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HPLC测定绿茶浸出液灌胃动脉粥样硬化大鼠血浆中4个有效成分的含量
目的:建立HPLC测定绿茶浸出液中没食子酸、咖啡因、表儿茶素没食子酸酯、山柰酚在动脉粥样硬化大鼠体内的血药浓度,为动脉粥样硬化的治疗提供参考.方法:动脉粥样硬化大鼠灌胃绿茶浸出液后,分别在不同时间点取血,采用依利特Hypersil ODS2色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇(A)-0.03％磷酸水溶液(B)梯度洗脱(0 ～ 30 min,10％ ～43％ A;30 ～43 min,43％～45％ A;43～ 44 min,45％ ～ 51％ A;44～60 min,51％ ～ 53％ A;60～ 70 min,53％ ～ 90％ A),流速0.7 mL·min-1,检测波长278 nm的色谱条件进样分折.结果:没食子酸、咖啡因、表儿茶素没食子酸酯、山柰酚分别在0.255 ～20.40,0.430 ～86.00,0.245 ～19.60,0.270～21.60 mg·L-1内呈良好线性关系,日内和日间精密度RSD均＜9.0％,提取回收率和方法回收率都＞87％;酸化后主要药代动力学参数药时曲线下面积(AUC0-t)分别为(8.902±1.235),(198.5±12.5),(7.367±0.412),(4.426±0.251) mg·h·L-1,表观分布容积(Vd)分别为(0.990±0.134),(1.409±0.201),(0.501±0.243),(0.029±0.009) L·kg-1,达峰时间(Tmax)均为1.5h.结论:该方法对所测成分的分离度好,适用于测定绿茶浸出液中4个有效成分的血药浓度,为临床预防此类疾病提供一定理论依据.
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同时测定乌龙茶中咖啡因和5种儿茶素类成分的方法研究
目的 建立乌龙茶中咖啡因、表儿茶素、儿茶素、表没食子儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯和表儿茶素没食子酸酯的含量测定方法.方法 采用RP-HPLC,色谱柱为Grace Allitima C18(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.2％乙酸为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为280 nm,柱温为35℃.结果 咖啡因、表儿茶素、儿茶素、表没食子儿茶素、袁没食子儿茶素没食子酸酯和表儿茶素没食子酸酯的质量浓度分别在13.38 ～2 140、6.36～1 018、5.95 ～ 952、6.55 ～1 048、10.83 ～1 732、7.80～1 248 μg· mL-1内呈良好线性关系,相关系数分别为1.000、0.999 9、0.999 9、0.999 9、0.999 5、0.999 6:平均回收率分别为101.14％(RSD=2.06％,n=9)、100.26％(RSD=3.50％,n=9)、102.12％(RSD=4.45％,n=9)和99.57％(RSD=2.08％,n=9)、100.83％ (RSD =2.13％,n=9)和99.12％(RSD=2.49％,n=9).结论 该方法简便、准确、重现性好,可用于乌龙茶的质量控制.不同产地、不同品牌的乌龙茶中咖啡因和5种儿茶素类指标成分含量差异较大.
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表儿茶素及其衍生物表儿茶素没食子酸酯通过MAPK-ERK44/42通路抑制前列腺间质细胞增殖
[目的]探究锁阳中表儿茶素(EC)及其衍生物表儿茶素没食子酸酯(ECG)对前列腺间质细胞WPMY-1增殖的影响及其机制.[方法]体外培养WPMY-1细胞,加入不同剂量的ECG和EC,用噻唑蓝(MTT)法检测对细胞增殖的影响,用聚合酶链反应(PCR)和蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测对增殖相关抗原PCNA mRNA和蛋白水平表达的影响;用Western blotting法分别检测ECG和EC对MAPK通路ERK44/42、P38、SAPK/JNK激活的抑制作用;加入ERK44/42激动剂C6-Ceramide(C6)及P38、SAPK/JNK联合激动剂Anisomycin(ANI)后,用MTT法检测对ECG和EC抑制细胞增殖的影响.[结果]1 nmol/L至10μmol/L的ECG和EC均可以明显抑制WPMY-1细胞的增殖(P<0.01).10 nmol/L的ECG和EC可以明显抑制WPMY-1细胞中PCNA mRNA和蛋白水平的表达(P<0.05).ECG和EC均能抑制ERK44/42和SAPK/JNK的磷酸化,但对P38的磷酸化作用不明显;加入C6后,ECG和EC抑制WPMY-1增殖的能力明显降低(P<0.05或P<0.01),加入ANI后,则细胞增殖能力改变不明显.[结论]ECG和EC通过ERK44/42抑制前列腺间质细胞增殖,这可能是其抗良性前列腺增生的重要机制之一.
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葡萄籽原花青素二聚体的提取分离与结构鉴定
20世纪80年代以来,人们对原花青素的单聚体、二聚体、三聚体、四聚体和高聚体进行生化、药理活性的研究,发现其具有抗氧化、抗致突变、抗心血管疾病等活性,其中二聚体和三聚体活性强[1].葡萄籽原花青素单体主要由(+)-儿茶素(catechin)、(-)-表儿茶素(epicatechin)、(-)-表儿茶素没食子酸酯组成,各单体通过4→6或4→8键相连,形成二聚、三聚、四聚等多聚体.
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茶叶中表没食子儿茶素没食子酸酯的研究进展
茶是中国的传统饮品之一.许多研究表明茶叶具有抗氧化、抗癌、抗动脉粥样硬化等多种功能,其主要活性成分为茶多酚中儿茶素类物质.儿茶素类物质主要包括表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)、表儿茶素(EC)、表没食子儿茶素(EGC).其中EC、EGC为简单儿茶素,ECG及EGCG为复杂儿茶素.研究表明以上4种单体抗氧化能力,以强至弱顺序为EGCG＞EGC＞ECG＞EC.EGCG具有较强的生理活性,因此逐步成为茶多酚研究的重点.本文对其在国内的研究进展进行综述.
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EGCG 对人乳腺癌细胞作用的分子靶点
近年来对于绿茶的抗癌作用已经明确，研究非常广泛，无论是从流行病学、体外细胞培养、体内动物实验还是临床研究都表明绿茶具有抗癌作用，绿茶癌症化学预防作用主要是由于绿茶含有抗癌成分儿茶素，其主要包括：表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、表没食子儿茶素（EGC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）和表儿茶素（EC）［1］。EGCG 为绿茶天然活性提取物，是绿茶中含量高、活性强的多酚类化合物，占多酚类总量的50％-80％。已有大量体外实验对 EGCG的癌症预防作用机制进行了广泛研究［2-4］，EGCG 抗癌作用主要为：1）抑制肿瘤细胞生长和增殖；2）诱导肿瘤细胞凋亡；3）阻断肿瘤细胞侵袭和转移；4）阻止肿瘤血管的生成［5］。目前已鉴定出多个 EGCG 癌症预防作用分子靶点如蛋白酶体、蛋白激酶基质金属蛋白酶及其他潜在靶点。也有研究揭示，一些高亲和力 EGCG 结合蛋白可能是 EGCG 的直接作用靶点［6-8］。
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表儿茶素没食子酸酯抑菌活性的研究
目的:探讨表儿茶素没食子酸酯抑菌活性.方法:本研究通过二倍稀释法测量小抑菌圈从而确定ECG对6种致病菌的小抑菌浓度(MIC).采用结晶紫实验对表儿茶素没食子酸酯作用前后细菌细胞膜完整性的变化进行测定.结果:表儿茶素没食子酸酯对大肠杆菌、肠炎沙门氏菌、变异链球菌、绿脓杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的MIC值0.125mg/mL;结晶紫实验中,随着ECG浓度的增大,OD590也随之增大.结论:实验证明ECG的灭菌机制是对其细菌细胞膜通透性进行改变,并破坏细胞膜的完整性,使细胞外的小分子容易进入以及引起细胞内的小分子物质泄漏.
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一测多评法测定心脑健胶囊(片)中6种儿茶素
目的 建立一测多评法测定心脑健胶囊(片)(茶叶提取物)中6种儿茶素的含有量.方法 该药物50％甲醇提取液的分析采用Shimadzu Wonda Cract ODS-2色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相0.5％乙酸(A)-乙腈(B),梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长280 nm;柱温35℃.以表没食子儿茶素没食子酸酯为内标,计算表没食子儿茶素、儿茶素、表儿茶素、没食子儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯的相对校正因子,测定其含有量.结果 6种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 8),加样回收率96.00％～98.47％,RSD 2.09％～2.91％,一测多评法所得结果接近于外标法.结论 该方法简便可靠,可用于心脑健胶囊(片)的质量控制.
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Ecg/Egcg与β内酰胺类抗生素对MRSA的协同抗菌机制研究
目的 测定表儿茶素没食子酸酯(Ecg)/表没食子儿茶素没食子酸酯(Egcg)与β内酰胺类抗生素对耐甲氧西林金葡菌(MRSA)的协同抗菌作用,并探讨其作用机制.方法 以微量稀释法测定Ecg、Egcg和β内酰胺类抗生素的体外协同抗MRSA作用;以RT-PCR技术检测Ecg和Egcg对自溶酶基因lytM和lgrA表达的影响;以蛋白免疫印迹法测定Egcg对MRSA的PBP2a蛋白表达的影响;测定Ecg和Egcg对β内酰胺酶的抑制情况,并与他唑巴坦的抑酶作用进行比较.结果 50 mg/L的Ecg/Egcg均能增强苯唑西林、头孢拉啶、头孢呋辛和美罗培南对MRSA的抗菌作用,并以与美罗培南的协同作用强;且Ecg与β内酰胺类抗生素的协同效果比Egcg明显.随着Ecg和Egcg浓度的增高,MRSA的lytM、lgrA基因表达上调,同时 Egcg可使MRSA-2菌PBP2a 蛋白表达下调.浓度为256 mg/L的他唑巴坦可完全抑制金葡菌的β内酰胺酶,而Egcg/Ecg对金葡菌β内酰胺酶的抑制作用很微弱.结论 Ecg/Egcg联合β内酰胺类抗生素对MRSA的协同作用是由于Ecg/Egcg在抑制PBP2a的表达下调的同时使自溶酶lytM和lgrA基因的表达上调,导致自溶酶分泌增多,促使对细菌黏肽水解增加,从而协同β内酰胺类抗生素抑制细菌细胞壁的合成.
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表儿茶素没食子酸酯与四环素协同抗金黄色葡萄球菌作用及机制
目的 研究表儿茶素没食子酸酯(ECg)与四环素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和敏感菌(MSSA)的协同抗菌作用并探讨其机制.方法 以微量稀释法测定ECg与四环素的体外抗MRSA(15株MRSA)和MSSA(ATCC25923)的协同作用.以荧光法测定ECg对金黄色葡萄球菌的tet(K)四环素外排泵抑制作用.结果 ECg对MRSA和ATCC25923的小抑菌浓度(MIC)均为256 mg·L~(-1);四环素对MRSA的MIC值为2～128 mg·L~(-1),对ATCC25923为2 mg·L~(-1).合用25 mg·L~(-1) ECg与四环素后,15株MRSA中有5株呈协同作用,7株呈相加作用,2株呈无关作用,1株呈拮抗作用;而ATCC25923呈相加作用.经50 mg·L~(-1) ECg和100 mg·L~(-1)四环素处理过的tet(K)阳性株(MRSA-2)对四环素的外排作用低于单用100 mg·L~(-1)四环素处理的菌株,而经ECg和四环素处理过的tet(K)阴性株(ATCC25923)对四环素的外排作用与单用四环素处理的菌株基本相同.结论 ECg与四环素对金黄色葡萄球菌主要呈协同或相加作用,其机制可能为抑制其四环素外排泵.
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茶多酚对实验性肝损伤保护作用的研究进展
肝脏是机体的重要代谢器官和解毒器官,作用于机体的多种致病因素均可导致肝细胞的变性、坏死、凋亡以及癌变.茶多酚(Tea Polyphenols,TP)是从茶叶中提取的活性成分,包括表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、表没食子儿茶素(EGC)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)、表儿茶素(EC)等多种成分.
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高效液相色谱法测定茶叶中茶多酚及咖啡碱含量
茶多酚(greentea polyphenols,GTP)与咖啡碱是茶叶中重要的功能性成分,茶多酚是各类茶中都含有的水溶性浸出物,许多生理和药理实验表明它对人体无毒,无副作用,是一种天然、高效、安全的抗氧化剂.它还具有抗衰老,抗癌,抗辐射,消除口臭,减少口腔牙垢形成,抗菌灭菌以及降血糖,防治心血管疾病等作用[1].茶多酚抗氧化成分是其中的儿茶素类,它们也是茶多酚中主要的成分,主要是EGCG(表没食子儿茶素没食子酸酯)、EGC(表没食子儿茶素)、EC(表儿茶素)和ECG(表儿茶素没食子酸酯),各儿茶素的抗氧化能力不尽相同,因此测定茶叶中各儿茶素含量对评价茶叶功能品质具有重要意义.咖啡碱在茶叶中含量较高,其药理功能人们已熟知,它具有强心、利尿、提神醒脑、刺激中枢神经系统等作用.本文采用高效液相色谱法(HPLC)建立茶叶中各儿茶素及咖啡碱含量测定方法,现报告如下.
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茶多酚生物学活性的研究进展
茶叶作为中华民族的传统保健饮料已有几千年的历史.60年代初,日本科学家发现茶叶提取物中含有一种抗氧化活性成分,各国科学家相继深入研究,证明它是一类多酚化合物,即茶多酚(TP).茶多酚是茶叶中多酚类物质及其衍生物的总称,主要由儿茶素、黄酮类、花青素、花白素和酚酸等物质组成.其中儿茶素是茶多酚中主要的多酚类化合物,约占茶叶干重的20%～30%,主要种类有表儿茶素(EC)、没食子儿茶素(EGC)、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)4种儿茶素,含量高的是EGCG.随着国内外对茶多酚研究的深入,其多种生物活性已被证实,以儿茶素为主体的茶多酚类物质正以不同的方式对人体健康产生着积极的影响.美国医学基金会主席认为:"茶多酚是二十一世纪对人类健康产生巨大效果的化合物".现就近年来国内外对茶多酚生物活性的研究作一综述.
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AMPK 信号通路在 ECG 诱导人鼻咽癌细胞株C666-1凋亡中的作用研究
目的：研究 AMPK 信号通路在 ECG 诱导人鼻咽癌细胞株 C666-1凋亡中的作用。方法人鼻咽癌 C666-1细胞给予 AMPK 特异性抑制剂 compound C 或不同浓度 ECG 处理后，分别采用 CCK-8法和 TUNEL 染色法检测细胞增殖情况和凋亡；采用 Western blotting 法检测 AMPK、p70S6K、S6等相关蛋白磷酸化水平。结果 ECG 可剂量依赖性地增加 C666-1细胞中 AMPK 的磷酸化水平并抑制 p70S6K 和 S6的磷酸化；给予 compound C 预处理之后可显著逆转 ECG 对 C666-1细胞增殖和凋亡的影响，并逆转 ECG 对 AMPK、p70S6K 和 S6等磷酸化水平的影响。结论ECG 通过调控 AMPK 依赖的通路抑制人鼻咽癌细胞株 C666-1增殖，并诱导其凋亡。
关键词： 表儿茶素没食子酸酯 AMP 激活的蛋白激酶 C666-1 -
高效液相色谱法同时测定金荞麦中4种指标成分含量
目的 建立同时测定金荞麦中儿茶素、原花青素B2、表儿茶素和表儿茶素没食子酸酯的HPLC方法.方法 采用TSK ODS-100V色谱柱(5μm,4.6 mm×250 mm)进行分离;流动相为乙腈-0.2％ 磷酸水溶液,流速为0.8 mL·min-1,梯度洗脱;检测波长280 nm;柱温为35℃;进样量为10μL.结果儿茶素、原花青素B2、表儿茶素和表儿茶素没食子酸酯的质量浓度分别在15.55～194.40μg·mL-1(r=0.9998)、15.36～192.00μg·mL-1(r=0.9996)、15.95～199.40μg·mL-1(r=0.9997)和15.50～193.80μg·mL-1(r=0.9992)与峰面积呈现良好的线性关系,平均加样回收率分别为98.6％(RSD=1.4％)、98.3％(RSD=1.4％)、98.6％(RSD=1.2％)和97.0％(RSD=1.5％).结论 该方法简便快速,测定结果准确可靠,可用于金荞麦药材的质量控制.
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HPLC同时测定花生衣中4种成分含量的方法研究
目的:建立花生衣中儿茶素、原花青素B2、表儿茶素和表儿茶素没食子酸酯的含量测定方法.方法:采用KromasilC18色谱柱(250×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.3％磷酸梯度洗脱;流速:0.7 mL/min;柱温:30℃;进样量:10 μL;检测波长278 nm.结果:儿茶素、原花青素B2、表儿茶素和表儿茶素没食子酸酯分别在0.155～1.162 μg、0.156～1.168 μg、0.161～1.204μg和0.151～1.128 μg范围内线性关系良好,回归方程分别为Y=5.367×105X+1.231 ×104,r=0.999 7;Y=5.639×105X+1.475×104,r=0.999 5;Y=6.151 ×105X+4.007× 103,r=0.999 6;Y=4.874×105X+3.277×104,r=0.999 6.平均加样回收率分别为98.3％ (RSD=1.2％)、97.6％(RSD=1.7％)、98.0％ (RSD=1.0％)和98.2％ (RSD=1.3％).结论:本研究建立的方法简便、高效、快速、准确性高、重复性好,可用于花生衣的质量控制.
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儿茶素单体EGCG与ECG体外抗人肝癌细胞BEL-7402的作用
目的 研究儿茶素单体表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和表儿茶素没食子酸酯(ECG)抗人肝癌细胞BEL-7402的作用.方法 形态学观察EGCG、ECG作用后BEL-7402细胞的生长;MTT法检测EGCG、ECG对BEL-7402细胞生长的抑制;流式细胞术(FCM)检测EGCG、ECG诱导BEL-7402细胞凋亡水平;RT-PCR检测增殖相关信号分子Gli2和凋亡受体Fas的表达水平.结果 EGCG、ECG均能以时间依赖和浓度依赖的方式抑制BEL-7402细胞生长,并诱导细胞凋亡.EGCG对BEL-7402细胞的生长抑制和诱导凋亡作用均较ECG强.EGCG和ECG均能下调Gli2的表达,但对Fas表达无影响.结论 EGCG抗人肝癌BEL-7402细胞作用较ECG强.
关键词： 表没食子儿茶素没食子酸酯 表儿茶素没食子酸酯 肝癌 抑制 凋亡 -
EGCG、ECG对异质性耐万古霉素萄球菌抗药性的逆转作用研究
目的 研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和表儿茶素没食子酸酯(ECG)对异质性耐万古霉素葡萄球菌(h-VRS)耐药性的体外逆转作用,并初步探讨其逆转机制.方法 用微量肉汤稀释法测定EGCG、ECG对h-VRS的MIC值；以菌落计数法观察万古霉素在不同浓度EGCG、ECG协同作用下对h-VRS的生长抑制作用；用青霉素结合蛋白(PBP2a)胶乳凝集试验检测EGCG、ECG对待检菌PBP2a生成的抑制效力.结果 EGCG、ECG对h-VRS原代菌株的MIC为128～512μg/mL,子代菌株的MIC为256～512μg/mL;在64～1024μg/mL的EGCG、ECG干预下,待测菌株在万古霉素作用下的生长受到明显抑制,生长菌落数降低程度随药物浓度的增加而升高；EGCG、ECG作用后h-VRS原代菌株PBP2a的凝集浓度为128～256μg/mL,子代菌株PBP2a的凝集浓度为32～128μg/mL.结论 EGCG、ECG能够逆转h-VRS对万古霉素的耐药性,通过抑制h-VRS产生PBP2a是其发挥逆转作用的机制之一,是否还存在其它机制有待进一步的研究.
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儿茶素类化合物增强β-内酰胺类抗生素抗MRSA的作用
目的 确定儿茶素类化合物——儿茶素(C)、袁儿茶素没食子酸酯(ECG)、表没食子酸儿茶素(EGC)联合增强β-内酰胺类抗生素对耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)产生抗菌增敏作用的佳配伍比并对其可能的抗菌增敏作用的机制进行初步探讨.方法 以微量稀释法测定C、ECG、EGC和几种β-内酰胺类抗生素单独对MRSA WHO-2菌株的小抑菌浓度(MIC),以棋盘法测定C、ECG和EGC联合β-内酰胺类抗生素后对MRSA WHO-2菌株和25株MRSA临床分离株的小抑菌浓度(MIC):以荧光分光光度计法和激光共聚焦扫描显微镜法观察C、ECG、EGC单独、两两联合、三者联合后对柔红霉素在MRSA WHO-2菌株菌体聚集的影响.结果 C、ECG、EGC三者联用时可以增强苯唑西林抗MRSA WHO-2菌株的能力,其中C、ECG、EGC按照1∶1∶1的比例配伍后可以取得佳的抗菌增敏效果,后续实验选用此药物配伍.药物总浓度为16μg/mL的C2E(C+ ECG+ EGC)与苯唑西林、头孢唑林、氨苄西林联合时对 于 MRSA WHO-2菌株可产生抗菌增敏作用,对应的FIC指数均为0.38,同样浓度的C2E联合苯唑西林、氨苄西林、头孢唑林、头孢吡肟、泰能后对25株MRSA临床分离株中可产生抗菌增敏作用的菌株数所占比例分别为80％、76％、88％、80％、92％,说明C2E在MRSA临床分离株中同样存在广泛的抗菌增敏作用.经过均为16μg/mL的C、ECG、EGC三者联合处理后,MRSA WHO-2菌株菌体内的柔红霉素在荧光分光光度计下测得的A值为9.26±0.16,大于单独或两两联合处理时的A值(P＜0.05),提示三者联合处理后增强了柔红霉素在MRSA WHO-2菌体内的聚集；激光共聚焦扫描显微镜法也显示出相同的结果.结论 C、ECG、EGC三者联合后可显著增强β-内酰胺类抗生素抗MRSA的作用,其佳配伍比为1∶1∶1.抗菌增敏作用机制可能与其增加药物在菌体内的聚集有关.
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绿茶多酚抑制血管形成作用的研究现状
茶是世界范围内的主要饮料之一.绿茶多酚是绿茶中的主要物质,包括儿茶素、黄烷双醇、类黄酮醇和酚酸;其中儿茶素约占70%,主要有表儿茶素(Epicatechin,EC),表没食子儿茶素(Epigallocatechin,EGC),表儿茶素没食子酸酯(Epicatechin gallate,ECG),表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatecin gallate,EGCG)等成分[1].流行病学研究揭示,摄入绿茶多酚能降低冠心病和肿瘤等疾病的发生率[2].这种良性作用部分来源于其抑制血管形成的能力.
