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上皮性卵巢肿瘤血清中RASSF1A基因异常甲基化检测及临床评价
目的：探究上皮性卵巢肿瘤血清中RASSF1A基因异常甲基化检测与临床意义。方法选择2014年2月—2016年2月于该院接受治疗的88例卵巢肿瘤患者,其中上皮性卵巢癌44例为观察组,良性肿瘤患者44例为对照组,再检测对比两组RASSF1A基因异常甲基化。结果观察组血清RASSF1A基因异常甲基化比率为56.8%显著高于对照组,差异有统计学意义,P<0.05；WHO病理II级、III级患者血清中RASSF1A基因异常甲基化比率为60.0%、81.8%均显著高于I级患者,差异有统计学意义,P<0.05；FIGO分级III~IV级患者血清中RASSF1A基因异常甲基化比率为80.0%显著高于I~II级患者,差异有统计学意义,P<0.05。结论在临床上诊断上皮性卵巢肿瘤可对RASSF1A基因异常甲基化进行检测,可为临床治疗与预后提供新思路,具有重要临床参考价值。
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孕妇血浆中胎源性RASSF1A基因在无损性产前诊断中的应用研究
本研究旨在探讨运用非性别依赖的甲基化表观遗传学标记RASSF1A基因作为孕妇血浆中循环游离胎儿DNA存在的通用性标志的可行性.采用2种方法提取孕妇血浆游离DNA,选用其中效果较好的用磁珠法提取20例标本的游离DNA;采用RT-PCR方法扩增SRY基因以及甲基化酶处理后的RASSF1A基因,且对酶处理后RASSF1A基因的扩增体系进行条件优化.结果表明,在20例标本中11例检测有SRY基因,且与胎儿出生后性别相符；选用优化后的PCR体系扩增甲基化酶处理后的RASSF1A基因,在18例标本中检测有RASSF1A基因,在2例标本中未检测到此基因.结论:甲基化RASSF1A基因与SRY基因相比,不受胎儿性别限制,可作为广泛性胎儿特异性表观遗传学标记物,用于临床无损性产前诊断.
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结直肠癌患者RASSF1A基因启动子区甲基化及表达缺失的研究
目的 检测结直肠癌组织中RASSF1A基因启动子区CpG岛甲基化状况,分析其mRNA表达缺失情况,探讨其与结直肠癌临床病理特征的关系.方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应检测31份结直肠癌组织、29份正常肠黏膜组织的RASSF1A基因启动子区甲基化程度,统计分析该基因甲基化程度与结直肠癌临床病理特征的关系;以RT-PCR检测各组中RASSF1A mRNA表达情况,统计分析该基因表达水平与结直肠癌临床病理特征的关系.结果 结直肠癌组及对照组中RASSF1A基因启动子区CpG岛甲基化发生率分别为67.7％和0.0％,两组间差异有统计学意义(P＜ 0.01);RASSF1A基因启动子区CpG岛甲基化情况与结直肠癌患者的年龄、性别、肿瘤的分化程度、分期及有无淋巴结转移均无关(P均＞ 0.05);RASSF1A mRNA在31份结直肠癌组织中有6份表达缺失(19.35％),25份表达,在29份对照组织中全部表达,两组间表达水平差异有统计学意义(P＜0.01);RASSF1A mRNA的表达水平与患者性别、年龄、肿瘤的分化程度、分期及有无淋巴结转移均无关(P均＞ 0.05).结论 结直肠癌组织中RASSFlA基因启动子区CpG岛的高甲基化与结直肠癌发生关系密切,可能是结直肠癌早期发生中的一个重要的分子机制,但与患者的年龄、性别及疾病的进展无关.
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胶质瘤患者RASSF1A基因转录表达和启动子区甲基化的研究
目的探讨RASSF1A(RAS association domain family 1A)基因mRNA表达水平和基因启动子区CpG岛甲基化程度及其与启动子甲基化的关系.方法用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测28份胶质瘤组织和4份正常脑组织中RASSF1A基因mRNA相对表达水平;用甲基化特异性PCR方法研究胶质瘤组织、正常脑组织和U251细胞株中,RASSF1A基因启动子区CpG岛甲基化状态.结果RASSF1A mRNA在4份正常脑组织中全部表达;在脑胶质瘤中表达缺失率为21.4%(6/28),且表达量低于正常脑组织,但与患者年龄、性别、肿瘤大小、恶性程度间的差异无显著意义(P＞0.05).按病理学分类,胶质母细胞瘤与少突胶质肿瘤的差异有显著意义(P=0.011).脑胶质瘤中RASSF1A基因启动子发生甲基化的频率为39.3%(11/28),正常脑组织和U251细胞株中,RASSF1A基因启动子未发生甲基化.11份启动子区甲基化的胶质瘤标本中,5份同时伴mRNA表达缺失(P=0.022).结论RASSF1A基因启动子在胶质瘤中发生异常甲基化.尽管RASSF1A mRNA在脑胶质瘤中表达缺失并不广泛,但其表达普遍下调.推测启动子区CpG岛甲基化可能是导致RASSF1A基因在胶质瘤中表达缺失或表达水平下调的一种机制.
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hMLH1和RASSF1A在食管癌组织中的表达及其与患者预后的关系
目的:探讨食管鳞癌组织中从hMLH1和RASSF1A基因表达及其对预后的影响.方法:采用原位杂交技术检测hMLH1基因、免疫组织化学法检测RASSF1A基因在60例食管鳞癌患者中的表达,应用Cox回归模型和Kaplan-Meier生存曲线分析其与患者预后的关系.结果:在食管鳞癌组织中hMLH1 mRNA表达显著低于正常黏膜组织(41.67% vs 90.00%,P<0.01),RASSF1A蛋白表达低于食管正常黏膜组织(80% vs 100%,P<0.05).hMLH1和RASSF1A的表达与TNM分期、食管癌浸润深度、淋巴结转移和肿瘤大小相关(均P<0.05),但与民族无关;RASSF1A与hMLH1表达呈正相关(r=0.338,P＜0.01);本组病例5年总生存率为35%(21/60),单因素生存分析表明,食管癌hMLH1高表达组5年生存率高于低表达组,差异有统计学意义(P<0.05);RASSF1A高表达组较低表达组有生存优势,但差异无统计学意义;Cox模型多因素分析表明,hMLH1和RASSF1A不是影响生存期的独立因素,而肿瘤浸润深度和TNM分期均是影响生存期的独立因素(P＜0.05).结论:hMLH1和RASSF1A在食管癌组织中表达均较低,其表达水平与食管肿瘤的发生发展有一定的关系,结合临床病理可作为判断预后的指标.
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原发性肝癌RASSF1A基因启动子区甲基化及其临床意义
目的 探讨原发性肝癌中RASSF1A基因启动子的甲基化水平及其与临床病理特征的关系.方法 采用MSP测定100例原发性肝癌患者的肿瘤标本及其癌旁组织、6株肝癌细胞株及10例正常肝组织RASSF1A基因甲基化状态,分析甲基化与肝癌临床病理特征的关系.采用甲基化抑制剂5-Aza-CdR处理肝癌细胞株,用RT-PCR检测RASSF1A的重新表达情况.结果 100例肝癌组织中有69例(69％)存在RASSF1A基因CpG岛的异常甲基化,癌旁组织中有15例(15％),6株肝癌细胞株有4株(4/6)发生甲基化,而正常肝组织中无RASSF1A基因甲基化存在,RASSF1A基因异常甲基化在3种组织中的发生率差异有统计学意义(x2=67.75,P＜0.001).RASSF1A基因启动子甲基化与患者乙肝表面抗原及组织分化存在一定相关性.发生甲基化的4株肝癌细胞株经甲基化抑制剂5-Aza-CdR处理后,全部重新恢复表达.结论 原发性肝癌存在RASSF1A基因CpG岛异常甲基化,并与患者乙肝表面抗原及组织分化密切相关.经甲基化抑制剂处理的肝癌细胞株又重新恢复表达,推测CpG岛的甲基化可能是导致其基因表达降低的主要原因之一.
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宫颈病变中HPV16感染状况、微卫星不稳定性及错配修复基因表达的研究
目的 通过检测HPV16、微卫星不稳定性(microsatellite instability,MSI)和错配修复基因(hMLH1、hMSH2)的表达,探讨三者在宫颈病变进展中的作用及意义.方法 将宫颈病变组织分为宫颈炎、宫颈上皮内瘤变( cervicalintraepithelialneoplasia,CIN) CIN1、CIN2～CIN3、宫颈癌4组.用PCR方法检测HPV16感染状况,用聚合酶链一单链构象多态性分析方法检测宫颈组织中MSI的表达,采用免疫组织化学SP法来检测宫颈组织中的hMLH1和hMSH2的表达,并分析三者的相关性.结果 CIN1 20例中25.0％ (5/20)检测到HPV16,CIN2～CIN3 31中54.8％ (17/31)检测到HPV16,二者比较x2=4.413,P=0.034；宫颈癌中各期HPV16感染比较,差异均无统计学意义.选取的三个微卫星位点D3S2832E、RH91127和SHGC-56838均在宫颈炎中未检测到MSI,在CIN和宫颈癌中均检测到MSI的存在.但总体的表达率较低,高只有46.7％.错配修复基因的低表达检测结果和MSI的检测结果一致,唯一不同的是前者的总体表达率较高,高的低表达率为80％；宫颈病变中MSI与错配修复基因(本文即hMLH1、hMSH2)蛋白低表达及HPV16为正相关.结论 HPV16的感染导致错配修复基因的低表达,进一步引起微卫星不稳定性,可能是宫颈癌发生、发展的重要机制,HPV16、微卫星不稳定性和错配修复基因有望作为宫颈癌高危人群的检测指标.
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肾母细胞瘤RASSF1A基因启动子区甲基化研究
目的了解肾母细胞瘤RASSF1A基因启动子区甲基化情况.方法手术获取9例肾母细胞瘤及瘤旁残留肾组织,提取DNA后用亚硫酸氢钠处理,巢式PCR扩增RASSF1A基因启动子区DNA片段,测序,检测启动子区甲基化情况.结果发现1例16个CpG岛位点中有10个存在甲基化(10/16),相应瘤旁残留肾组织无甲基化(0/16);在另1例瘤组织中检测到12个CpG岛位点存在甲基化(12/16),但仅有8个CpG岛位点与上例相同,另外4个位点不同.结论肾母细胞瘤中RASSF1A 基因启动子区存在甲基化,与瘤旁残留肾组织甲基化情况有差别.
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RASSF1A基因与乳腺癌相关性的研究进展
目的:总结RASSF1A基因作为新型的肿瘤抑制因子与乳腺癌发生发展相关性的研究现状,探讨其高甲基化在乳腺癌的早期诊断和治疗方面的研究前景和临床价值.方法:应用PubMed数据库检索系统以“RASSF1A、methylation、breast cancer和epigenetics”为关键词.检索2000-01-2012-08关于RASSF1A基因与乳腺癌相关性研究.纳入标准:1)RASSF1A基因甲基化的相关研究；2)RASSF1A基因高甲基化与乳腺癌相关性的研究.根据纳入标准,符合分析的文献35篇.结果:RASSF1A高甲基化可能是乳腺癌发生和发展中一个早期事件.RASSF1A高甲基化水平在乳腺癌临床诊断中具有较高的阳性率(57％～85％)；逆转RASSFIA基因启动子CpG岛高甲基化可成为乳腺癌药物治疗的新方向.RASSF1A基因在乳腺癌诊断和治疗等方面正在得到越来越广泛的研究和应用.结论:RASSF1A基因与乳腺癌的发生发展密切相关,可用于乳腺癌的早期诊断及治疗.
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急性髓系白血病RASSF1A基因启动子区异常甲基化临床意义研究
目的 RASSF1A基因异常甲基化可能参与血液肿瘤的发生,并为微小残留疾病(minimal residual de-sease,MRD)监测、分层、预后评估及靶向治疗提供依据.本研究旨在分析RASSF1A基因启动子区异常甲基化在急性髓系白血病(acutemyeloid leukemia,AML)中的临床意义.方法 选取2005-01-01-2013-03-01解放军总医院(113例)以及第一附属医院(39例)住院患者和门诊体检患者,共152例AML患者骨髓标本以及15例健康供者骨髓标本纳入本项研究.提取基因组DNA,并进行DNA硫化修饰;设计重亚硫酸盐测序PCR(bisulfite sequencing PCR,BS-PCR)引物以及甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MS-PCR)引物,进行PCR扩增,进而电泳分析以及DNA序列分析.同时对RASSF1A高甲基化组以及低甲基化组的血液学特点、骨髓原始细胞比例、细胞遗传学异常、基因异常、完全缓解率和总生存期进行统计学分析.结果 MS-PCR分析结果显示,RASSF1A基因在15例健康人中呈完全非甲基化状态,在152例AML患者中有38例出现启动子区高甲基化状态,其甲基化阳性率为25％.4例MS-PCR阳性AML患者经BS-PCR测序分析后,显示RASSF1A甲基化率分别为88.2％、85.5％、78.6％和92.7％,而在4例MS-PCR阴性患者RASSF1A基因启动子区甲基化率分别为10％、11.8％、12.7％和6.8％,4例健康供者RASSF1A基因启动子区甲基化率分别为5.0％、9.1％、8.2％和7.3％.进而通过统计学分析发现携带RASSF1A基因高甲基化的AML患者易合并存在ASXL1基因突变或DNMT3A基因突变.携带RASSF1A基因高甲基化的AML患者,其无进展生存期以及总生存期较短.结论 RASSF1A基因启动子区异常甲基化可能参与AML的发生,同时可能为AML分层诊治以及预后评估提供分子理论依据.
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肺癌患者血浆p16和RASSF1A基因启动子区甲基化检测诊断意义分析
目的:探讨肺癌患者外周血浆p16、Ras相关区域家族1A(Ras association domain family 1A,RASSF1A)抑癌基因启动子区异常甲基化与肺癌的关系,以及甲基化检测在肺癌诊断中的意义.方法:采集2010-07-10-2013-12-20内蒙古医科大学附属医院健康体检自愿者和肺癌患者各130例的血浆标本,甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)法检测标本中p16和RASSFlA基因启动子区甲基化状态.结果:在130例肺癌患者血浆中,51例(39.2％)p16基因启动子异常甲基化,56例(43.0％)RASSF1A基因启动子异常甲基化;在130例正常对照血浆中,p16、RASSF1A基因启动子的异常甲基化分别为2例(1.53％)和1例(0.77％),差异有统计学意义,P＜0.001.结论:p16和RASSF1A抑癌基因启动子区甲基化与肺癌的发生、发展关系密切.利用MSP法检测外周血血浆中p16和RASSF1A基因启动子区的甲基化在肺癌早期诊断中有一定的应用价值.
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非小细胞肺癌患者血清Ras相关区域家族1A基因启动子异常甲基化检测及其临床意义
目的 研究非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清Ras相关区域家族1A(RASSF1A)基因启动子区域的甲基化状态及其临床意义.方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)技术,检测75例NSCLC患者血清RASSF1A基因启动子区域的甲基化状态,并分析其与临床病理参数之间的相关性.结果75例NSCLC患者血清RASSF1A基因启动子区域异常甲基化检出率为30.7%(23/75),而35例肺部良性疾病患者和15例健康志愿者中检出率均为0,差异有统计学意义(P＜0.001).RASSF1A启动子异常甲基化与NSCLC患者的年龄、性别、病理类型无显著相关性,但在晚期及肿瘤分化程度较低的患者中检出率较高(P＜0.05).结论 RASSF1A启动子异常甲基化在NSCLC的发生、发展中起重要作用,有望成为NSCLC辅助诊断和预后判断的分子标记.
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宫颈癌中RASSF1A基因高度甲基化及微卫星变异的研究进展
新近克隆出来的Ras相关区域家族1A基因(RASSF1A)已被确认为一种候选抑癌基因(TSGs),位于人类染色体3p21.3上.RASSF1A基因失表达见于多种人类肿瘤中,如肺癌、乳腺癌、肝癌、宫颈癌、肾癌等,表明了其在致癌作用中的重要性.高度甲基化和微卫星变异(microsatellite alterations)是导致RASSF1A基因失活的主要机制,其参与了细胞凋亡信号的转导、微管的稳定作用和有丝分裂的进程,作为一种Ras负向调节因子阻止细胞生长,诱导细胞凋亡,促进肿瘤的发生和发展.宫颈癌中存在RASSF1A基因的表达缺失,且与人乳头状瘤病毒(HPV)感染之间存在一定的相关关系.
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口腔粘膜癌前病变及鳞癌中RASSF1A基因甲基化与表达的研究
目的 研究RASSF1A基因甲基化状态及其基因表达异常与口腔癌前病变及鳞癌发生发展的关系.方法 采用甲基化特异性PCR(MSPCR)技术检测了10例正常口腔粘膜、8例上皮单纯增生、20例上皮异常增生、32例鳞癌组织中RASSF1A基因甲基化状况;运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)研究口腔粘膜癌前病变及鳞癌组织中RASSF1A基因mRNA的表达水平.结果 10例正常口腔粘膜无甲基化,且RASSF1A基因mRNA呈100%表达;8例上皮单纯增生中,有1例甲基化,1例RASSF1A mRNA表达下降;20例上皮异常增生中,有3例甲基化,5例RASSF1A mRNA表达下降;32例鳞癌组织中,有13例甲基化,占40.63%,15例RASSF1A mRNA表达下降或无表达,占46.88%.结论 RASSF1A基因甲基化是口腔癌癌变的早期事件,与口腔鳞癌的发生发展有关.RASSF1A基因甲基化与RASSF1A基因转录抑制高度相关.
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两种提取孕妇血浆游离胎儿DNA方法的比较
目的 分别应用两种方法进行血浆游离胎儿DNA的提取,判定及筛选佳的血浆游离胎儿DNA的提取方法,为后续试验提取游离胎儿DNA的方法提供参考依据.方法 收集30例健康妊娠孕妇血浆,用离心柱法和磁珠法进行血浆游离DNA的提取,经甲基化敏感限制性内切酶BstUI酶切后使用微量紫外分光光度计测量所提取的游离胎儿DNA的含量及纯度,再使用实时荧光定量PCR扩增方法测定扩增效率,进行统计学分析.结果 离心柱法所提取的游离胎儿DNA的测定结果为:含量(43.27±21.01)ng/μl;纯度A260/A280 (0.999 7±0.084 42);扩增效率为94％;而磁珠法提取的游离胎儿DNA的测定结果为:含量(31.74±12.25) ng/μl:纯度A260/A280 (0.878 3±0.052 66);扩增效率为87％.两组方法提取游离DNA的浓度、纯度比较,差异有统计学意义(均P＜0.05).结论 离心柱法比磁珠法操作更简便、快捷.经测定提取的DNA的浓度及纯度,扩增效率后可判断离心柱法所提取的游离胎儿DNA的浓度、纯度及扩增效率都远远优于磁珠法;离心柱法比磁珠法更适用于后续无创产前诊断研究试验.
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结肠癌中RASSF1A基因启动子甲基化及其临床意义
本研究探讨结直肠癌组织中RASSF 1A 基因启动子甲基化和mRNA表达异常与结直肠癌病理生物学特征的关系,为阐明抑癌基因RASSF 1A 基因在结直肠癌发生发展中作用及其分子机理提供有力科学实验依据.
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喉鳞状细胞癌中RASSF1A基因启动子区甲基化及蛋白表达
目的:探讨RASSF1A基因启动子区甲基化与喉癌的关系.方法:运用甲基化特异性PCR,检测RASSF1A基因在48例喉癌组织、相对应癌旁组织及48例正常人外周血中的启动子区甲基化情况.用Westernblotting方法检测喉癌组织、癌旁组织及正常人外周血中RASSF1A表达情况.结果:在48例喉癌组织、相对应的癌旁组织和48份正常人外周血中,RASSF1A基因启动子区分别有34例(70.83%)、11例(22.92%)和6例(12.50%)发生了甲基化,喉癌组织甲基化程度明显高于癌旁组织和正常人外周血(P＜0.05).在48例喉癌组织中27例(56.25%)不能正常表达RASSF1A蛋白,而相对应癌旁组织中仅有8例(16.67%),喉癌组织中RASSF1A蛋白的表达程度明显低于癌旁组织(P＜0.01).启动子区发生甲基化的34例喉癌组织中共有25例(73.53%)呈弱阳性,而7例未发生甲基化的喉癌组织中为1例(14.29%),两组间比较差异具有显著性(P＜0.05).结论:RASSF1A基因启动子区甲基化与喉癌的发生有关,有望成为喉癌诊断的分子标志.
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RASSF1A和Runx3基因启动子区甲基化在胃癌组织中的表达及意义
目的:检测胃癌组织中RASSF1A和Runx3基因启动子区甲基化状态,探讨二者与胃癌发生发展的关系.方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测57例胃癌组织和相应癌旁组织及30例正常胃黏膜组织中RASSF1A和Runx3基因启动子区甲基化状态.结果:RASSF 1A和Runx3甲基化在正常组未见表达.胃癌组RASSF1A基因甲基化率为64.9％(37/57),明显高于癌旁组的7.0％(4/57),差异有统计学意义(P＜0.05),胃癌组Runx3基因甲基化率为49.1％(28/57),明显高于癌旁组5.3％(3/57),差异有统计学意义(P＜0.05).胃癌组RASSF1A和Runx3基因甲基化率为68.4％(39/57),明显高于癌旁组的8.8％(5/57),差异有统计学意义(P＜0.05).结论:RASSF1A和Runx3基因启动子区高甲基化与胃癌的发生密切相关,有望为胃癌的早期诊治提供理论依据.
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RASSF1A基因在乳腺癌组织中的表达及意义
目的 探讨RASSF1A基因mRNA在乳腺癌组织中的表达与乳腺癌临床病理特征的关系.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测40例乳腺癌组织和15例乳腺良性病变即乳腺增生病组织中RASSF1A mRNA的表达水平.结果 ①RASSF1A mRNA在乳腺增生病组织中全部表达,在40例乳腺癌组织中有21例表达缺失,缺失率为52.5%;②在乳腺癌组织中淋巴结有转移者RASSF1A mRNA的表达率明显低于淋巴结无转移者,RASSF1A mRNA的表达缺失与淋巴结转移呈负相关(P<0.05);与年龄、组织学分级及雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及CerbB-2蛋白的表达没有明显的相关性(P>0.05).结论 RASSF1A基因表达缺失可能与乳腺癌的发生、发展过程及其预后存在着一定的相关性.
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RAS相关区域家族1A基因甲基化对肝细胞癌患者术后预后的预测价值
目的 探讨RAS相关区域家族1A基因(RASSF1A)甲基化对预测行肝细胞癌手术切除术后患者预后的价值.方法 纳入260例行手术切除的肝细胞癌患者,留取其肝细胞癌组织和距病变外缘2 cm处的癌旁组织,并收集其临床病理资料.采用甲基化特异性PCR方法检测肝细胞癌组织和配对的癌旁组织中RASSF1A的甲基化状态.采用卡方检验分析RASSF1A甲基化的表达率及其与临床病理特征的关系.采用Log-rank检验分析RASSF1A甲基化与总生存率的关系.采用单因素和多因素Cox回归分析确定肝细胞癌预后的影响因素.结果 260份肝细胞癌组织和配对的癌旁组织中,214份(82.3％)的肝细胞癌组织中存在RASSF1A基因启动子区异常甲基化,配对的癌旁组织中有101份(38.8％)发生甲基化,差异有统计学意义(x2=102.824,P＜0.01).RASSF1A甲基化与肝细胞癌患者的年龄、性别、是否肝硬化、AFP水平、肿瘤大径、巴塞罗那临床肝癌(BCLC)分期、是否HBV感染、是否吸烟、是否饮酒之间均无相关性(P均＞0.05).RASSF1A甲基化阴性患者的5年生存率为93％,RASSF1A甲基化阳性患者的为51％,两者的总体生存率差异有统计学意义(x2=26.556,P＜0.01).单因素和多因素Cox回归分析发现,肝硬化、BCLC分期和RASSF1A甲基化是肝细胞癌患者术后死亡的主要影响因素(Wald值分别为16.767,8.791,16.286;P均＜0.01).结论 RASSF1A甲基化不仅是肝细胞癌患者行手术切除术后生存率的预测因子之一,而且也是肝细胞癌的独立预后因素.
