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微流控芯片电泳在食品安全分析检测中的应用研究
微流控芯片技术是一种微量分析技术。文章介绍了微流控芯片技术的制备材料、分类,综述了该技术在食品安全检测方面的研究进展。
食品安全分析检测是控制食品安全的重要手段,传统的食品安全检测技术往往依靠昂贵的仪器,专业的操作人员,且试剂和样品用量大,难以满足食品检测的微量化、集成化、便携化的检测需要。 -
微流控芯片电泳技术检测肿瘤患者血浆中p16基因甲基化的应用
p16基因甲基化是癌症诊断的标志物之一.目前检测p16基因甲基化的甲基化特异性聚合酶链反应法(MSP)[1]灵敏度有限,对血浆中脱落肿瘤细胞少的标本易报告为假阴性.而微流控芯片电泳技术具有高灵敏度、成本低、分析速度快等特点[2].本研究用微流控芯片电泳技术检测肿瘤患者血浆中p16基因异常甲基化,并探讨其临床应用价值.
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Apo CⅢ基因多态性在中国汉族健康人群中的分布特点及与不同种族人群的比较
目的 探讨中国南通地区汉族人群载脂蛋白CⅢ(Apo CⅢ)基因多态性在健康人群中的分布特点,并与不同种族进行比较研究.方法 收集中国南通地区74名无血缘关系健康个体的静脉血提取DNA,应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)结合微流控电泳技术,分别分析Apo CⅢ基因T-455C和C-482T的多态性.结果 中国汉族人群Apo CⅢ-455C等位基因频率明显低于印度和哥斯达黎加人群(P<0.01),与高加索和法国人群相似;中国汉族人群Apo CⅢ-482T等位基因频率明显高于法国人群(P<0.01),与印度和高加索人群相似.结论 Apo CⅢ基因T-455C和C-482T的多态性在健康人群分布具有种族差异.
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微流控芯片电泳测定血清小而密低密度脂蛋白及临床应用价值
目的 建立微流控芯片电泳分离血清小而密低密度脂蛋白(sdLDL)的方法并探讨其临床应用价值.方法 利用自制的微流控芯片,选择tricine缓冲液为电泳缓冲液,SDS作为添加剂,电泳分离经硝基苯并噁二唑-C6-酰基鞘胺醇(NBD C6-ceram-ide)预染的脂蛋白,激光诱导荧光技术检测.结果 大而轻低密度脂蛋白(ILDL)、sdLDL、极低密度脂蛋白(VLDL)和高密度脂蛋白(HDL)在3 min内得到有效分离.冠心病(CHD)组,sdLDL检出率显著高于正常对照组(P<0.01).CHD患者血清经连续3次分析,sdLDL出峰时间和峰面积相对标准差分别为2.18%和2.94%.sdLDL阳性组TG水平增高,HDL-C水平降低,均与阴性组存在显著差异(P<0.01和P<0.05).CHD患者sdLDL与三酰甘油(TG)、载脂蛋白B(apoB)呈正相关(r=0.82和0.79,P<0.0001).结论 微流控芯片电泳可望成为sdLDL的常规分析手段,用于CHD危险性的评估.
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高密度脂蛋白亚类的检测方法
高密度脂蛋白(high density iipoprotein,HDL,)是一种由脂质和蛋白构成的在形状、密度、颗粒大小、电荷和理化特性等方面具有较大异质性的一类脂蛋白.HDL具有抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)作用已无争议[1].
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APRIL siRNA表达载体构建、微流控芯片筛选及转染优化
目的:构建增殖诱导配体(APRIL)异构体特异性siRNA质粒载体,利用微流控芯片电泳筛选APRIL异构体特异性siRNA表达质粒.方法:以高表达APRIL的人结肠癌细胞株SW480为肿瘤细胞模型,选择APRIL异构体特异性siRNA序列,微流控芯片电泳筛选siRNA表达质粒并经测序后转染SW480细胞,半定量RT-pCR法检测瞬时转染前后SW480细胞中APRILmRNA水平.结果:成功构建hOligo637、hOligo1450、hOligo1534、hOligo1750.微流控芯片电泳成功分辨出被双酶切的插入片段.瞬时转染SW480细胞后均产生特异性的mRNA抑制效应.结论:采用微流控芯片电泳成功筛选出APRIL为靶点的siRNA质粒,并可广泛应用于筛选siRNA质粒.
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毛细管电泳与微流控芯片电泳快速检测粪便中腺病毒的方法建立
目的 建立粪便中腺病毒的PCR-毛细管电泳-激光诱导荧光和PCR-微流控芯片电泳-激光诱导荧光快速检测方法.方法 采用试剂盒法提取粪便中腺病毒DNA,选择腺病毒六邻体基因保守区域进行PCR扩增反应.PCR产物分别用高灵敏度的SYBR Gold和SYBR Orange核酸荧光染料进行标记,在优化的毛细管电泳和微流控芯片电泳条件下分离,采用激光诱导荧光检测特异性PCR扩增产物.结果 腺病毒扩增产物在优化的毛细管电泳和微流控芯片电泳条件下可分别于9 min和6 min内完成检测.将PCR扩增产物测序,并与NCBI基因库中核酸序列比对,结果表明所选用的扩增序列特异性良好.商品化DNA Marker毛细管电泳和微流控芯片电泳对目标DNA片段bp值求得的日内精密度分别为1.14%~1.34%和1.18%~1.48%,日间精密度分别为1.27%~2.76%和2.85%~4.06%.毛细管电泳-激光诱导荧光法和微流控芯片电泳-激光诱导荧光法检测腺病毒的灵敏度分别为2.33×102 copies/mL和2.33×103 copies/mL.两种方法用于实际粪便样品测定,准确度高.结论 本研究建立的PCR-毛细管电泳-激光诱导荧光和PCR-微流控芯片电泳-激光诱导荧光检测方法能够快速、灵敏、准确地检测出粪便中的腺病毒.