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氡吸入染毒动物模型建立中的体会
气管-支气管上皮细胞是氡生物效应的靶细胞,但由于受到染毒装置等条件的限制,过去多进行体外研究.本实验室利用HD-3型多功能氡室,建立了大鼠动态吸入染毒的模型,为后续研究打下了良好的基础.现将动物模型建立过程中的注意事项和体会小结如下.
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9-顺维甲酸对人肺鳞癌细胞维甲酸受体转录的影响
维甲类是一组天然和人工合成的结构和功能与维生素A类似的物质,主要通过调节基因转录效率,在细胞增殖、分化及凋亡等方面发挥生理作用,而其作用是通过相应受体介导来完成的。研究发现,全反式维甲酸(ATRA)能抑制支气管上皮细胞的生长和鳞状分化,但这种作用在肺癌的形成中消失,体外实验大多数人肺癌细胞株对ATRA有显著的抗性作用。我们采用ATRA的一种立体异构体一9-顺维甲酸(9-cis-RA)处理L78和A2人肺鳞癌细胞株,在观察9-cis-RA对人肺鳞癌细胞的生长抑制、分化和凋亡和诱导作用的基础上,进一步探讨了9-cis-RA处理前、后肺癌细胞中RAR(RARα、RARβ、RARγ)和RXRs(RXRα、RXRβ、RXRγ)的表达及其与细胞生长、分化和凋亡的作用关系。 结果证实:①9-cis-RA对L78和A2两肺鳞癌细胞株的生长具有抑制作用,其生长抑制作用在两肺鳞癌细胞株间有差异。②9-cis-RA对L78和A2两肺鳞癌细胞株具有明显的诱导分化、凋亡作用,且与9-cis-RA的浓度高低有关。两细胞株高凋亡率的出现有时相差异。③9-cis-RA对L78和A2肺鳞癌细胞株的某些维甲类受体如RARα、RARβ、RXRα有转录激活作用,而对其他受体亚型:RARα、RARβ和RXRα的作用不明显,且L78和A2对9-cis-RA作用后的受体转录反应有差异。 本研究提示:9-cis-RA对两肺鳞癌细胞株具有抑制生长、诱导分化、促进凋亡的生物学作用,且激活相关RARs、RXRs基因的表达,对进一步探讨9-cis-RA对肺癌细胞的生物学作用机制及肺癌的临床治疗提供了重要的理论基础
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适用于老人的排痰法
痰是气管里的黏液、炎性渗出物中的白细胞、脱落的气管上皮细胞以及各种致病菌的混合物.在人体呼吸道黏膜上分布着许多黏液腺和富含有黏液腺的杯状细胞,时刻不停地分泌黏液以保持呼吸道的湿润.同时,人呼吸道黏膜上皮表面还长有一层纤毛,有规律地摆动,将呼吸道的分泌物、外来异物、灰尘搜集一起咯出体外,便是痰.这种痰一般为黏液痰、泡沫痰.患支管炎、肺气肿或肺脓疡等疾病时,黏膜上皮细胞纤毛摆动减弱,甚至丧失,黏液腺和杯状细胞分泌过多的黏液潴留在气管内,为细菌的生长繁殖创造条件,此时的痰液多为黄色黏稠痰.
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叶酸、维甲酸对胃癌前病变、胃癌的逆转作用及抑癌机制
近年来,应用叶酸、维甲酸对胃癌前病变、胃癌的逆转治疗越来越受到众多学者的青睐。许多研究表明,叶酸、维甲酸对胃癌前病变、胃癌有逆转作用,而对其抑癌机制从不同角度进行探讨。本文就叶酸、维甲酸对胃癌前病变、胃癌的逆转治疗和作用机制的研究进展作如下综述。 1 叶酸对胃癌前病变、胃癌的逆转和细胞凋亡的影响1.1 叶酸对胃癌前病变、胃癌的逆转作用近年来,肿瘤与维生素的关系是临床医学研究的热点之一。叶酸(Folic acid,FA)是水溶性维生素,研究证实它可以逆转慢性萎缩性胃炎而阻断胃癌的发生。叶酸与异型增生和癌变关系的研究早在60年代就有报道,但直到1982年后才有较大的进展。1983年Swinson等[1]提出,约有9%~11%的肠恶性病变伴有叶酸缺乏。1987年Heimburger[2]研究提示,组织局部性叶酸缺乏与某些肿瘤的发生有关。1988年Heimburger报道了支气管上皮细胞异型增生经叶酸及Vit B12治疗后可发生逆转或得到明显改善。Lashner等[3]报道叶酸治疗与溃疡性结肠炎患者的癌肿低发生率有关。胃粘膜萎缩、肠上皮化生和异型增生与胃癌发生的相关性已得到大多数学者的认可。用叶酸对慢性胃炎的萎缩、肠化、异型增生证明在组织学上有改善和逆转作用。而且叶酸也能明显地改善病人的消化不良症状[4,5]。燕蓉军等[6]研究叶酸对乙基硝基亚硝基胍(ENNG)致犬胃癌前病变和胃癌生长的干预作用。猎犬6条分为叶酸组和非叶酸组。叶酸组给予叶酸(20mg/d),定期胃镜观察胃粘膜改变和胃癌发生情况,并做病理检查。结果叶酸组胃粘膜炎症、萎缩、不典型增生明显比非叶酸组轻(P<0.05,P<0.01),其中1条犬发生胃癌;非叶酸组3条犬均发生胃癌。表明叶酸可以通过减轻胃粘膜炎症、萎缩和不典型增生,从而延缓或终止癌的发生。
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多种酶消化法分离培养气管上皮细胞方法的比较
目的比较4种不同的酶消化法在培养气管上皮细胞中的异同,改进气管上皮细胞的培养技术,为组织工程气管提供理论种子细胞.方法Dispase冷消化法(使用0.1%Dispase 4℃消化18 h后使用0.25%的胰酶37℃消化10 min)、胰酶冷消化法(0.25%胰酶4℃消化18 h)、Dis-pase温消化法(0.25%Dispase 37℃消化10 min后使用0.25%胰酶37℃消化5 min)及胰酶温消化法(0.25%的胰酶37℃消化10min),用4种消化法分离、培养兔气管上皮细胞,测定分离细胞的数量、纯度及成活率.结果4种方法所得细胞数量分别为:(430 600.00±628.49、430 780.00±580.52、430 900.00±200.00、430 640.00±931.67),差异无统计学意义(P<0.05).Dispase冷消化法较其他3种方法得到的气管上皮细胞纯度高,细胞状态好.结论Dispase冷消化法较其他3种方法所得细胞纯度高、细胞成活率高,是一种较好的气管上皮细胞体外分离培养方法.
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胰酶冷消化加刮刷法分离培养气管上皮细胞的实验研究
目的:改进气管上皮细胞的培养技术.方法: 采用胰酶冷消化加刮刷法分离兔气管上皮细胞,测定分离细胞的数量、纯度及成活率,并与机械剥离加酶消化法、酶温消化加刮刷法进行比较.同时比较无血清与有血清培养方法对上皮细胞纯度、融合时间的影响.结果:(1)胰酶冷消化加刮刷法分离所得上皮细胞的数量[(8.217±0.443)×106 cells/只]明显高于机械剥离加酶消化法[(2.198±0.533)×106 cells/只], P<0.01;成活率(91.730%±1.532%)明显高于机械剥离加酶消化法(86.29%±0.46%)和胰酶温消化加刮刷法(83.07%±1.80%),均P<0.05;纯度(94.08%±2.70%)接近机械剥离加酶消化法(97.02%±0.51%),P>0.05,但明显高于胰酶温消化加刮刷法(88.900%±1.304%),P<0.05.(2)无血清组在培养第3 d(95.0%±0.0%)、第5 d(95.3%±0.3%)、第7 d(95.3%±0.3%)气道上皮细胞纯度显著高于有血清组(90.1%±0.8%, 84.7%±1.6%和83.0%±0.9%),P<0.01;且细胞生长融合时间(6-7 d)明显早于有血清组(12-14 d).结论: 胰酶冷消化加刮刷法是一种经济、简便、高效的兔气管上皮细胞体外分离培养方法,无血清培养可以提高培养上皮细胞的纯度,促进细胞融合.
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人α-防御素HNP1基因在气管上皮细胞的转染表达
已有报道将HNP1 cDNA重组到pBabe/neo质粒载体中,并转染体外培养的无内源防御素的小鼠巨噬细胞系,结果检测到HNP1 mRNA的表达,同时发现这些巨噬细胞的抗菌活性得到了增强.
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细胞粘附分子与哮喘
哮喘是一种气道慢性炎症性疾患,有多种细胞特别是肥大细胞、嗜酸性粒细胞和T细胞参与并由多种细胞因子参与调节的复杂过程,由这种特殊炎症造成了气道的高反应性和炎性阻塞性病变.其中炎性细胞的浸润机制已成为近年来研究的热点,而血管内皮细胞、气管上皮细胞及白细胞表面表达的细胞粘附分子在形成哮喘中的作用,已引起人们广泛的关注.近年来有报道哮喘发作时,气道粘膜中中性粒细胞、嗜酸性粒细胞及淋巴细胞的浸润与毛细血管内皮细胞特异性粘附分子的表达、增多相平行(1).
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酪氨酸激酶抑制剂对气管上皮细胞生长的影响
目的探讨酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosine kinase inhibitor,TKI)对培养气管上皮细胞生长的影响.方法通过MMT法、3H-胸腺嘧啶(3H-TdR)掺入法及流式细胞计数,观察3种TKIs:Tyrphostin AG1478、Genistein(Sigma)及金转停对原代培养的大鼠气管上皮细胞增殖、周期及凋亡的影响,以及TKIs对表皮生长因子(EGF)的阻断作用.结果MTT法显示3种TKI均对气管上皮细胞的生长具有时间和剂量依赖性抑制作用,同时,TKI阻断EGF对气管上皮细胞生长的刺激作用,3种TKIs的作用无明显差异;1μmol/L的Tyrphostin AG1478、Genistein及金转停分别使气管上皮细胞的TdR掺入率降低18.3%、20.9%及19.7%,与MTT比色法结果一致.同时,Tyrphostin AG1478不仅加速气管上皮细胞的凋亡而且阻止细胞有丝分裂.TKIs可阻断表皮生长因子(EGF)对气管上皮细胞生长的刺激作用.结论TKIs不仅抑制对原代培养的大鼠气管上皮细胞的生长,加速其凋亡,而且可阻断EGF对气管上皮细胞生长的刺激作用,3种抑制剂的作用无明显差异.
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γ-氨基丁酸A受体与哮喘关系的研究进展
支气管哮喘是由多种细胞和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病,随着病情的进展可产生不可逆的气道狭窄和气道重塑[1].目前支气管哮喘的病理生理变化还不十分清楚.研究发现支气管上皮细胞存在γ-氨基丁酸(GABA)合成酶GAD65/67及γ-氨基丁酸受体(GABAR),构成完整的GABA系统,与肺生理功能如气道黏液过度分泌、气道平滑肌的收缩、气道重塑等有密切关系.GABA受体分为A型、B型和C型,GABAA受体属于受体门控通道超家族[2].本文就GABAA受体在肺部的生理学特征及其对哮喘的影响作一综述,旨在了解GABA系统在肺部表达的意义.
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表皮生长因子受体拮抗剂对气道上皮细胞生长及修复的影响
目的探讨表皮生长因子受体拮抗剂Tyrphostin AG1478对培养的气管上皮细胞生长以及修复的影响.方法用MTT法测定不同浓度(0.1、0.2 、1.0 、2.5及10 μmol/L)的Tyrphostin AG1478对原代培养的大鼠气管上皮细胞增殖的影响;同时,机械刮除一定面积的上皮细胞,观察Tyrphostin AG1478 2.5 μmol/L与低血清培养基两种不同的处理24 h后刮除细胞面积的变化.结果 Tyrphostin AG1478对气管上皮细胞的增殖具有浓度依赖性抑制作用;Tyrphostin AG1478 2.5 μmol/L处理组与低血清培养基组比较刮除细胞面积明显增大,P<0.001.结论 Tyrphostin AG1478所抑制原代培养的大鼠气管上皮细胞的生长,并抑制其损伤的修复.
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RT-PCR法检测HNP1基因在气管上皮细胞转染后的表达
采用脂质体转染法将人中性粒细胞防御素(HNP1)的cDNA重组真核表达质粒pBabe-Neo-HNP1导入无血清培养的人和兔的气管粘膜上皮细胞,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,在核酸水平检测HNP1在气管上皮细胞的表达.结果:在人和兔的转染上皮细胞中均可检测到HNP1mRNA的表达,而在未转染的上皮细胞中RT-PCR检测结果呈阴性.这一结果与作者先前用免疫组化法在蛋白质水平上检测的结果一致,并证明pBabe-Neo-HNP1转染至气管粘膜上皮细胞后能得到有效表达.
关键词: 防御素 气管上皮细胞 基因转染 逆转录-聚合酶链反应 -
CYFRA21-1检测在肺癌诊断治疗中的临床意义
CYFRA21-1是细胞角蛋白19(CK19)的片段,主要分布于单层上皮细胞,如支气管上皮细胞等.有文献报道,非小细胞肺癌患者血清中CYFRA21-1升高.本研究利用放射免疫方法,对61例肺癌患者作CYFRA21-1检测进行对比研究,报告如下.
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支气管哮喘与支气管上皮细胞
关于哮喘的发病机理,目前已形成这样一个概念,即细胞因子是细胞间相互作用的"信使",粘附分子是细胞间作用的"桥梁",炎性介质则是细胞发挥作用的"效应物质"[1].作为一线生理屏障的支气管粘膜上皮细胞在哮喘气道炎症中起了十分重要的作用,它参与支气管哮喘发病过程.现就支气管上皮细胞在哮喘发病过程中的作用作一综述.
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反式-BPDE诱发人胎气管上皮细胞p53基因突变的研究
目的:探讨苯并(a)芘在人肺癌发生中的作用.方法:用苯并(a)芘的代谢产物反式-BPDE,作用于体外培养的人胎气管上皮细胞8~12周后,用PCR-SSCP方法检测p53抑癌基因第6,7,8外显子的点突变情况.结果:经反式-BPDE处理的人胎气管上皮细胞,p53第7,8外显子有点突变,而这些细胞都未出现典型的转化细胞形态特征的改变.结论:反式-BPDE可诱发人胎气管上皮细胞p53基因点突变,此抑癌基因的点突变早于细胞形态学的改变.
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警惕肺癌偷袭
肺癌的主要发病原因肺癌是肺组织支气管上皮细胞或肺泡上皮细胞恶变后形成的癌细胞,癌细胞进一步生长扩大形成癌肿,可向四周乃至全身扩散.肺癌的主要发病原因有:
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慢性阻塞性肺病合并肺癌的漏诊、误诊的原因分析
讨论
慢性阻塞性肺疾病是呼吸系统疾病中常见病多发病,慢性阻塞性肺疾病易于发生肺癌的原因,可能与以下因素有关:1.吸烟,烟草中含有焦油苯并、亚硝胺、环芳烃等致癌物质,吸烟不仅可引起慢性支气管炎,而且促发支气管上皮细胞腺瘤样增生恶变倾向。2.慢性阻塞性肺病患者炎症反复发作,易导致支气管粘膜上皮增生变异,气管壁的损伤-修复过程反复发生,进而引起气管结构重塑、胶原含量增加及瘢痕形成,肺纤维化、上皮组织过度增生,使上皮细胞对致癌原敏感而促成癌变。3.慢性阻塞性肺疾病患者长期使用糖皮质激素治疗,糖皮质激素有免疫抑制效应,能拮抗巨噬细胞分化及杀灭癌细胞活性。综上,老年,男性、吸烟、慢性阻塞性肺疾病反复感染及炎症刺激等可能对肺癌的发生起综合协同作用,从而导致COPD患者并发肺癌几率较一般人群高。因此,笔者认为慢性支气管炎、肺气肿是肺癌的重要病因或癌前病变。