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焦炉逸散物诱导人支气管上皮细胞O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶基因高甲基化
目的 通过观察细胞遗传损伤指标和O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)甲基化改变,探讨焦炉逸散物暴露诱导的损伤效应机制.方法 采用1 μmol/L苯并[a]芘[B(a)P]诱导人支气管上皮细胞16HBE 48 h后,分别用1‰二甲基亚砜(DMSO)和2.5、5.0、10.0、20.0 μg/ml浓度的焦炉逸散物有机提取物对16HBE细胞连续染毒5 d,构建细胞损伤模型;采用甲基化特异性PCR(MSP-PCR)检测细胞MGMT甲基化改变,并用RT-PCR检测细胞MGMT mRNA改变,免疫印迹法检测MGMT蛋白改变;采用碱性单细胞凝胶电泳技术检测细胞DNA损伤水平.结果 与DMSO组相比,MGMT基因在各处理组均有高甲基化改变,并随剂量的增加,其mRNA和蛋白表达水平都呈下降趋势.DMSO组及2.5、5.0、10.0、20.0μg/ml各剂量组MGMT mRNA及其蛋白的灰度比值分别为1.0、0.96、0.96、0.85、0.32和1.0、1.0、1.1、0.41、0.52.焦炉逸散物有机提取物处理后,细胞出现不同程度的DNA损伤,DMSO组及2.5、5.0、10.0、20.0μg/ml各剂量组彗星Olive尾距分别为(2.98±1.43)、(4.76±1.79)、(10.09±1.75)、(11.38±1.77)、(11.67±1.88),损伤呈明显的剂量-效应关系(F=41.22,P＜0.05);进一步分析发现,细胞的遗传损伤指数与MGMT蛋白及mRNA表达水平呈负相关.结论 焦炉逸散物引起的DNA损伤与MGMT高甲基化所致的MGMT基因表达水平降低有关.
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毒结清口服液对中晚期肿瘤化疗患者MGMT基因甲基化的影响
目的 观察毒结清口服液对中晚期肿瘤化疗患者血浆中O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)基因甲基化状态的影响.方法 收集中晚期肿瘤化疗患者60例,随机分为治疗组(30例,常规化疗+毒结清口服液20 mL/次,每日3次)和对照组(30例,单用化疗),疗程8周,治疗前后用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测中晚期肿瘤化疗患者血浆中MGMT基因的甲基化状态,同时检测外周血常规、KPS评分,评估临床疗效及毒副反应.结果 MGMT基因甲基化检测结果显示治疗组、对照组甲基化率分别为20.00%、46.67%,差异有统计学意义(P<0.05).与治疗前比较,治疗后治疗组KPS评分显著提高,对照组显著下降,差异均有统计学意义(P<0.05).两组治疗后比较,差异亦有统计学意义(P<0.01).化疗后治疗组毒副反应较对照组轻(P<0.01).结论 毒结清口服液对化疗有增效减毒作用,且不影响骨髓造血功能.其作用靶点可能是MGMT,通过对MGMT活性的调控达到增效减毒的作用.
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恶性脑胶质瘤患者MGMT基因启动 子甲基化状态与预后相关性
目的 O-6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O-6-methylguananine-DNA methyltransferase,MGMT)基因表达可修复烷化剂诱导的DNA损伤从而导致烷化剂耐药.MGMT启动子甲基化抑制MGMT基因表达,因此MGMT启动子甲基化为预测脑胶质瘤患者预后的一个重要分子标志物.本研究探讨脑胶质瘤患者血清、脑脊液和肿瘤组织中MGMT基因启动子甲基化状态与患者预后的关系.方法 选择2010-10-15-2015-11-20云南省肿瘤医院神经外科手术治疗88例脑胶质瘤患者为研究对象,采用免疫组化和甲基化特异性聚合酶链式反应法分别检测肿瘤组织MGMT蛋白表达水平,以及血清、脑脊液和肿瘤组织中MGMT基因启动子的甲基化状态.随访患者无疾病进展生存时间(progression free survival,PFS)和总生存时间(overall survival,OS),分析血清、脑脊液和肿瘤组织中MGMT基因启动子甲基化状态与患者预后的关系.结果 脑胶质瘤患者血清、脑脊液和肿瘤组织中MGMT基因启动子甲基化阳性检出率分别为56.8％(50/88)、63.6％(56/88)和68.2％(60/88).脑脊液和肿瘤组织MGMT基因启动子甲基化状态与肿瘤组织MG-MT蛋白表达水平呈负相关,相关系数分别为-0.262和-0.492,均P<0.05.Kaplan-Meier生存分析显示,脑脊液和肿瘤组织MGMT基因启动子甲基化阴性和WHOⅢ、Ⅳ级患者的PFS(χ2值分别为23.871、12.743和16.867,均P<0.05)和OS(χ2值分别为4.139、6.927和6.284,均P<0.05)较短.Cox多因素分析结果显示,脑脊液、肿瘤组织MG-MT基因启动子甲基化为影响脑胶质瘤患者预后的保护性因素,风险比(hazard ratio,HR)分别为2.915和3.684,均P<0.05.结论 脑胶质瘤患者脑脊液和肿瘤组织中MGMT基因启动子甲基化状态与肿瘤组织MGMT蛋白表达密切相关,脑脊液和肿瘤组织中MGMT基因启动子甲基化状态可作为判断脑胶质瘤患者预后的参考指标.
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MGMT基因甲基化状态在结直肠锯齿状病变中的表达及意义
目的 观察锯齿状病变组织中MGMT基因甲基化状态和MGMT蛋白表达,探讨临床病理意义和在癌变通路中的作用,同时探讨MGMT基因在不同年龄层段甲基化状况.方法 应用Taqman探针qPCR (MethyLight)方法检测北京军区总医院2007～2013年的225例锯齿状病变[包括96例增生性息肉(HP)、61例广基(无蒂)锯齿状腺瘤/息肉(SSA/P)和68例传统型锯齿状腺瘤(TSA)]、54例管状腺瘤(TA)、69例结直肠癌(CRC)和42例正常结直肠黏膜组织中MGMT基因CpG岛甲基化状态,并通过测序法验证扩增的目的片段甲基化状态,同时应用免疫组化方法检测其中116例锯齿状病变(包括52例HP、41例SSA/P、23例TSA)、20例TA、24例CRC和24例正常结直肠黏膜组织中MGMT蛋白的表达情况.结果MGMT基因启动子甲基化状态和MGMT蛋白异常阳性程度在锯齿状病变和对照组中差异均有统计学意义(P＜0.05),且两者之间呈负相关;MGMT基因启动子甲基化频率在不同年龄层段相关性比较中两者呈正相关,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论组织中MGMT基因甲基化可能诱导其蛋白表达下调的主要原因,在结直肠“增生性息肉-锯齿状腺瘤-癌”的锯齿状癌变通路中起重要作用.
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巢式甲基化特异性PCR检测肺癌患者MGMT基因异常甲基化
近年来的研究显示肿瘤的发生与DNA甲基化模式的异常关系密切,CpG岛的异常甲基化是导致许多抑癌基因转录失活的一个重要机制[1].MGMT基因是一个DNA损伤修复基因,其表达失活的主要原因不是缺失、突变或基因重排,启动子的过甲基化可能是其转录调节的主要方式[2,3].在本研究中,我们利用改进的巢式甲基化特异性PCR技术检测了53例肺癌患者血清及肿瘤组织中MGMT基因的甲基化状态,并对其在肺癌早期诊断中的潜在应用进行了探讨.
关键词： MGMT基因 巢式甲基化特异性PCR 肺癌 -
5′-氮杂-2'-脱氧胞苷对结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中MGMT基因甲基化状态、mRNA表达及蛋白表达的影响
目的：探讨甲基化酶抑制剂5′-氮杂-2'-脱氧胞苷(5′-Aza-CdR)对结直肠癌(colorectal cancer, CRC)细胞株HT-29和LoVo中MGMT基因甲基化水平、mRNA及蛋白表达的影响。方法用0.5、1.0、1.5μmol/L浓度的5′-Aza-CdR处理CRC细胞株HT-29和LoVo。应用MethyLight方法、实时荧光定量PCR方法及蛋白印迹试验( Western-blot)检测药物处理前后HT-29和LoVo细胞中MGMT基因的甲基化状态、mRNA和蛋白表达情况。结果 MethyLight检测HT-29和LoVo细胞中MGMT蛋白在药物作用后异常甲基化得到逆转。实时荧光定量PCR检测5′-Aza-CdR浓度为0.5、1.0、1.5μmol/L组HT-29细胞株和LoVo细胞株MGMT基因mRNA表达水平均较对照组上调,Western blot检测5′-Aza-CdR浓度为0.5、1.0、1.5μmol/L组MGMT蛋白表达水平均较对照组上调,且均具有药物剂量依赖性(P<0．05,P<0．01)。结论 CRC细胞株HT-29和LoVo中MGMT基因启动子甲基化可能是导致该基因表达下调甚至失活的主要原因。5′-Aza-CdR能够逆转CRC细胞株HT-29和LoVo中MGMT基因的甲基化状态,并能恢复mRNA及蛋白重新表达。
关键词： 结直肠肿瘤 DNA甲基化 5′-氮杂-2'-脱氧胞苷 MGMT基因 -
5-氮杂-2′-脱氧胞苷诱导胃癌细胞系中p16和MGMT基因去甲基化并激活其表达
目的 观察5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dC)对体外培养的胃癌细胞MGC-803中p16和MGMT基因启动子区DNA甲基化状态及表达的影响,探讨胃癌细胞p16和MGMT基因失活的机制及去甲基化制剂对p16和MGMT基因表达的调控.方法 5-Aza-dC处理体外培养的胃癌细胞MGC-803后,甲基化特异性PCR(MSP)法检测用药前后细胞中p16和MGMT基因的甲基化状态,RT-PCR法检测用药前后细胞中p16和MGMTmRNA表达的变化.结果 胃癌细胞系MGC-803中p16和MGMTmRNA表达缺失,其启动子区域表现为DNA甲基化.5-Aza-dC不但能使MGC-803细胞中p16和MGMT基因发生DNA去甲基化,而且能使表达缺失的p16和MGMTmRNA重新表达.结论 启动子区高甲基化是胃癌细胞p16和MGMT基因失活的主要原因之一,去甲基化制剂-5-Aza-dC能逆转p16和MGMT基因甲基化状态,从而调控p16和MGMT基因表达.
关键词： 5-氮杂-2′-脱氧胞苷 p16基因 MGMT基因 胃癌 DNA甲基化 -
分子诊断在肿瘤个体化治疗中的应用
由于医疗技术水平的不断提高，人们对人类基因的研究也取得了很大进展，尤其是通过对RNA、DNA的有关蛋白质等分子的不断变化来断定患者属于何种疾病的分子诊断的方法，给肿瘤病患者带来了福音，不但有能够准确及时检测、迅速了解发病原因等优点，还可以通过靶位、药物代谢等靶标，分析药物给患者带来的影响，有效地提高治疗效果；也能减少患者的治疗费用和医疗风险，既减轻了患者的经济负担，还能够节约大量治疗时间。
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亚砷酸钠对人皮肤角质形成细胞MGMT基因组蛋白乙酰化及转录与表达的影响
[目的]了解不同剂量亚砷酸钠(NaAsO2)对人皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)中O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)基因组蛋白乙酰化调控、mRNA转录及蛋白表达的影响.[方法]以25.00、12.50、6.25、3.13μmol/LNaAsO2重复间隔处理HaCaT细胞72h(NaAsO2处理24h,隔天再次用NaAsO2进行相同的处理,重复处理3次).定量染色质免疫沉淀技术(Q-ChIP)检测MGMT基因转录调控区(CHIP1、CHIP2区域)及MGMT基因编码区(CHIP3区域,对照区域)组蛋白乙酰化修饰水平;实时荧光定量PCR(Q-PCR)和免疫印迹分析分别检测MGMT基因的mRNA转录和蛋白表达.设不染毒的HaCaT细胞为空白对照(0.00μmol/L),人表皮鳞癌细胞株A431为阳性对照.[结果]0.00、3.13、6.25、12.50、25.00μmol/L NaAsO2处理细胞中,MGMT基因转录调控区CHIP1区域的组蛋白H3K9乙酰化水平分别为176.68±8.50、175.71±18.14、161.26±16.28、146.23±24.00和82.64±33.87,差异有统计学意义(F=28.809,P<0.05);组蛋白H4乙酰化水平分别为183.59±11.98、180.84±24.10、166.52±5.48、156.87±10.64和103.42±7.04,差异有统计学意义(F=36.493,P<0.05).CHIP2区域的组蛋白H3K9乙酰化水平分别为171.11±16.54、167.55±8.97、156.51±8.59、135.88±16.55和82.01±3.96,差异有统计学意义(F=49.626,P<0.05);组蛋白H4乙酰化水平分别为117.23±16.21、143.29±10.59、135.87±7.44、105.48±7.56和78.79±6.92,差异有统计学意义(F=25.438,P<0.05).编码区CHIP3区域的组蛋白H3K9乙酰化水平分别为37.53±6.23、35.57±5.85、40.81±4.45、42.18±1.23和41.87±5.71,差异无统计学意义(F=2.341,P>0.05);组蛋白H4乙酰化水平分别为40.78±2.42、38.56±4.66、39.47±2.88、33.13±3.48和31.48±4.99,差异无统计学意义(F=3.027,P>0.05).MGMT基因mRNA转录相对表达量分别为1.19829±0.15997、1.518 31±0.18054、1.42522±0.18039、1.01454±0.09679和0.88772±0.02000,差异有统计学意义(F=37.359,P<0.05):MGMT蛋白相对表达量分别为1.06619±0.061 24、1.17447±0.06475、0.848 83±0.05701、0.47163±0.02334和0.24034±0.01443,差异有统计学意义(F=20.687,P<0.05).[结论]砷通过导致MGMT基因转录调控区组蛋白去乙酰化,抑制MGMT基因mRNA转录及蛋白表达,是砷致皮肤损害的重要机制之一.
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燃煤污染型砷中毒患者MGMT基因启动区甲基化及MGMT mRNA的表达
[目的]了解燃煤污染型砷中毒患者血中06.甲基鸟嘌呤.DNA甲基转移酶基因(MGMT基因)启动区甲基化及患者皮肤组织中MGMTmRNA转录表达的情况,探讨两者间关系及其在砷中毒发生发展乃至癌变中的作用.[方法]采用甲基化特异性PCR法(MSP)检测99例砷中毒患者和103例正常对照MGMT基因启动区甲基化情况;同时采用原位杂交技术检测其中6l例砷中毒患者皮肤组织中MGMTmRNA的表达情况. [结果]①砷中毒组MGMT基因启动区甲基化阳性率为40.4%,对照组为2.91%;随病情加重砷中毒患者甲基化阳性率逐渐升高,轻、中、重度砷中毒组甲基化阳性率分别为22_73%、39.02%和52.78%,非癌变组与癌变组甲基化阳性率分别为27.78%和65.00%,均显著高于对照组(尸＜0.05或P＜0.01).②随着砷中毒患者皮肤病变的加重,MGMTmRNA阳性表达率逐渐降低,其表达率在非癌变组与癌变组分别为71.05%和30.43%,两组间差异有统计学意义(P＜0.01).③MGMT基因启动区甲基化阳性率升高与该基因mRNA表达降低有关联(r=0.456,P=0.01). [结论]MGMT基因启动区高甲基化是砷中毒发生发展乃至癌变发生的早期事件;MGMT基因启动区高甲基化可导致MGMTmRNA转录水平下降并可能是进一步导致蛋白活性降低的重要原因之一.
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NSCLC患者血浆p16和MGMT基因甲基化检测及临床意义
目的:检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者外周血血浆中p16基因、O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)基因启动子的甲基化状态,探讨p16、MGMT基因启动子的异常甲基化在NSCLC筛查及早期诊断中的意义.方法:利用巢式甲基化特异性聚合酶链反应法检测NSCLC患者外周血血浆p16、MGMT基因启动子的甲基化状态.结果:65例NSCLC血浆样品中分别发现19例(29.23%)p16基因启动子异常甲基化和16例(24.62%)MGMT基因启动子异常甲基化,45例正常对照血浆组未检测到p16、MGMT基因启动子的异常甲基化(P＜0.05),血浆中两基因甲基化检出率与NSCLC的分型及临床分期无明显相关性(P＞0.05).结论:利用巢式甲基化特异性PCR法检测外周血血浆中p16、MGMT基因启动子的甲基化,可为NSCLC的筛查、早期诊断及预后判断提供有价值的信息.
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DNA修复基因MGMT启动子区过甲基化与脑胶质瘤
目的 在许多肿瘤中发现启动子区过甲基化而导致O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)的转录失活,本研究拟从胶质瘤患者肿瘤组织和其对应血清中MGMT基因启动子过甲基化是否有一致性对MGMT基因启动子甲基化进行研究.方法 采用甲基化特异性PCR法(MSP)进行MGMT基因启动子区甲基化水平的检测.结果 27例胶质瘤组织中有14例(51.9%)MGMT甲基化扩增阳性,13例(48.1%)为MGMT去甲基化扩增阳性.相应的血清中有13例(48.1%)MGMT甲基化扩增阳性,14例(51.9%)MGMT去甲基化扩增阳性(P＜0.05).结论 胶质瘤患者肿瘤组织和其对应的血清中MGMT基因启动子甲基化状态具有显著相关性.测定血清中MGMT基因启动子区的甲基化状态能反应胶质瘤组织中MGMT基因启动子区甲基化状态.MSP是检测MGMT基因启动子区甲基化灵敏和可靠的方法,可以指导临床脑胶质瘤的个体化化疗方案的设计.
关键词： 胶质瘤 MGMT基因 甲基化 甲基化特异PCR检测 -
结、直肠癌中MGMT基因多位点甲基化的定量分析
目的 探讨O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)基因不同位点的甲基化与结、直肠癌发生、进展的关系.方法 应用DNA微阵列技术对20例结、直肠癌标本及癌旁组织进行MGMT基因启动子区5种高甲基化模式的定量检测分析.结果 20例样本中有17例无论是肿瘤组织还是癌旁组织其各位点均有不同程度的甲基化,且肿瘤组织启动子区各CpG位点甲基化水平均高于其对应的癌旁组织(P＜0.05),其中CpG13-15、20-23位点甲基化水平明显增高.MGMT基因各CpG位点的甲基化水平在不同的病理分级和肿瘤淋巴结转移中差异无显著性(均P＞0.05).结论 结、直肠癌中存在高频MGMT基因启动子高甲基化,且其甲基化模式不止一种.MGMT基因表型遗传性失活可能在结、直肠肿瘤发生过程中起重要作用.MGMT基因启动子的异常甲基化与肿瘤发展水平并无直接相关性.
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脑胶质瘤MGMT表达与血清和脑脊液MGMT基因启动子甲基化的相关性
目的 探讨胶质瘤患者血清、脑脊液中0-6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O-6-methylguananine-DNA methyltransferase,MGMT)基因启动子甲基化状态与肿瘤组织MGMT蛋白表达水平的相关性.方法 对76例胶质瘤患者分别采用免疫组化和甲基化特异性聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)法分别检测肿瘤组织中MGMT蛋白表达水平及血清、脑脊液中MGMT基因启动子的甲基化状态.分析血清、脑脊液中MGMT基因启动子甲基化与肿瘤组织MGMT蛋白表达水平以及肿瘤临床病理特征的关系.结果 胶质瘤患者血清、脑脊液中MGMT基因启动子甲基化阳性的检出率分别为64.5％(49/76)和73.7％ (56/76) (P =0.219).MGMT基因启动子甲基化状态与胶质瘤肿瘤分期及病理类型无显著相关性.脑脊液MGMT基因启动子甲基化状态与胶质瘤组织MGMT蛋白表达水平呈显著负相关(P ＜0.001).结论 胶质瘤患者脑脊液MGMT基因启动子甲基化状态与肿瘤组织MGMT蛋白表达密切相关,有望成为判断脑胶质瘤患者预后和预测肿瘤化疗耐药性的标志分子.
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痰标本FHIT、P16、MGMT、RASSF1A、APC基因甲基化在肺癌诊断中的作用
目的 探讨肺癌患者痰标本中FHIT、P16、MGMT、RASSF1A和APC等抑癌基因启动子异常甲基化及其联合检测在肺癌筛查及早期诊断中的价值.方法 采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)法,检测47例肺癌组织及对应的痰标本FHIT、P16,MGMT、RASSF1A和APC基因启动子区甲基化状态.24例肺良性疾病患者痰标本作为对照.结果 47例肺癌组织标本中FHIT、P16、MGMT、RASSF1A、APC基因启动子区甲基化检出率分别为40.4%(19/47)、53.2%(25/47)、36.2%(17/47)、21.3%(10/47)和38.3%(18/47);对照的痰标本中五者甲基化检出率分别为38.3%(18/47)、48.9%(23/47)、36.2%(17/47)、17.0%(8/47)和29.8%(14/47),两组甲基化检出率存在着一致性[P>0.05;κ(0.8～1.0)].24例肺良性病变痰标本中未检测到任何异常甲基化,与肺癌组比较差异有统计学意义(P<0.05).五项指标联合检测可明显提高肺癌检测的灵敏度(80.9%)和特异度(100.0%).FHIT和P16基因痰标本甲基化检出率与患者吸烟指数有相关性(P<0.05).结论 痰标本中多个肺癌相关基因甲基化联合检测有望成为肺癌筛查、早期诊断简便有效的指标.
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5-氮杂-2-脱氧胞苷联合曲古抑菌素A对胃癌细胞SGC-7901MGMT表达及NF-κB活性的影响
目的 研究5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-2′-deoxycitydine,5-Aza-dC)及曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对人胃癌细胞系SGC-7901细胞增殖、凋亡及移植瘤生长的影响,从体内、体外观察抑癌基因O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)表达,核转录因子NF-κB活性的改变,探讨5-Aza-dC联合 TSA用于胃癌临床治疗的可行性.方法 实验分对照组、5-Aza-dC组、TSA组和5-Aza-dC联合TSA组,利用CCK-8增殖试剂盒检测细胞增殖情况,流式细胞术分析细胞凋亡,RT-PCR检测各组MGMT mRNA表达,Western blot检测MGMT、NF-κB p65蛋白表达及NF-κB p65的磷酸化水平.结果 5-Aza-dC、TSA单独处理均可抑制SGC-7901细胞的生长和促进其凋亡,联合用药后效果更明显(P<0.05);与对照组相比,单药组移植瘤变化没有统计学意义(P>0.05),而联合用药组较单药组移植瘤变小;5-Aza-dC、TSA单独或联合处理SGC-7901细胞和裸鼠移植瘤后,与对照组比较,MGMT基因mRNA及蛋白表达水平均上调,联合用药比单独用药升高明显,NF-κB p65在各处理组中的表达量未发生变化,但其磷酸化程度较对照组下降,联合用药较单药下降更明显(P<0.05).结论 5-Aza-dC与TSA发挥抑制胃癌生长的作用可能是通过抑制NF-κB的活性,提高MGMT基因的转录和表达而实现的,两药联合使用的抗癌效果更加明显.
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支气管肺泡灌洗液MGMT基因甲基化检测 在非小细胞肺癌诊断中的价值
目的 探讨支气管肺泡灌洗液(BALF)中MGMT基因启动子甲基化水平对于非小细胞肺癌的诊断价值.方法 选取完成胸部手术患者98例为研究对象,经病理确诊非小细胞肺癌患者63例组成试验组,经病理确认为良性病变患者35例为对照组,分别获取试验组及对照组成员血清标本、BALF标本及活组织标本,对不同类型标本中MGMT基因启动子甲基化水平做检测.结果 非小细胞肺癌患者肺癌组织中、BALF中、血清中MGMT基因甲基化发生率分别为58.7％ 、52.4％ 和27％;肺癌组织的MGMT基因甲基化率与BALF中MGMT基因的甲基化率有较好的一致性,其与血清标本中MGMT基因的甲基化一致性较差,其判断肿瘤良恶性的敏感度低于BALF标本;35例肺良性病变对照组的肺组织标本、BALF及血清标本,均未检测到MGMT基因甲基化表达,其甲基化率为0.结论 BALF中MGMT基因甲基化检测在非小细胞肺癌的筛查诊断中具有一定的临床应用价值.
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结直肠癌患者粪便p16INK4a、MGMT、RASSF1A基因甲基化状态观察
目的 观察结直肠癌(CRC)患者粪便p16INK4a、MGMT、RASSF1A基因甲基化状态.方法 CRC患者50例(肿瘤组)、结直肠良性病变者50例(良性组)、健康体检者50例(正常组),采用甲基化特异度PCR的方法检测各组粪便p16INK4a、MGMT、RASSF1A基因甲基化检出率,并分析其与CRC临床病理参数的关系.根据肠镜病理诊断结果进行验证,比较粪便p16INK4a、MGMT、RASSF1A单独及联合检测诊断CRC的敏感度和特异度.结果 肿瘤组、良性组、正常组粪便p16INK4a基因甲基化检出率分别为74%、28%、14%,MGMT基因甲基化检出率分别为56%、24%、12%,RASSF1A基因甲基化检出率分别为72%、20%、10%,肿瘤组分别与正常组、良性组比较,P均<0.05.p16INK4a基因甲基化状态与CRC分化程度、TNM分期、淋巴结转移相关,MGMT基因甲基化状态与CRC淋巴结转移相关,RASSF1A基因甲基化状态与CRC分化程度、TNM分期、淋巴结转移相关,P均<0.05.三者联合检测诊断CRC的敏感度为95.8%,特异度为83.4%,ROC曲线下面积为0.816(95%CI 0.739%~0.894%).结论 CRC患者粪便p16INK4a、MGMT、RASSF1A基因甲基化检出率明显高于结直肠良性病变者及健康体检者,联合检测上述指标有助于CRC患者的早期诊断及其生物学行为的判断.
关键词： 结直肠癌 p16INK4A基因 MGMT基因 RASSF1A基因 基因甲基化 -
5-氮杂-2'-脱氧胞苷对肺癌SPC-A-1细胞p16、MGMT基因甲基化及其表达的影响
目的 观察5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对体外培养的肺癌SPC-A-1细胞p16、MGMT基因启动子区DNA甲基化状态及其表达的影响,探讨肺癌细胞p16、MGMT基因失活的机制及去甲基化制剂对p16、MGMT基因表达的调控.方法 5-Aza-CdR处理体外培养的肺癌SPC-A-1细胞,甲基化特异性PCR(MSP)法检测用药前后细胞p16、MGMT基因的甲基化状态,RT-PCR法检测用药前后细胞p16、MGMT mRNA.结果 加入5-Aza-CdR前,SPC-A-1细胞p16、MGMT mRNA表达缺失,其启动子区域表现为DNA甲基化.加入5-Aza-CdR后,SPC-A-1细胞中p16、MGMT基因呈现DNA去甲基化,而且表达缺失的p16、MGMT mRNA重新表达.结论 启动子区高甲基化是肺癌细胞p16、MGMT基因失活的主要原因之一,去甲基化制剂5-Aza-CdR能逆转p16、MGMT基因甲基化状态,从而调控p16、MGMT基因表达.
关键词： 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 p16基因 MGMT基因 DNA甲基化 肺癌 -
急性白血病患者p53和MGMT基因突变检测
目的:研究p53和MGMT基因突变在急性白血病发病中的意义以及p53基因突变与MGMT基因突变的关系.方法:应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术,对36例急性非淋巴细胞白血病(ANLL),26例急性淋巴细胞白血病(ALL)和23例健康对照组骨髓细胞的p53和MGMT基因突变进行了分析.结果:p53基因突变率在ANLL中为16.7%、ALL中为19.2%,MGMT基因突变率在ANLL中为1 3.9%、ALL中为1 5.4%;62例急性白血病中有4例为p53和MGMT 2个基因同时发生突变;正常对照组均未发生p53和MGMT基因突变.结论:p53和MGMT基因突变在急性白血病发生与发展中起到一定作用,急性白血病中p53基因突变和MGMT基因突变密切相关.
关键词： p53基因 MGMT基因 急性淋巴细胞白血病 急性非淋巴细胞白血病
