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丹参酮ⅡA抑制主动脉瓣成肌纤维细胞向成骨细胞样表型转化的机制
心脏瓣膜钙化是与多种病因有关、由心脏瓣膜细胞主动调节的病理生理过程.该研究以体外培养的猪主动脉瓣成肌纤维细胞作为研究对象,用与心脏瓣膜钙化有关的病理因素肿瘤坏死因子α(TNF-α) 50 μg·L-1处理细胞,将50 mg·L-1丹参酮ⅡA磺酸钠(TSN)与TNF-α共同孵育细胞72 h(3 d),120 h(5 d).采用Western blotting技术和Real-time PCR技术分别检测细胞中的平滑肌α肌动蛋白(α-SMA)、骨样表型相关的骨形成蛋白2(BMP2)、碱性磷酸酶(ALP)和Wnt/β-catenin信号通路上的关键效应蛋白GSK-3β,β-eatenin基因表达的变化.研究发现,TNF-α能使成肌纤维细胞α-SMA的表达明显增加而成为有转化活性的细胞;骨相关蛋白BMP2,ALP的蛋白和mRNA在对照组和TSN组几乎没有表达,而在TNF-α组表达显著增加(P＜0.01),呈现出成骨细胞样表型;Wnt/β-catenin信号通路中的上游调节蛋白GSK-3β的蛋白及mRNA表达在TNF-α组显著下调(P＜0.01),关键效应蛋白β-catenin的蛋白表达显著增加,但mRNA与对照组、TSN组比较没有明显差异;TSN对TNF-α的这种病理性影响可以起到一定的抑制作用(P＜0.05),并且存在时间依赖性效应(P＜0.05).炎性因子TNF-α可能通过激活心脏瓣膜成肌纤维细胞中的Wnt/β-catenin信号通路,促使心脏瓣膜成肌纤维细胞向成骨细胞样表型转化,进而导致心脏瓣膜的钙化.丹参酮ⅡA能够通过影响GSK-3β蛋白的活性,调控Wnt/β-catenin通路的信号传导,对由炎症所致的瓣膜钙化性疾病起到防治作用.
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结缔组织生长因子增加TGFβ活化成肌纤维细胞的作用
探讨结缔组织生长因子(CTGF)对转化生长因子β1(TGFβ1)诱导成肌纤维细胞的影响及其与Smad信号通路的关系.细胞免疫组化检测成纤维细胞表型转化.Western免疫印迹法检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及磷酸化Smad2的水平,免疫共沉淀检测Smad2/3与Smad4复合物的水平,提取核蛋白后再用Western免疫印迹法检测Smad2在细胞核内的聚积.结果显示CTGF不能使细胞表达α-SMA,TGFβ1显著促进α-SMA表达(p＜0.01),CTGF加TGFβ1共同刺激又明显高于TGFβ1(p＜0.05).TGFβ1可明显诱导Smad2磷酸化、Smad2/3,4复合物形成以及Smad2在细胞核内的聚集, CTGF加TGFβ1联合刺激与TGFβ1相比没有明显变化.提示CTGF可以增强TGFβ1诱导的成肌纤维细胞生成,但CTGF的这种作用不依赖加强TGFβ1诱发的Smad信号传导.
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TGF-β1诱导成肌纤维细胞形成在低氧性肺血管重塑中的作用
目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导成肌纤维细胞形成在低氧性肺血管重塑中的作用.方法 40只成年雄性Wistar大鼠随机分成:对照组、低氧3、7、14和21 d组,每组8只,测大鼠平均肺动脉压(mPAP)、血管形态学指标、右室肥大指数(RVHI);免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,原位杂交和免疫组化检测TGF-β1基因表达,透射电镜观察腺泡内血管壁细胞表型,细胞培养观察低氧和TGF-β1诱导人胚肺成纤维细胞是否发生表型转化.结果 (1)低氧7 d后大鼠mPAP升高(P<0.05).低氧14 d后出现肺血管重塑、右心室肥大.(2)从低氧7 d开始无肌型动脉、部分肌型动脉、肌型动脉的构成比分别是39%、46%和15%,与对照组60%、35%和5%比较差异显著(P<0.005).(3)腺泡内肺动脉管壁?SMA的表达随着低氧时间的延长逐渐增多.低氧14 d TaF-βImRNA表达增高(P<0.01);TGF-β1蛋白在对照组呈弱阳性,低氧3 d表达增强(P<0.01),低氧7 d达高峰(P<0.01).(4)透射电镜证实成肌纤维细胞含有特异性的微丝和丰富的粗面内质网.(5)细胞培养表明低氧能够刺激成纤维细胞发生表型转化,TGF-β1能够促进成纤维细胞表型转化的发生.结论 转化生长因子β1诱导成肌纤维细胞形成是低氧性肺血管重塑的重要原因之一.
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大鼠胰腺癌模型及胰腺成肌纤维细胞计数
目的 建立大鼠胰腺癌模型,研究胰腺导管癌和非癌胰腺组织中成肌纤维细胞(MF)的分布和计数.方法 将二甲基苯并蒽(DMBA)直接置入大鼠胰腺被膜下实质内,并设立曲古霉素(TSA)干预组和空白对照组,3～5个月内处死,常规制作石蜡切片;Heidenhain染色,高倍镜下计数MF.结果 1)实验组癌发生率为48.7%(18/37),17例为胰腺导管癌,1例为纤维肉瘤;TSA组癌发生率为33.3%(12/36),11例为胰腺导管癌,1例为纤维肉瘤;实验组胰腺癌大径均值大于TSA组(P＜0.05).2)实验组和TSA组全部胰腺癌组织中的MF计数明显高于全部非癌胰腺组织(P＜0.01);对照组无癌发生;非癌胰腺组织中正常细胞或导管上皮细胞轻度不典型增生组的MF计数明显低于中～重度不典型增生组(P＜0.05).对照组MF计数明显低于实验组和TSA组的非癌胰腺组织或胰腺癌组织(P＜0.05或P＜0.01),癌组织中存在呈明显异型性的MF样癌细胞.结论 胰腺癌内的MF在胰腺癌的发生、发展中可能具有重要作用.
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成肌纤维细胞在纤维化过程中的作用及其调控
成肌纤维细胞(myofibroblast)是伤口愈合和各种组织纤维化中起主要作用的细胞,成肌纤维细胞不能及时从病变处退出,使细胞外基质持续过量分泌,并发生重塑是组织纤维化的主要特征,这一病理过程受诸多因素的调控,研究成肌纤维细胞的分化增殖及凋亡的调控机制有助于寻找干预组织纤维化过程的关键环节,从而为延缓或逆转组织纤维化提供理论基础.
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TGF-β1及其在胰腺纤维化中的作用
慢性胰腺炎(chronic pancreatitis, CP)典型的病理表现为胰腺实质纤维化、腺泡细胞萎缩、胰管狭窄或扩张、胰管结石以及炎症细胞浸润.胰腺纤维化的本质是以胶原为主的细胞外基质(extracellular matrix, ECM)合成增多,而降解相对减少,两者失去动态平衡,致使过多ECM沉积.目前认为,在胆道梗阻、酒精、代谢、遗传等因素作用下,造成胰腺实质损伤坏死伴发炎症反应,继而各种炎症因子释放并激活胰腺星状细胞(pancreatic stellate cell, PSC),使之转化为成肌纤维细胞 (myofibroblast cell),后者增殖并合成大量的ECM,导致胰腺纤维化.这是一个非常复杂的病理过程,受多种细胞因子介导并调节,其中,TGF-β1(transforming growth factor β1, TGF-β1)起到关键性的作用.本文通过总结近年来有关TGF-β1的研究进展,对TGF-β1的结构、来源、生物学效应及对胰腺纤维化的作用作一综述.
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罗红霉素和地塞米松对支气管哮喘大鼠气道重塑中成肌纤维细胞的影响
目的 探讨成肌纤维细胞(myofibroblast,MF)在支气管哮喘(简称哮喘)气道重塑中的作用.观察罗红霉素对哮喘气道重塑的影响,并与地塞米松作对照.方法 SD大鼠40只,随机分为哮喘组(A组)、生理盐水对照组(C组)、地塞米松治疗组(D组)和罗红霉素治疗组(R组),每组10只.利用卵白蛋白(ovalbumin,OVA)/Al(OH)3致敏与OVA雾化吸入激发建立大鼠哮喘模型.免疫组织化学测定肺组织中支气管上皮下MF的α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达含量,并使用图象分析技术进行积分光密度(integral optical density,IOD)定量分析测定.光镜观察肺组织病理结构变化,图像分析软件分析,并测定肺内支气管总管壁厚度、内管壁厚度、平滑肌层厚度等指标.结果 免疫组织化学和图像分析结果:A组与C组相比,总管壁厚度、内管壁厚度、平滑肌层厚度显著增厚(P＜0.01).D组和R组中的内管壁厚度、平滑肌层厚度与A组相比,均显著变薄(P＜0.01).R组的总管壁厚度、内管壁厚度、平滑肌层厚度与D组相比差异无统计学意义.定量分析测定的IOD值显示A组支气管上皮下MF α-SMA表达含量较C组显著增加(P＜0.01),D组和R组表达含量较A组均减少(P＜0.05),R组表达含量与D组相比差异无统计学意义.相关分析结果:支气管上皮下MF α-SMA表达含量(用IOD值表示)和内管壁厚度呈正相关(r=0.913,P＜0.01,n=40),和平滑肌层厚度也呈正相关(r=0.626,P＜0.01,n=40). 结论 MF在气道重塑形成中起重要作用.罗红霉素和地塞米松均可能通过抑制MF增殖和表达起到抗哮喘气道重塑作用.
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犬骨髓间充质干细胞体外分离、诱导成纤维细胞的实验研究
目的探讨体外稳定诱导骨髓间充质干细胞(BMSC) 分化为成肌纤维细胞和成纤维细胞的方法,为构建组织工程瓣膜提供种子细胞.方法应用Percoll(密度1.073 g/ml)淋巴细胞分离液分离健康犬骨髓标本,取分离的BMSC,在低糖改良Eagles培养液中培养,并用免疫组织化学的方法做细胞表型鉴定,然后用条件培养基对第2、3代细胞进行诱导分化,并用层黏连蛋白单抗对诱导后的细胞做免疫组织化学鉴定.并对诱导后细胞进行冻存,7 d后复苏观察细胞的生长、增殖及功能.结果经Percoll液分离的骨髓单核细胞,经贴壁培养后,其表型为波形蛋白阳性、α平滑肌肌动蛋白阳性、CD-34、层黏连蛋白阴性;诱导后细胞表达层黏连蛋白,阳性细胞数可达(50±3)%;诱导后BMSC经冻存复苏后,细胞复苏率(85±3)%,复苏后细胞生长、增殖旺盛,功能不受影响.结论BMSC体外能定向诱导分化为成肌纤维细胞和成纤维细胞,并符合种子细胞的要求.
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皮肤软组织扩张术的应用进展
皮肤软组织扩张术（Skin tissue expansion,STE 1976）是通过增加置入皮下扩张器内的容量，对表面皮肤产生压力，使其产生“额外”皮肤，利用新增加的皮肤转移覆盖创面。STE为烧伤、创伤瘢痕、肿瘤、缺损的修复重建增添了新的较为满意的方法，是整形外科领域里程碑性的进展［1］。 一、皮肤软组织扩张术的基础研究 1.扩张后的组织学变化：皮肤经过一定容量的扩张后，局部面积增加。扩张表皮细胞的有丝分裂活动24 h内可增加3倍。有新生的细胞形成。表皮细胞对机械刺激反应敏感，皮肤软组织扩张时的有丝分裂活动是正常组织对张力的一种反应，而有丝分裂活动增加引起的细胞数量的增多，是扩张器表面皮肤面积增加的主要原因。现已证实扩张6 w后增张率69.76 %，主要为细胞分裂增殖而来。 在扩张器囊内压不断增加的牵拉作用下，表面组织细胞之间的部分不牢固的连接分离，细胞间隙增宽，形态被拉长，同时导致细胞间质增生。另外，由于局部张力的增加使邻近组织受到牵拉产生“蠕变”而向扩张区移动，以上二者亦是皮肤面积增加的另外来源。 扩张后组织形态学的改变表现为表皮增厚，细胞层数增加，真皮及皮下组织变薄，乳头层及网状层含有大量胶原纤维，血管数量增加，皮肤附件（毛囊、汗腺等）彼此分离，但形态正常。扩张器周围形成一层纤维包膜。扩张后皮肤的毛细血管和末梢神经纤维数量增加，类似皮瓣延迟术后的变化。纤维包膜内含丰富的毛细血管。 扩张皮肤的超微结构显示基底细胞层及棘细胞层的胞浆中含有大量的张力丝。真皮中有大量排列紧密的胶原纤维束，弹力纤维结构未发生变化。在扩张早期，真皮深层还可见到少量的成肌纤维细胞，胞浆内含有大量的粗面内质网及线粒体。
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腹壁巨大韧带样型纤维瘤病的外科治疗
韧带样型纤维瘤病是一种具有局部侵袭特性的成纤维细胞,成肌纤维细胞肿瘤,也称韧带样瘤、侵袭性纤维瘤病、肌腱膜纤维瘤病等,发生于深部软组织,具有局部浸润性生长和术后复发倾向,但不远位转移的特点[1].
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上皮-间充质营养单位在慢性鼻及鼻窦炎发病机制中的作用
目的 探讨慢性鼻及鼻窦炎(CRS)的慢性炎症过程中上皮-间充质营养单位(epithelial mesenchymaltrophic unit,EMTU)的功能状态.方法 选取40例不伴鼻息肉CRS患者和14例正常对照的筛窦黏膜,分别行HE、Masson三色和转化生长因子-β(transforming growthfactor-β,TGF-β)、α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smoothmuscle actin,α-SMA)免疫组化染色.结果 鼻黏膜上皮下均存在一层薄的成纤维细胞,表达TGF-132强阳性;CRS患者的鼻黏膜上皮下层和黏膜下层中可见表达α-SMA的成肌纤维细胞,黏膜纤维化与成肌纤维细胞之间存在正相关(r=0.686,P=0.000).结论 CRS患者的鼻窦黏膜存在EMTU.黏膜下层成肌纤维细胞的出现标志着EMTU仍保持活性.
关键词： 鼻窦炎 呼吸道黏膜 气道重构 上皮-间充质营养单位 成肌纤维细胞 -
成肌纤维细胞积聚在鼻息肉形成和生长中的作用
鼻息肉病属气道慢性炎性病变,主要临床表现为全鼻窦黏膜高度水肿、炎症和息肉形成.实践中发现,鼻息肉病患者的下鼻甲罕见息肉生长,但黏膜经常表现为不可逆性肥厚.本实验通过研究鼻息肉组织中转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达及分布特征,以及成肌纤维细胞(myofibroblast,MF)在鼻息肉与下鼻甲黏膜的表达特点,探讨TGF-β诱导MF积聚在鼻息肉形成和生长过程中的作用和导致黏膜不可逆性肥厚和鼻腔结构重塑的原因.
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角膜基质细胞研究进展
角膜基质细胞,存在于角膜基质层中,在正常情况下,处于静止状态.但当角膜损伤时,不同上皮来源的因子及环境信号,将影响角膜基质细胞的应答反应,决定着角膜能否完全被修复或形成角膜瘢痕.本文就角膜基质细胞的分布、形态、受激后的应答反应情况及与角膜疾病的关系作一综述.
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小肠炎性肌纤维母细胞肿瘤CT和MRI表现一例
患者男,55岁.间断性腹痛3个月伴黑便2个月.腹部专科体检未见明显异常.实验室检查:血清葡萄糖6.64 mmol/L,糖化血红蛋白6.50%,余指标阴性.
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磷脂酶A2和成肌纤维细胞在哮喘发病机制中的作用
支气管哮喘是以呼吸道炎症为特征的疾病.尽管目前对支气管哮喘(哮喘)的呼吸道的基本病变已经有了大量认识,但其在细胞学和生物化学方面的病因及生理机制仍未完全明了.本文就磷脂酶A2、成肌纤维细胞在哮喘发病机制中的作用综述如下.
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成肌纤维细胞分化过程中肌动蛋白细胞骨架的形成及其作用
成肌纤维细胞是活化的成纤维细胞,在组织的损伤修复以及许多纤维化疾病过程中都具有重要的作用.其特征性改变是表达α平滑肌肌动蛋白,形成肌动蛋白细胞骨架,并且分泌大量的细胞外基质成分.肌动蛋白细胞骨架参与细胞的收缩、黏着斑的形成、细胞外基质的重构以及相关基因转录与翻译的调控,促进成肌纤维细胞的分化及组织的纤维化过程.研究肌动蛋白细胞骨架在成肌纤维细胞中的形成及其功能有助于更好地了解成肌纤维细胞的活化机制及其在相关疾病发生、发展过程中的作用.
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白细胞介素-4,-13促进人肺成纤维细胞ADAM33基因的表达
研究发现ADAM33基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms, SNPs)与哮喘的发生以及气道高反应性有显著相关[1].ADAM33基因主要在肺的平滑肌细胞、成肌纤维细胞和成纤维细胞表达,而在上皮细胞、T细胞或免疫细胞中表达较少.由于ADAM33基因在肺间充质细胞的选择性表达,因此,ADAM33基因可能与小气道重塑有关.IL-4和IL-13都是Th2型细胞因子,在哮喘的慢性气道炎症中起重要作用.近研究发现IL-4和IL-13可以通过增加支气管上皮细胞对转化生长因子-β的释放,从而促进气道重塑[2].因此,我们研究IL-4和IL-13对人肺成纤维细胞ADAM33基因表达的影响,探讨ADAM33基因表达异常在哮喘气道重塑中的作用.
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025 成肌纤维细胞与哮喘
成肌纤维细胞(myofibroblast, MF)是一类特殊的成纤维细胞,它与哮喘的发生发展有密切的关系.MF除了能促进细胞外基质的沉积,导致气道重塑,还能延长EOS的生存力,抑制凋亡,同时分泌多种细胞因子参于气道炎症.
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成肌纤维细胞与肺部疾病
成肌纤维细胞(MF)是一类特殊的成纤维细胞.具有收缩性;能合成和降解细胞外基质;并分泌细胞因子、生长因子和炎性介质等功能.本文将阐述MF特征、分型和生物学作用,及其与缺氧性肺动脉高压、支气管哮喘、肺纤维化等肺部疾病关系的研究进展.
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罗红霉素和地塞米松对支气管哮喘大鼠气道重塑中成肌纤维细胞的影响
目的 探讨成肌纤维细胞(myofibroblast,MF)在支气管哮喘(简称哮喘)气道重塑中的作用.观察罗红霉素对哮喘气道重塑的影响,并与地塞米松作对照.方法 SD大鼠40只,随机分为哮喘组(A组)、生理盐水对照组(C组)、地塞米松治疗组(D组)和罗红霉素治疗组(R组),每组10只.利用卵白蛋白(ovalbumin,OVA)/Al(OH).致敏与OVA雾化吸人激发建立大鼠哮喘模型.免疫组织化学测定肺组织中支气管上皮下MF的一平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达含量,并使用图象分析技术进行积分光密度(integral optical density,IOD)定量分析测定.光镜观察肺组织病理结构变化,图像分析软件分析,并测定肺内支气管总管壁厚度、内管壁厚度、平滑肌层厚度等指标.结果 免疫组织化学和图像分析结果:A组与C组相比,总管壁厚度、内管壁厚度、平滑肌层厚度显著增厚(P<0.01).D组和R组中的内管壁厚度、平滑肌层厚度与A组相比.均显著变薄(P<0.01).R组的总管壁厚度、内管壁厚度、平滑肌层厚度与D组相比差异无统计学意义.定量分析测定的IOD值显示A组支气管上皮下MF α-SMA表达含量较C组显著增加(P<0.01),D组和R组表达含量较A组均减少(P<0.05),R组表达含量与D组相比差异无统计学意义.相关分析结果:支气管上皮下MF α-SMA表达含量(用IOD值表示)和内管壁厚度呈正相关(r=0.913,P<0.01,n=40),和平滑肌层厚度也呈正相关(r=0.626.P<0.01,n=40).结论 MF在气道重塑形成中起重要作用.罗红霉索和地塞米松均可能通过抑制MF增殖和表达起到抗哮喘气道重塑作用.
