚泄泻作用的配伍比较研究
目的:探讨二神丸、二神丸去姜枣和四神丸对脾虚泄泻作用的组方差异性.方法:建立大黄致脾虚泄泻模型,设立空白组、模型组、参苓白术散组、二神丸去姜枣组、二神丸组、四神丸组和四神汤组共七组.观察各组对血浆胃动素、胃泌素含量及小肠推进的影响.结果:各给药组的胃动素、胃泌素含量均较模型组升高,并能抑制正常和脾虚小鼠的炭末推进率.结论:二神丸、二神丸去姜枣和四神丸通过调节Gas、Mtl起作用,其作用效果之差异可能与以下因素有关:(1)四神汤升高胃动素含量和抑制小肠推进运动效果佳,与五味子散和二神丸具有协同作用有关.(2)在升高胃动素含量和抑制小肠推进作用两方面,四神汤去掉五味子散后,补骨脂、肉豆蔻和生姜、大枣未体现协同作用.(3)在升高胃泌素含量方面,补骨脂、肉豆蔻是主要因素,生姜、大枣是非主要因素.(4)补骨脂和肉豆蔻是抑制小肠推进运动的主要因素.
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四神丸治疗五更泻
四神丸由肉豆蔻、补骨脂、五味子、吴茱萸浸炒等组成,温肾暖脾,涩肠止泻,是治疗五更泻经典方剂.历史悠久,早以“华佗治肾泄名方”出现,经历代医家演变,认为由二神丸合五味子散而成,从温肾助阳、宣通气血、寒热并用几方面起作用,目前尚处在个人经验总结阶段,缺乏统一标准,未来应深入研究作用机制,为进一步研究奠定理论基础.
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二神丸与四神丸对脾虚泄泻大鼠分泌型IgA白介素-2含量影响的配伍比较研究
目的:探讨二神丸、二神丸去姜枣和四神丸对脾虚泄泻作用机制的配伍组方差异性.方法:建立大黄致脾虚泄泻模型,设立空白组、模型组、参苓白术散、二神丸去姜枣、二神丸、四神丸和四神汤共7组.放免法检测大鼠十二指肠黏膜分泌型IgA(SIgA)、白介素-2(IL-2)的含量.结果:各给药组的SIgA、IL-2含量均较模型组升高.结论:二神丸、二神丸去姜枣、四神丸(汤)均能通过升高SIgA分泌量和IL-2含量,共同恢复细胞免疫和体液免疫功能而起作用,在升高脾虚泄泻大鼠白介素-2含量方面,四神汤优,其次为二神丸组,二神丸去姜枣差;在升高SIgA含量方面,二神丸优,二神丸去姜枣差.其作用效果之差异性可能与以下因素有关:(1)在升高IL-2含量方面,二神丸与五味子散配伍后体现了佳的协同作用;内豆蔻、补骨脂与生姜、大枣配伍后亦体现了较好的协同作用;但单独应用补骨脂、肉豆蔻协同作用并不显著.(2)在升高SIgA含量方面,肉豆蔻、补骨脂与生姜、大枣具有协同作用.(3)在提高机体免疫力,调节全身免疫机能方面,生姜和大枣有重要的配伍作用.
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补骨脂和肉豆蔻炮制对脾肾阳虚泄泻大鼠能量代谢的影响
目的 从能量代谢角度比较二神丸中补骨脂、肉豆蔻炮制前后对脾肾阳虚泄泻大鼠的调控效应.方法 采用腺嘌呤灌胃,饮食失节,服冰番泻叶水浸剂方法复制脾肾阳虚泄泻大鼠模型,给药二神丸进行治疗性实验,酶标仪法检测大鼠肝组织中Na+-K+-ATPase,Ca2-Mg2-ATPase以及乳酸脱氢酶(LDH)活性变化;比色法检测肝组织中琥珀酸脱氢酶(SDH)活性变化.结果 与正常对照组比较,模型组肝组织Na+-K+-ATPase、Ca2-Mg2+-ATPase及SDH活性显著降低(P＜0.01);LDH活性显著升高(P＜0.01).与模型组相比较,二神丸Ⅳ组(盐炙补骨脂+麸煨肉豆蔻)Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase及SDH活性明显升高,LDH活性明显降低,均具有极显著性差异(P＜0.01);与二神丸Ⅰ组(补骨脂生品+肉豆蔻生品)相比较,二神丸Ⅳ组Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2-ATPase及SDH活性均高于二神丸Ⅰ组,差异有统计学意义(P＜0.05);LDH低于二神丸Ⅰ组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 经盐炙补骨脂和麸煨肉豆蔻组方的二神丸改善脾肾阳虚泄泻模型大鼠能量代谢效果更加明显,提示其增效可能与促进能量代谢相关酶活性有关.
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GC-MS分析炮制对二神丸中挥发性成分的影响
目的 GC-MS分析二神丸中补骨脂和肉豆蔻的炮制对其4种组合挥发性成分的影响.方法 采用水蒸气蒸馏法提取挥发油,气相色谱条件为毛细管色谱柱(HP-5 mS 5％ Phenyl methyl siloxane,30 mm ×0.25 mm ×0.25 μm),进样口温度为250℃,程序升温,载气为氦气;质谱条件为电子轰击电离(能量为70 eV),四级杆温度为150℃,离子源温度为230℃.结果 4种组合分别检测出77、109、89和70种化合物,鉴定出了其中78种化合物的结构,占其挥发油总量的97.20％～98.87％.结论 组合Ⅳ(盐补骨脂+煨肉豆蔻)中补骨脂酚和黄樟醚的量低,挥发性成分的总量减少,说明补骨脂和肉豆蔻炮制后入药可降低毒性.
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中药复方二神丸主要化学成分的高效液相-飞行时间质谱分析
目的 通过高效液相-飞行时间质谱(HPLC-TOF/MS)联用技术,对中药复方二神丸中的主要化学成分进行有效的鉴定.方法 色谱分离采用资生堂Capcell Pak C18反相柱(3.0 mm× 100 mm,3μm),流动相组成分别为0.1％甲酸水溶液和乙腈,梯度洗脱,流速为0.6 ml/min；质谱定性采用飞行时间质谱,正离子模式扫描.结果 在优化的液质联用条件下,通过飞行时间质谱鉴定出二神丸中21个成分,其中15种成分来自补骨脂,6种成分来自肉豆蔻.结论 通过RRLC-TOF/MS联用技术,为鉴定二神丸中的化学成分建立起了一种快速、高效的分析方法.
关键词： 二神丸 高效液相-飞行时阳J质谱 化学成分 -
复方二神丸中两味药物炮制前后的高效液相指纹图谱比较研究
目的 建立复方二神丸HPLC指纹图谱,并对该复方的两味组成药物补骨脂和肉豆蔻分别经过盐炙及煨炙后的复方二神丸HPLC指纹图谱进行比较研究,探讨经过炮制后的药物组成的复方二神丸在化学成分上的变化.方法 采用HPLC色谱法;色谱柱Diamonsil C18柱色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-水梯度洗脱;检测波长254 nm;柱温30℃;流速1.0 ml/min.以指纹图谱软件计算相似度,对共有特征峰进行图谱比较.结果 补骨脂、肉豆蔻生品同炮制品组方的二神丸HPLC指纹图谱中都标记出32个共有峰,未发现有成分的新增和消失,有4种成分在经过炮制药物的组方中含量明显降低,9种成分含量明显增高.结论 该方法简便、快捷、重复性好,利用HPLC指纹图谱分析方法,可较全面的反映补骨脂、肉豆蔻炮制前后组方二神丸化学成分的差异.
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曹志群治疗久泻经验
介绍曹志群教授治疗久泻的经验.曹教授认为临床所见久泻多为脾虚、肾虚、肝郁三因交错,针对其非单一的成因,治疗上也应各有兼顾:因久泻以脾虚为主,基本方用七味白术散,兼有肾虚则合入二神丸,若伴肝郁则可加用痛泻要方、四逆散.
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基于偏小二乘法判别分析(PLS-DA)的补骨脂炮制前、后组成二神丸提取物的指纹图谱研究和指标成分的定量分析
目的: 通过对已建立的二神丸提取物指纹图谱进行化学计量学分析,并结合含量测定,为补骨脂炮制前、后组成二神丸提取物的鉴别和有效质量控制提供参考.方法: 运用偏小二乘法判别分析(PLS-DA) 对已建立的二神丸提取物指纹图谱建立PLS-DA 模型,并利用高效液相色谱(HPLC) 对指标成分进行定性鉴定和定量测定.结果: 建立的PLS-DA 模型可靠,预测能力良好.统计结果显示补骨脂炮制前、后分别组成二神丸的石油醚提取物可明显区分,并揭示了对此区分贡献大的16 个潜在标志性色谱峰,结合标准物质定性鉴定了6 个色谱峰,其中4个为贡献大的潜在标志性指标成分.同时测定了该6 个指标成分在10 批炮制前和10 批炮制后提取物的含量,其中补骨脂素、异补骨脂素、甲基丁香酚和甲基异丁香酚炮制后含量升高,去氢二异丁香酚和补骨脂酚炮制后含量降低.结论: 该方法从定性和定量两方面控制炮制前、后二神丸提取物的内在质量,更全面地反映了二神丸提取物的化学成分信息及炮制前后的差异性,为提取物质量评价和控制提供了一个有效的参考.
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基于尿液代谢组学的二神丸中补骨脂、肉豆蔻炮制增效作用的机理研究
目的 运用代谢组学方法研究二神丸中补骨脂、肉豆蔻炮制前后对脾肾阳虚泄泻大鼠尿液内源性代谢物的影响,探讨二神丸中补骨脂、肉豆蔻炮制增效机制.方法 以脾肾阳虚泄泻模型大鼠为研究对象,运用气相色谱-质谱联用(GC-MS)采集大鼠尿液代谢图谱,利用主成分分析(PCA)和偏小二乘判别式分析(PLS-DA)方法分析二神丸对脾肾阳虚泄泻大鼠尿液内源性代谢物的影响.结果 二神丸对脾肾阳虚泄泻模型大鼠的丙氨酸、甘氨酸、琥珀酸、缬氨酸、脯氨酸、蛋氨酸、马尿酸、苯丙氨酸、棕榈酸、肉豆蔻酸和酪氨酸11种相关标志物具有不同程度的干预作用,尤以二神丸Ⅳ组(盐炙补骨脂+麸煨肉豆蔻)干预效果佳.结论 二神丸中补骨脂、肉豆蔻炮制增效作用可能与改善氨基酸、脂类以及能量代谢,调节肠道菌群等有关.
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“二神丸”中药物炮制前后对脾肾阳虚泄泻大鼠血清中一氧化氮和胃动素、胃泌素的影响
目的:比较“二神丸”中两味药物炮制前后对脾肾阳虚泄泻模型大鼠血清中一氧化氮(NO)、胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)含量的影响,拟阐明“二神丸”中药物炮制增强疗效作用机理.方法:将50只SD雄性大鼠随机分为正常、模型、阳性药物、生品“二神丸”、炮制品“二神丸”5组,通过复合因素造脾肾阳虚泄泻模型,并给药后取血清,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠血清中一氧化氮、胃动素、胃泌素的水平.结果:模型组血清中一氧化氮、胃动素、胃泌素水平与正常组相比均有显著增高(P＜0.05);三个给药组均能调节三者趋于正常水平,且炮制品“二神丸”组对一氧化氮、胃动素和胃泌素的调节作用比生品“二神丸”组更明显(P＜0.05～0.01).结论:“二神丸”中的药物炮制后对大鼠血清中一氧化氮、胃动素和胃泌素的调节作用比生品“二神丸”组更为明显,提示复方“二神丸”中药物炮制后增强止泻作用可能是通过纠正异常的一氧化氮水平和消化道激素而达到的.
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补骨脂盐炙前后对二神丸止泻作用的研究
目的:通过比较补骨脂盐炙前后在二神丸复方中止泻作用的研究,为临床合理选择炮制品提供依据.方法:以补骨脂生品,盐炙品分别制成二神丸,给小鼠灌胃给药,观察对番泻叶所致小鼠急性腹泻及大黄造成脾虚腹泻模型影响.结果:二神丸(补骨脂盐炙品)10 g/kg剂量组能减轻小鼠急性腹泻,二神丸(补骨脂盐炙品)5 g/kg和15 g/kg均能抑制脾虚小鼠肠推进.结论:二神丸用于治疗脾肾阳虚腹泻以盐炙补骨脂入药效果更好.
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二神丸联合参苓白术散对肠易激综合征(腹泻型)脾胃虚弱证的临床干预作用
目的 探讨二神丸联合参苓白术散治疗腹泻型肠易激综合征脾胃虚弱证的临床疗效及生活质量的改变.方法 60例IBS-D患者随机分为两组:对照组30例给予匹维溴铵联合枯草杆菌二联活菌肠溶胶囊口服,治疗组30例在对照组用药的基础上加以中药二神丸联合参苓白术散口服,疗程4周,观察一个疗程,比较两组治疗前后总体疗效、临床症状及生活质量情况的变化.结果 1.总有效率:治疗组为86.7％,对照组为73.3％,两组比较,差异有显著性意义(P＜0.05);2.临床症状评价:两组治疗后较治疗前对腹胀腹痛或腹部不适、大便次数、大便性状均有明显改善(P＜0.05),且治疗组优于对照组(P＜0.05);3.生活质量评价:两组IBS患者的QOL水平在生理机能、生理职能、总体健康、活力、情感职能、精神健康6个纬度上得分较治疗前均高(P＜0.01),且治疗组显著优于对照组(P＜0.05).结论 1.在西药治疗的基础上配合中药治疗D-IBS疗效显著;2.在改善大便次数、性状方面,与本组治疗前比较有明显改善,且治疗组优于对照组;但在改善腹胀腹痛或腹部不适方面两组相差不大;3.生活质量方面:两组较治疗前均有改善,且治疗组优于对照组.
