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FSH受体的特性和表达的调控
卵泡刺激素(FSH)是垂体分泌的一种糖蛋白激素,主要作用是促进和维持正常的性腺发育和生殖功能.FSH的生理功能是通过分布于性腺的特异性受体所介导的.支持细胞(sertoli cell)和颗粒细胞(granulosa cell)分别是FSH作用于睾丸和卵巢的靶细胞.FSH的结构和生理功能虽然已被广泛的研究和阐明,但其作用的分子机制,尤其是在促进配子产生过程中的作用机制尚不清楚.因此,研究FSH受体(FSHR)的分子结构和功能、以及FSHR的基因表达与调控,进而阐明对配子形成的意义,已经成为阐明FSH功能的关键.
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小儿心力衰竭发病机制及治疗方法的研究进展
目的 探讨小儿心力衰竭的发病机制及医疗方法的研究进展.结论 心力衰竭是一组由不同病因引发的临床症候群,是心肌组织细胞中某些相关基因表达与调控异常,是一组神经体液因子参与的调节机制导致心室重塑的分子生物学改变过程.
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hTERT及其基因表达与调控
hTERT是人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase)的缩写.人端粒酶由三个亚单位组成:RNA组分、端粒酶相关蛋白和端粒酶逆转录酶(hTERT).端粒酶一经发现便引起了人们的关注,而hTERT对端粒酶活性起关键作用,是端粒酶研究中的热点.迄今认为,hTERT在大部分恶性肿瘤中表达,在正常组织(除生殖细胞和有高度复制潜能的体细胞)中不表达.而其他两种成分在肿瘤组织和正常组织中均有不同程度表达.这些表明,hTERT在细胞中的表达是决定端粒酶活性的主要因素[1].因此,研究hTERT及其基因表达与调控是揭示端粒酶活性的一个关键步骤.从而有可能对肿瘤的治疗等问题的解决产生重大影响.现就hTERT 及其基因表达与调控作一综述.
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小儿心血管疾病诊治进展
1 心力衰竭心力衰竭(简称心衰)是一组由不同病因引发的临床症候群.分子生物学研究表明心衰的本质是心肌组织细胞中某些相关基因表达与调控异常,引起了超负荷的心肌病,因此从某种角度说,心衰是一种基因病[1].通过基因导入以延缓和纠正心肌组织某些基因的突变,有可能使心衰的治疗获得较大进展.
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微小RNA-92a在相关疾病发病机制中的研究进展
miRNA-92a家族基因是由miRNA-25、miRNA-92a～1和miRNA-92a～2等序列相似、结构相仿、种子区序列相同的微小RNA组成,它们分别来自在进化过程中高度保守并互为旁系同源序列的miRNA-106b～25、miRNA-17～92和miRNA-106a～363基因簇.目前研究认为,miRNA-92a家族基因是一组与血管内皮细胞形成有关的miRNAs,其表达紊乱与肿瘤的发生发展密切相关.本文就miRNA 92a家族基因在相关疾病发病机制中的研究进展进行综述.
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表达降钙素基因相关肽的单纯疱疹病毒Ⅰ型扩增子载体的构建、包装和扩增
目的 对单纯疱疹病毒Ⅰ型扩增子质料装载降钙素基因相关肽,并进行包装和扩增.方法 分别钓取pac 基因和γ134.5基因,克隆入pMD18-T载体中.pSV载体经HindⅢ和BamH Ⅰ双酶切,获得lacZ片段,自身环化形成pUPO-γ134.5-lacZ.合成CGRP基因序列,将此基因替换pUPO-γ134.5-lacZ质粒中的lacZ基因,插入γ134.5基因位点中,即pUPO-△γ134.5-CGRP.再用单纯疱疹病毒温敏株辅助在BHK细胞中包装、扩增,通过检测lacZ的表达反映扩增子病毒滴度.结果 酶切鉴定证实重组子构建成功.重组扩增子质粒的包装、扩增由BHK细胞的形态变化和X-gal原位检测载体lacZ的表达证实.扩增子假型病毒滴度达3.5×105TU/ml.结论 本研究构建、包装、扩增的携带降钙素基因相关肽的假型病毒有较高感染性,这种扩增子病毒可作为实验研究的有力工具.
关键词： HSV-Ⅰ降钙素基因相关肽 基因表达与调控 载体 -
地高辛标记的cDNA探针检测 IL-6mRNA表达的方法
IL-6(interleukin-6)是一种由多种细胞分泌的细胞因子,在血液病及心、脑疾病时有异常表达.IL-6被认为是目前治疗各种血小板减少症的佳药物,在治疗白细胞减少症及抗白血病、抑制肿瘤转移及骨髓移植方面也有重要作用.迄今,IL-6的检测多采用以细胞培养为基础的生物学活性检测,该方法不仅难以反映IL-6基因转录水平,而且特异性和灵敏度均受到限制.本文采用随机引物法对人IL-6cDNA探针进行地高辛标记,核酸分子原位杂交技术,建立了在转录水平上直观检测IL-6mRNA表达的实验技术,为研究IL-6的基因表达与调控奠定了基础.
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真菌致病的生物学原理浅析及治疗对策初探
目前,浅部真菌病的发病率居高不下,深部真菌感染的发病率持续增高,但其诊断、治疗和预防仍存有许多问题,核心就是人们对真菌感染的发生、发展机制尚缺乏深入了解.尽管这些年在真菌病发病机制方面取得一些进展,但更多的研究关注的是微观和细节,如真菌毒力因子、适应因子、信号传导、致病基因表达与调控、宿主细胞与真菌细胞相互作用、抗真菌的天然免疫和适应性免疫、真菌耐药机制等.现在的问题是,如何将这些实验研究成果尽快转化成临床可用的医疗技术或手段,无疑是一漫长过程.在等待这些新进展成功转化之前,不妨换个角度,即从生物学原理和进化论角度来诠释一下真菌致病的机制以及探讨适宜的应对策略.
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大豆异黄酮对糖尿病大鼠心肌钙调控蛋白基因表达的影响
目的:探讨大豆异黄酮对糖尿病大鼠心肌细胞肌浆网钙调控蛋白基因表达的影响.方法:雄性SD大鼠40只,随机分为正常对照(NC)组、糖尿病对照(DC)组、大豆异黄酮治疗(ST)组和尼尔雌醇治疗(NT)组.后3组腹腔注射链脲佐菌素55 mg/kg制备糖尿病模型.第7周起,NC、DC组予0.5%羧甲基纤维素钠10 ml·kg-1·d-1,ST组予大豆异黄酮120 ml·kg-1·d-1,NT组予尼尔雌醇混悬液每周0.2 mg/kg灌胃2次.第12周末记录离体心室内压曲线并分析.取心室肌组织,应用RT-PCR技术测定钙调控蛋白的基因表达.结果:与NC组比,DC组大鼠左心室收缩压、平均压、室内压大上升/下降速率降低(P<0.01);与DC组比,ST组、NT组以上指标均增高(P<0.01).而左心室舒张末压,DC组明显高于NC组(P<0.01);ST组、NT组均低于DC组(P<0.01).与NC组比,DC组大鼠心肌肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA)、兰尼碱受体2型(RyR2)、1,4,5三磷酸肌醇受体2型(IP3R2)mRNA表达降低,但受磷蛋白(PLB)mRNA表达增高(P<0.01).与DC组比,ST组、NT组大鼠心肌SERCA、RyR2、IP3R2 mRNA表达增高,而PLB mRNA表达降低(P<0.01).结论:大豆异黄酮可以改善糖尿病大鼠左心室功能,可能与其上调心肌SERCA、RyR2、IP3R2 mRNA的表达和下调PLB mRNA的表达有关.
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细胞信号转导与可变剪接调控
大多数真核基因能够发生可变剪接,其调控对于生理和病理状态下细胞功能的实现至关重要,而异常可变剪接则可导致多种疾病.虽然已知可变剪接能够在转录后水平调节基因表达,然而目前仍不清楚特定的可变剪接模式是如何被调控的.越来越多的研究发现细胞信号和外界环境刺激能够调控靶基因的剪接模式,并且已发现一些与可变剪接调控有关的信号转导通路,而后者能够通过修饰剪接因子进而改变剪接因子的亚细胞定位或者活性,从而实现对靶基因可变剪接模式的调控.由细胞信号转导通路所构成的网络能够灵活多样地调控基因剪接,一条信号通路可调控多个基因剪接,而多条信号通路也可调控同一基因剪接,对于理解信号转导过程的分子机制具有重要意义.
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HBV 影响 XRN2基因在 HepG2-H7细胞中表达的机制研究
目的 利用稳定表达 HBV 的 HepG2-H7 细胞,研究 HBV 对 XRN2 基因表达的调控,并对其作用 机制进行初步探讨.方法 用 RT-PCR 和 Real-time PCR 的方法检测 HepG2细胞及稳定表达 HBV 的 HepG2-H7 细胞中 XRN2 在 mRNA 水平的表达差异.构建 XRN2 启动子的萤火虫荧光素酶报告质粒,分别转染Hepc2 细胞及 HepG2-H7 细胞,检测 HBV 对 XRN2 启动子的影响.将 XRN2 启动子质粒与 HBV 4 种蛋白的真核表达质粒共转染 HepG2 细胞,寻找对启动子影响较大的 HBV 蛋白.结果 RT-PCR 和 Real-time PCR 的结果显示 XRN2 在 HepG2-H7 细胞中的表达较 HepG2 细胞有所下降.荧光索酶活性分析显示 HBV 能抑制XRN2 启动子的活性,且 HBx 和 HBp 蛋白在这一过程中起主要作用.结论 HBV蛋白可以通过抑制XRN2启动子活性调节其在 HepG2-H7 细胞中的表达.
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MEK5基因siRNA重组腺病毒表达载体的构建及其对MEK5的表达抑制
目的 构建人MEK5基因的小干扰RNA(siRNA)重组腺病毒表达载体,观察其在胃腺癌SGC7901细胞中对MEK5的表达抑制.方法 设计并合成针对人MEK5基因3个不同部位siRNA靶点的模板DNA序列,以MluⅠ及XhoⅠ克隆入pRNAT-H1.1/Adeno穿梭载体中,将得到的重组穿梭质粒用PmeⅠ线性化后在大肠埃希菌BJ5183中与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组.将PacⅠ酶切鉴定正确的重组腺病毒质粒经乙醇沉淀后转染293A细胞,包装得到具有感染能力的pAd-MEK5-siRNA重组腺病毒.病毒体外转导人胃腺癌SGC7901细胞,Western印迹法检测其对MEK5表达的抑制.结果 经酶切和测序鉴定均证实pAd-MEK5-siRNA重组腺病毒载体构建成功,其插入序列正确无误.Western印迹检测结果显示pAd-MEK5-siRNA2可抑制MEK5基因的表达,其有效抑制率达75.5 %.结论本研究成功地构建了针对人MEK5基因的siRNA重组腺病毒载体,为进一步深入研究MEK5基因在人胃腺癌细胞中的作用和功能奠定了基础.
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巴尔通体(Bartonella tribocorum)P26蛋白原核重组表达研究
目的 构建巴尔通体表面蛋白p26基因的原核重组表达载体,表达和纯化重组表达蛋白P26,并鉴定其抗原性.方法 利用PCR方法从巴尔通体B.tribocorum厦门分离株的基因组DNA中扩增出p26蛋白基因,并将该基因的编码区克隆到pGEX-4T-1表达载体中,从而构建GST-p26融合蛋白原核重组表达载体.将表达载体转化大肠埃希菌(E.coli DH5α),诱导表达GST-p26,并运用亲和层析技术纯化蛋白.通过蛋白质斑点印迹试验和间接ELISA法检验GST-p26是否具有抗原性.结果 成功构建了p26的原核表达载体,该表达载体可在E.coli DH5α中大量表达GST-p26,原核表达的GST-p26能够与感染动物血液样本发生特异性免疫反应.结论 原核重组表达的GST-p26可作为潜在的抗原,应用于巴尔通体的血清学检测.
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MGMT基因启动子甲基化与膀胱尿路上皮癌生物学行为关系的研究
目的 检测膀胱尿路上皮癌组织中O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)基因启动子甲基化状态,探讨MGMT甲基化与其蛋白表达水平以及肿瘤生物学行为之间的关系.方法 应用免疫组织化学SP法和甲基化特异性PCR(MSP)分别检测60例膀胱尿路上皮癌及15例正常膀胱黏膜组织中MGMT蛋白表达情况和MGMT基因启动子甲基化状态.结果 膀胱癌组织中MGMT蛋白阳性表达率为35.0 %(21/60),低于正常膀胱组织(86.7 %,13/15,P<0.01).膀胱癌组织中MGMT甲基化阳性率为45.0 %(27/60),明显高于正常膀胱组织(0.0 %,0/15,P<0.01);MGMT启动子甲基化与其蛋白表达呈负相关(r = -0.453,P<0.01);并且高级别膀胱癌中MGMT甲基化阳性率(70.6 %,12/17)要比低级别膀胱癌高(34.9 %,15/43),(P<0.05),而MGMT甲基化与膀胱癌临床分期无明显关系.结论 MGMT启动子甲基化可能参与了膀胱尿路上皮癌的发生和肿瘤分化,MGMT启动子甲基化有望成为预判膀胱癌预后的重要标记.
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醛固酮对大鼠主动脉bax基因表达的影响
目的 研究醛固酮对大鼠主动脉bax基因表达的影响.方法 32只SD大鼠随机分为空白对照组、腺瘤组、腺瘤+依普利酮组和腺瘤+肼苯哒嗪组.在每只大鼠皮下埋植的微量渗透泵内注入空白溶剂或醛固酮.8周后通过免疫组化、RT-PCR和Western 印迹检测主动脉bax基因的表达.结果 与对照组相比,腺瘤组大鼠主动脉bax mRNA和蛋白表达都显著上调(P＜0.05);依普利酮能够抑制醛固酮对bax基因的诱导作用(P＜0.05);而肼苯哒嗪虽然可以使大鼠收缩压下降,但不能阻止醛固酮对bax基因的作用.结论 醛固酮通过诱导bax基因表达,调节血管平滑肌细胞凋亡和干预细胞周期进程,可能是其导致血管重构的机制之一.
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HBV通过增强DNAJB4启动子活性调节其在HepG2.2.15细胞中的表达
目的 初步探讨HBV与DNAJB4基因的转录调节作用机制.方法 用RT-PCR及Real-time PCR检测HepG2.2.15细胞和HepG2细胞中DNAJB4在mRNA水平上的表达差异.构建DNAJB4启动子虫荧光素酶报告质粒,分别与HBV、HBs、HBp、HBc、HBx表达质粒共转染HepG2细胞,比较虫荧光素酶活性.结果 在mRNA水平上,DNAJB4在HepG2.2.15细胞中的表达量是其在HepG2细胞中表达量的2.59倍,且二者有显著性差异(P＜0.01).DNAJB4启动子虫荧光素酶报告质粒与HBV表达质粒共转染组的相对荧光素酶活性是其对照组的2.28倍.转染HBs和HBc表达质粒组的相对荧光素酶活性分别是其对照组的2.11倍和1.77倍,而HBx、HBp表达质粒对荧光素酶活性没有影响.结论 在HepG2.2.15细胞中,HBV能通过增强DNAJB4启动子活性增加DNAJB4转录水平的表达,其中HBs和HBc蛋白起主要作用.
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逆转录病毒载体介导的RNAi抑制乳腺癌细胞BSP基因表达
目的 构建抑制人BSP基因表达的RNA干扰逆转录病毒载体,筛选建立稳定抑制BSP表达的MDA-MB-231BO细胞系.方法 构建靶向人BSP基因的逆转录病毒重组质粒pSilencer-BSP27、pSilencer-BSP81和pSilencer-BSP100.将其包装成病毒后感染MDA-MB-231BO细胞.用RT-PCR和Western印迹检测成功感染细胞(231BO-BSP27、231BO-BSP81、231BO-BSP100细胞)BSP基因的抑制效果.结果 双酶切和测序结果显示重组核酸片段序列与设计的序列完全相同.RT-PCR和Western印迹结果显示231BO-BSP27、BO-BSP81和231BO-BSP100细胞BSP基因在mRNA水平和蛋白水平抑制效率分别为:70.8 %、79.4 %和30.1 %;69.3 %,75.2 %和27.8 %.结论 成功构建抑制人BSP基因表达的RNAi逆转录病毒载体pSilencer-BSP27、pSilencer-BSP81和pSilencer-BSP100.获得高效稳定抑制BSP表达的231BO-BSP27、231BO-BSP81细胞系.
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人EPHB2基因启动子的初步鉴定
目的 为进一步研究人EPHB2基因的表达调控机制,初步鉴定、分析该基因的启动子.方法 在对人EPHB2基因的生物信息学分析的基础上,在EPHB2基因的转录起始位点已明确的前提下,克隆了该基因的5′侧翼区,并对该区进行功能分析,分别构建了5种含不同长度启动子序列的荧光素酶报告基因表达质粒,将它们瞬时转染293细胞,检测其荧光素酶活性.结果 EPHB2的5′侧翼区的-138～+83区域的启动子活性不高,而从-425～+83开始显著升高,-1 174～+83区域的启动子活性又出现明显降低.结论 人EPHB2基因启动子的较小区域位于其5′侧翼区的-425～-139区域.另外,在-1 174～-970区域可能存在着沉默子.
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C-反应蛋白基因过表达诱导SD大鼠血压升高的实验研究
目的 研究C-反应蛋白(C-reactive protein, CRP)重组质粒过表达诱导sD大鼠发生高血压,继而引起心血管功能障碍和重塑.方法 18只SD大鼠随机分为3组,每组6只,分别给予尾静脉注射pcD-NA3.1-CRP重组质粒、pcDNA3.1空质粒及生理盐水.定期检测尾动脉血压,28d后处死动物,并于处死动物前进行心脏血流动力学、血管张力及心血管系统重塑分析.结果 实现C-反应蛋白在大鼠体内的过表达.与两个对照组相比较,pcDNA3.1-CRP组血压升高的同时,伴有心脏收缩与舒张功能的显著障碍,胸主动脉舒张功能显著降低,心血管系统重塑.结论 炎性因子C-反应蛋白可以引起血压升高.
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PKC参与化学修饰的LDL对ABCA1表达和功能的调节
目的探讨PKC信号途径对oxLDL和acLDL诱导的小鼠巨噬细胞ABCA1表达的影响.方法分别以100μg/ml acLDL和oxLDL温育小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞24h,同时加入PKC信号途径的激活剂(PMA)或抑制剂(GF109203X),应用胆固醇外排实验、半定量RT-PCR和Western印迹,检测小鼠巨噬细胞内ABCA1功能、mRNA及蛋白质表达的水平.结果1.0 μmol/L GF109203X可分别使acLDL孵育组的胆固醇外排率下降至对照组的56.0%,ABCA1 mRNA水平下降至(54.0±8.2)%,蛋白质水平下降至(68.1±2.0)%;oxLDL孵育组的胆固醇外排率下降至对照组的47.0%,ABCA1 mRNA水平下降至(43.0±5.0)%,蛋白质水平下降至(73.0±10.0)%.160 nmol/L PMA作用24 h可分别使acLDL孵育组的胆固醇外排率升高至134.0%,oxLDL孵育组升高至125.1%;ABCA1 mRNA水平升高至(211.0±17.0)%,蛋白质水平升高至(305.0±21.0)%.结论PKC信号途径在oxLDL和acLDL对小鼠巨噬细胞内ABCA1表达调控中发挥作用,该信号途径的激活可上调ABCA1的表达,促进ABCA1介导的胆固醇外排.
关键词： ATP结合盒转运子A1 蛋白激酶C 低密度脂蛋白 基因表达与调控 胆固醇外排
