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小剂量红霉素降低大鼠基础气道阻力的研究
支气管哮喘(简称哮喘)患者可出现反复气流阻滞、气道高反应性和慢性气道炎症.哮喘发病的确切机制尚不完全清楚,目前认为气道炎症为哮喘发病机制的枢纽.临床研究、体外细胞培养及动物模型均证实红霉素对过敏性气道炎症具有保护作用[1].
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菠萝蛋白酶诱导小鼠急性过敏性气道炎症的作用研究
探讨菠萝蛋白酶诱导小鼠急性过敏性气道炎症中2型固有淋巴细胞(group 2 innate lymphoid cell,ILC2)及相关细胞因子的变化及意义.对未致敏BALB/c雌性小鼠在第1天和第3天给予菠萝蛋白酶滴鼻,ELISA检测12h内小鼠肺组织匀浆上清中IL-33变化,5d后处死小鼠,肺组织切片病理观察,瑞氏染色计数BALF中嗜酸性粒细胞含量,流式检测肺组织中ILC2数量变化,ELISA检测BALF中IL-5、IL-13水平.结果显示,菠萝蛋白酶诱导气道上皮细胞产生IL 33,3h时开始,6h时达高峰;菠萝蛋白酶滴鼻小鼠肺组织切片显示大量炎性细胞浸润和杯状细胞黏液分泌增加,BALF中嗜酸性粒细胞比例增加,IL-5和IL-13含量增加,流式检测肺组织中ILC2数量增多.研究表明,菠萝蛋白酶刺激小鼠气道上皮细胞释放IL-33,引起小鼠肺ILC2活化增殖并分泌大量Th2型细胞因子,引起嗜酸性粒细胞浸润等急性过敏性气道炎症表现,提示ILC2促进早期急性过敏性气道炎症的发生.
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重组屋尘螨2类变应原疫苗免疫治疗小鼠过敏性气道炎症的研究
目的 观察以聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)材料为佐剂制备的重组屋尘螨2类变应原(rDer p 2)纳米微粒疫苗(DEPN)对小鼠过敏性气道炎症的影响,并探讨其免疫治疗机制.方法 制备PLGA-rDer p 2纳米粒子并鉴定其特性.40只BALB/c小鼠随机分为5组,A组(对照组)均给予生理盐水(100 μl).B、C、D和E组腹部皮下注射屋尘螨粗浸液(10 μg)免疫小鼠致敏,然后分别用PBS(100 μl)、2 mg空白PLGA粒子(empty PLGA,EP)、100 μg rDer p 2、2 mg的DEPN纳米疫苗(载有100 μg rDer p 2)皮下注射进行免疫治疗,连续免疫治疗3 d,1次/d,各组用rDer p 2(50 μg)滴鼻激发,激发后第2天剖杀,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)并对细胞进行总计数和分类计数;HE染色和PAS染色(Periodic Acid-Schiff Stain)观察小鼠肺部组织炎症和支气管黏液分泌;用ELISA检测BALF和脾细胞培养上清的细胞因子(IL-4、IFN-γ)和血清中变应原特异性IgG2a和IgE抗体浓度.结果 B、C组肺部呈明显的变态反应性炎症,D、E组变应原诱导的肺部嗜酸粒细胞浸润和黏液分泌比B、C组显著减轻.BALF中的细胞总数B组比A组明显增多,分类细胞以中性和嗜酸粒细胞为主,超过50%.rDer p 2特异性IgE抗体水平,D组(0.93±0.04)和E组(0.77±0.10)均低于B组(1.14±0.10)(P＜0.01);特异性IgG2a抗体水平,D组(1.02+0.01)和E组(1.17±0.46)均高于B组(0.14±0.01)(P＜0.01).在BALF中,D组[(55.60±3.79)pg/ml]和E组[(48.60±4.50)pg/ml] IL-4水平均低于B组[(78.90±6.07)pg/ml](P＜0.01);IFN-γ水平E组[(68.50±2.87)pg/ml]显著高于B组[(27.30±3.51)pg/ml](P＜0.01).脾细胞上清的IL-4水平,D组[(56.3±4.85)pg/ml]和E组[(40.2±4.36)pg/ml]显著低于B组[(81.20±6.84)pg/ml](P＜0.01);IFN-γ水平,E组[(70.20±3.85)pg/ml]显著高于B组[(34.60±2.25)pg/ml].结论 DEPN免疫治疗可抑制小鼠肺部过敏炎症,其机制可能与调节Th1/Th2平衡有关.
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T-bet重组腺病毒调节哮喘小鼠辅助性T细胞1型/2型免疫平衡
目的 研究静脉注射T-bet重组腺病毒(AdT-bet)对小鼠哮喘模型过敏性气道炎症及辅助性T细胞1型/2型(Th1/Th2)免疫失衡的影响.方法 随机将36只C57BL/6小鼠分为AdT-bet治疗(A)组、模型对照(B)组、正常对照(C)组.以卵蛋白、氢氧化铝免疫建立哮喘模型,A组激发前尾静脉注射1×108 pfu/100μL的AdT-bet,各组激发后进行肺泡灌洗分析细胞组分,分离肺T淋巴细胞测定细胞因子分泌水平,以流式细胞仪检测CD3+、CD4+T细胞比例及表达γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素(IL)-4、IL-5的比例,比较各组肺组织学改变.结果 A组与B组相比:①明显抑制抗原激发后气道内嗜酸性粒细胞的浸润(0.004±0.003比0.221±0.067,P＜0.01);②明显抑制肺T淋巴细胞产生IL-4[(22±12)pg/mL比(170±28)pg/mL]、IL-5[(16±13)pg/mL比(330±30)pg/mL],增加了IFN-γ[(2 100±360)pg/mL比(60±50)pg/mL]的产生,差异均有统计学意义(P值均＜0.01);③肺T淋巴细胞CD4+IFN-γ+%及IFN-γ+/IL-4+明显升高(P值均＜0.01),而CD4+IL-4+%明显下降(P＜0.01);④明显抑制哮喘鼠气道内及肺泡内的过敏性炎症反应.结论 激发前静脉应用AdT-bet对哮喘小鼠过敏性气道炎症有明显的防治作用,其机制可能与表达的T-bet上调Th1/Th2比值,从而调整了免疫平衡有关.
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Bla g 7多肽疫苗免疫治疗小鼠过敏性气道炎症的研究
目的 观察以壳聚糖(CS)材料为佐剂制备的德国小蠊变应原Bla g 7多肽纳米疫苗对小鼠过敏性气道炎症的疗效,探讨其免疫机制.方法 用CS包裹Bla g 7多肽制成纳米疫苗;25 只BALB/c小鼠用蟑螂粗提液致敏、激发,随机分为阴性对照组(A 组)、模型组(B 组)、Bla g 7多肽治疗组(C 组)、Bla g 7多肽+ CS治疗组(D 组)、CS对照(E 组) .通过HE 染色观察小鼠肺部炎症;观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和细胞分类;气道高反应仪监测治疗前后小鼠气道高反应性的变化.结果 成功制备Bla g 7多肽纳米疫苗;D组与A组相比肺部病理改变不明显,BALF中的细胞总数、EOS计数均显著低于模型组(P<0.01),而C组和E组对致敏小鼠无明显疗效.气道高反应数值治疗前后变化差别有统计学意义(P<0.05).结论 Bla g 7多肽壳聚糖纳米疫苗对致敏小鼠具有免疫治疗作用, 是一种新型的治疗蟑螂过敏性气道炎症的缓释制剂,为脱敏疫苗的研究提供了理论基础.
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α半乳糖神经酰胺活化iNKT细胞对哮喘小鼠过敏性气道炎症的影响
目的:观察α半乳糖神经酰胺(α-GalCer)活化iNKT细胞对卵清蛋白(OVA)诱导的哮喘小鼠过敏性气道炎症的影响.方法:将24只BALB/c小鼠随机分为:正常小鼠组(A组)、哮喘小鼠组(B组)和哮喘小鼠α-GalCer干预组(C组).建立哮喘模型,以α-GalCer或PBS干预.分别以苏木素伊红(HE)染色和过碘酸雪夫(PAS)染色观察肺组织炎症和气道杯状细胞增生;检测肺泡灌洗液(BALF)细胞计数.流式细胞术检测肺组织iNKT细胞的数量、表面分子CD69及分泌细胞因子水平.结果:与B组比较,C组小鼠肺组织炎性细胞浸润增多,杯状细胞增生增加,BALF中细胞总数及分类数增加.同时α-GalCer干预后哮喘小鼠肺iNKT细胞被激活,表现为iNKT细胞的数量及表面分子CD69和分泌细胞因子水平增加.结论:α-GalCer可能通过活化的iNKT细胞促进哮喘小鼠过敏性气道炎症.
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经多酚氧化酶处理的德国小蠊低致敏变应原疫苗免疫治疗小鼠过敏性气道炎症的研究
目的 研究经多酚氧化酶(PPO)处理的德国小蠊低致敏变应原疫苗对小鼠过敏性气道炎症的治疗效果及其治疗机理.方法 提取新鲜马铃薯多酚氧化酶,将德国小蠊变应原粗浸液与PPO溶液按1:2混合制备低致敏变应原疫苗.动物实验取20只BALB/c小鼠随机分为A组(模型组)、B组(低致敏变应原疫苗治疗组)、C组(PPO治疗对照组)和D组(正常对照组).D组给予生理盐水.各组经腹部皮下注射致敏、治疗和滴鼻激发.激发结束后第2天进行气道高反应检测.第3天剖杀,进行支气管肺泡灌洗(BAL)、细胞总数计数、嗜酸粒细胞计数和肺组织炎症、支气管黏液分泌HE染色观察.结果 气道高反应检测中A组Penh值随雾化乙酰甲胆碱(Mch)浓度增加变化明显,B组Penh值曲线增幅相对平坦,两者差异有统计学意义(P＜0.05).D组Penh值随Mch浓度增加变化小.A组支气管肺泡灌洗液(BALF)中的细胞总数比D组明显增多,分类细胞以中性和嗜酸粒细胞为主.B组较A组细胞总数和嗜酸粒细胞均明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05).A、C组肺部组织呈明显的变态反应性炎症,B组低致敏变应原疫苗治疗的肺部嗜酸粒细胞浸润和黏液分泌比A、C组明显减少.结论 德国小蠊变应原粗浸液与PPO共同作用后变应原性降低.该方法制备的低致敏变应原疫苗治疗可抑制小鼠肺部过敏炎症.
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姜黄素通过抑制p38MAPK和AKT活化改善幼鼠过敏性气道炎症
[目的]选择幼龄小鼠模拟3~12岁儿童的过敏性气道炎症,探索膳食补充姜黄素对幼龄小鼠过敏性气道炎症的防治作用.[方法]4周幼龄雌性BALB/c小鼠随机分为3组(每组n=8),分别是空白对照组,过敏性气道炎症模型组,姜黄素干预组.在末次卵清白蛋白激发24 h后,观察各组小鼠的症状,测定肺泡灌洗液(BALF)中的炎症细胞数,全血细胞分析白细胞亚型的数量,用HE染色观察肺部支气管周围炎症细胞浸润情况,用过碘酸-雪夫染色观察杯状细胞增生情况,酶联免疫吸附法测定BALF中的细胞因子IL-4、IL-5、IL-13以及血浆中的总IgE水平,western blot技术检测肺组织磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)/p38 MAPK,,p-AKT/AKT蛋白表达情况.[结果]与过敏性气道炎症模型组相比,饲料添加姜黄素的干预组可以明显改善幼鼠的反复抓挠鼻子、点头呼吸、体质量减轻等症状,外周血中嗜酸性粒细胞降低具有统计学差异(P<0.05),肺泡灌洗液和肺支气管周围的炎症细胞以及肺泡灌洗液中IL-4,IL-5,IL-13的水平降低(P<0.05),支气管上皮杯状细胞增生减轻,此外,肺组织的磷酸化p38 MAPK和磷酸化AKT水平降低,组间差异有统计学意义(P<0.05).[结论]膳食添加姜黄素可以抑制幼龄小鼠过敏性气道炎症,其机制可能与抑制肺组织的p-38 MAPK和AKT信号传导有关.
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气道内应用IL-12抑制抗原诱导的过敏性气道反应
目的探讨气道内应用白细胞介素12(IL-12)对抗原诱导的过敏性反应的影响.方法 C57BL/6小鼠经OVA免疫建立哮喘模型,在主动免疫及抗原激发阶段气道内应用IL-12,观察肺泡灌洗液细胞成份、肺部淋巴细胞产生细胞因子、外周血IgE水平变化.结果①致敏阶段应用IL-12可明显抑制嗜酸性粒细胞浸润、肺淋巴细胞对IL-5的分泌以及血浆总IgE和抗原特异性IgE的水平;②激发阶段应用IL-12可明显抑制嗜酸性粒细胞的浸润,抑制肺淋巴细胞产生IL-4、IL-5,增加其产生IFN-γ,但对抗原特异性IgE无明显影响;③如致敏和激发阶段均应用IL-12,则明显抑制肺淋巴细胞产生IL-4、IL-5,增强IFN-γ产生,抑制气道内嗜酸性粒细胞的浸润及血浆IgE的升高.结论气道应用IL-12对抗原诱导的气道过敏性炎症有明显调节作用,且与应用时机有关,为IL-12治疗哮喘提供依据.
