197 (一)-表没食子儿茶素-3-O-没食子酸对拓扑异构酶Ⅰ和Ⅱ的抑制活性

369 (一)-表没食子儿茶素脂肪酸转导体的抗促癌活性

表没食子儿茶素没食子酸诱导人恶性淋巴瘤CA46细胞系p16基因去甲基化及转录

本研究旨在探讨表没食子儿茶素没食子酯酸(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)诱导人恶性淋巴瘤CA46细胞系p16基因去甲基化及转录激活的可能机制.以生长曲线、MTT法检测EGCG对CA46细胞生长和增殖的抑制作用;利用流式细胞仪DNA含量分析法探讨EGCG对CA46细胞周期的影响;采用巢式甲基特异性PCR法(nested-methylation specific PCR,n-MSP)及DNA克隆测序分析法检测EGCG作用前后CA46细胞p16基因甲基化状态;应用RT-PCR检测p16、DNA甲基转移酶(DNMT3A、DNMT3B)基因mRNA的表达.结果表明:与对照组相比,3组不同浓度EGCG均能明显抑制CA46细胞生长,G0/G1期细胞增加;不同浓度EGCG作用48小时后p16基因甲基化程度减弱;未处理组细胞p16基因呈微弱表达,未用药组、不同浓度EGCG(6、12、24)μg/ml处理组条带灰度值与β-actin1比值分别为(0.05 ±0.01)、(0.19 ±0.03)、(0.39 ±0.10)、(0.85 ±0.09),各处理组p16基因mRNA表达明显高于未用药组,其差异有显著意义(p＜0.05);与对照组相比,EGCG作用48小时后CA46细胞甲基转移酶DNMT3A、DNMI3B mRNA的表达均下降.结论:EGCG可能通过抑制甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B和(或)直接对p16基因去甲基化,使p16基因mRNA表达上调,恢复其活性,从而实现其对细胞周期的调控功能,将细胞阻滞于G0/G1期,抑制CA46细胞的增殖.

同时测定乌龙茶中咖啡因和5种儿茶素类成分的方法研究

目的 建立乌龙茶中咖啡因、表儿茶素、儿茶素、表没食子儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯和表儿茶素没食子酸酯的含量测定方法.方法 采用RP-HPLC,色谱柱为Grace Allitima C18(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.2％乙酸为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为280 nm,柱温为35℃.结果 咖啡因、表儿茶素、儿茶素、表没食子儿茶素、袁没食子儿茶素没食子酸酯和表儿茶素没食子酸酯的质量浓度分别在13.38 ～2 140、6.36～1 018、5.95 ～ 952、6.55 ～1 048、10.83 ～1 732、7.80～1 248 μg· mL-1内呈良好线性关系,相关系数分别为1.000、0.999 9、0.999 9、0.999 9、0.999 5、0.999 6:平均回收率分别为101.14％(RSD=2.06％,n=9)、100.26％(RSD=3.50％,n=9)、102.12％(RSD=4.45％,n=9)和99.57％(RSD=2.08％,n=9)、100.83％ (RSD =2.13％,n=9)和99.12％(RSD=2.49％,n=9).结论 该方法简便、准确、重现性好,可用于乌龙茶的质量控制.不同产地、不同品牌的乌龙茶中咖啡因和5种儿茶素类指标成分含量差异较大.

蛇附子化学成分及抗氧化活性研究

目的 研究蛇附子(三叶崖爬藤Tetrastigma hemsleyanum的块根)的化学成分及抗氧化活性.方法 采用多种色谱技术对其进行分离纯化,应用1H-NMR、13C-NMR、MS、HR-MS等波谱学方法进行结构鉴定;利用DPPH法进行抗氧化活性测定.结果 从蛇附子80％甲醇提取物中分离得到14个化合物,分别鉴定为山柰酚(1)、槲皮素(2)、水杨酸(3)、苯甲酸(4)、氧化白藜芦醇(5)、儿茶素(6)、表儿茶素(7)、表没食子儿茶素(8)、原花青素B2 (9)、原花青素B1 (10)、绿原酸(11)、原儿茶醛(12)、对羟基苯甲酸(13)、原儿茶酸(14);其中化合物2、8、9、10、12抗氧化活性IC50值分别为14.15、14.19、15.99、12.4、15.98 μmol/L,优于阳性药维生素C(IC50值为23.0μmol/L).结论 化合物4～12均系首次从该植物中分离,得到蛇附子中除了黄酮类成分外,也富含较多的有机酸类成分;并且化合物2、8、9、10、12抗氧化活性良好.

HPLC指纹图谱研究五倍子发酵百药煎化学成分变化

目的 建立百药煎HPLC指纹图谱,比较五倍子发酵百药煎化学成分变化,为百药煎的质量评价提供方法.方法 采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法,Waters SymmmetryShieldTMRP18(250 mm×4.6 mm,5μm) C18色谱柱,乙腈-0.1％三氟乙酸水溶液梯度洗脱,体积流量0.8 mL/min,检测波长280 nm,“Chromap Chromafinger 2005 beta 0.1"色谱软件生成百药煎标准指纹图谱,对10批不同批次的百药煎化学成分指纹图谱进行相似度计算,并且通过对照品比对及高效液相色谱与质谱联用技术(HPLC-MS)对主要共有峰进行指认.结果 10批百药煎指纹图谱中有10个共有峰,HPLC指纹图谱各峰分离度良好,各批次间共有峰的相对保留时间RSD均＜1.0％,样品间相似度均＞0.9,共指认出7个共有峰,即没食子酸(1号峰)、表没食子儿茶素(2号峰)、没食子酸甲酯(3号峰)、没食子酸乙酯(5号峰)、表没食子儿茶素没食子酸酯(6号峰)、2,4,6-三-O-没食子酰-α-D-葡萄糖(7号峰)、2,4,6-三-O-没食子酰-β-D-葡萄糖(9号峰);五倍子发酵百药煎后没食子酸、2,4,6-三-O-没食子酰-α-D-葡萄糖的量升高,没食子酸甲酯、没食子酸乙酯、表没食子儿茶素没食子酸酯的量明显降低;表没食子儿茶素、2,4,6-三-O-没食子酰-β-D-葡萄糖为新生成成分.结论 百药煎炮制作用机制与发酵过程使五倍子化学成分发生变化和产生新的化学成分有关.指纹图谱法可用于监控百药煎发酵炮制的质量控制.

茶叶中表没食子儿茶素没食子酸酯的研究进展

茶是中国的传统饮品之一.许多研究表明茶叶具有抗氧化、抗癌、抗动脉粥样硬化等多种功能,其主要活性成分为茶多酚中儿茶素类物质.儿茶素类物质主要包括表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)、表儿茶素(EC)、表没食子儿茶素(EGC).其中EC、EGC为简单儿茶素,ECG及EGCG为复杂儿茶素.研究表明以上4种单体抗氧化能力,以强至弱顺序为EGCG＞EGC＞ECG＞EC.EGCG具有较强的生理活性,因此逐步成为茶多酚研究的重点.本文对其在国内的研究进展进行综述.

粉背南蛇藤醋酸乙酯部位中黄酮类成分的研究

目的 研究粉背南蛇藤醋酸乙酯部位的黄酮类化合物.方法 利用正相、反相硅胶和凝胶色谱柱分离技术分离制备,通过理化性质和核磁共振、质谱等波谱数据鉴定化合物的结构.结果 分离鉴定了4个化合物,分别为大豆素(1)、表没食子儿茶素(2)、没食子儿茶素(3)、大豆素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(4).结论 所有化合物均为首次从该植物中分离得到.

EGCG拮抗鱼藤酮致PC12细胞凋亡的研究

目的:探讨表没食子儿茶素(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对PC12细胞的保护作用及机制.方法:采用鱼藤酮(1μmol/L)处理PC12细胞24 h,建立帕金森病细胞模型;EGCG(5μmol/L)预处理PC12细胞30 min.采用CCK-8测定细胞活力;Annexin V-FITC/PI流式细胞仪检测细胞凋亡率;检测Caspase-3酶活性和线粒体膜电位,并检测Bcl-2表达.结果:1μmol/L鱼藤酮处理后,细胞活力为(38.5±4.3)％,细胞凋亡率为37.7％,DHE和DHR123荧光强度均明显增加,分别为正常组的231％和335％,线粒体膜电位为正常组的45％,caspase-3活性为正常组的145％,Bcl-2表达显著下调.而5μmol/L EGCG预处理后,细胞活力为(69.6±5.6)％,细胞凋亡率降至21.4％,DHE和DHR123荧光强度分别为正常组的178％和287％,线粒体膜电位为正常组的57％,caspase-3活性为正常组的120％,Bcl-2表达上调,与鱼藤酮组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:EGCG对PC12细胞具有保护作用,保护机制与其抗氧化活性及抗凋亡有关.

绿茶应用于化学防癌

一、绿茶的有效成分同抗癌有关的儿茶素类中,现知有4种代表性物质,其结果如图1所示.供本文实验用的绿茶抽提物"polyphenone E(R)"含表没食子儿茶素没食子酸盐(epigallocatechin gallate,EGCg)约60%、其它儿茶素30%,即共含约90%的总儿茶素.

EGCG 对人乳腺癌细胞作用的分子靶点

近年来对于绿茶的抗癌作用已经明确，研究非常广泛，无论是从流行病学、体外细胞培养、体内动物实验还是临床研究都表明绿茶具有抗癌作用，绿茶癌症化学预防作用主要是由于绿茶含有抗癌成分儿茶素，其主要包括：表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、表没食子儿茶素（EGC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）和表儿茶素（EC）［1］。EGCG 为绿茶天然活性提取物，是绿茶中含量高、活性强的多酚类化合物，占多酚类总量的50％-80％。已有大量体外实验对 EGCG的癌症预防作用机制进行了广泛研究［2-4］，EGCG 抗癌作用主要为：1）抑制肿瘤细胞生长和增殖；2）诱导肿瘤细胞凋亡；3）阻断肿瘤细胞侵袭和转移；4）阻止肿瘤血管的生成［5］。目前已鉴定出多个 EGCG 癌症预防作用分子靶点如蛋白酶体、蛋白激酶基质金属蛋白酶及其他潜在靶点。也有研究揭示，一些高亲和力 EGCG 结合蛋白可能是 EGCG 的直接作用靶点［6-8］。

表没食子儿茶素没食子酸酯的药理研究进展

从绿条中提取得到的多酚化合物称为茶多酚(green tea polyphe-nol),后又提取出茶多酚的有效活性成分儿茶素(catechin),它占绿茶干重的30%～42%.

一测多评法测定心脑健胶囊(片)中6种儿茶素

目的 建立一测多评法测定心脑健胶囊(片)(茶叶提取物)中6种儿茶素的含有量.方法 该药物50％甲醇提取液的分析采用Shimadzu Wonda Cract ODS-2色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相0.5％乙酸(A)-乙腈(B),梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长280 nm;柱温35℃.以表没食子儿茶素没食子酸酯为内标,计算表没食子儿茶素、儿茶素、表儿茶素、没食子儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯的相对校正因子,测定其含有量.结果 6种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 8),加样回收率96.00％～98.47％,RSD 2.09％～2.91％,一测多评法所得结果接近于外标法.结论 该方法简便可靠,可用于心脑健胶囊(片)的质量控制.

茶多酚对实验性肝损伤保护作用的研究进展

肝脏是机体的重要代谢器官和解毒器官,作用于机体的多种致病因素均可导致肝细胞的变性、坏死、凋亡以及癌变.茶多酚(Tea Polyphenols,TP)是从茶叶中提取的活性成分,包括表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、表没食子儿茶素(EGC)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)、表儿茶素(EC)等多种成分.

高效液相色谱法测定茶叶中茶多酚及咖啡碱含量

茶多酚(greentea polyphenols,GTP)与咖啡碱是茶叶中重要的功能性成分,茶多酚是各类茶中都含有的水溶性浸出物,许多生理和药理实验表明它对人体无毒,无副作用,是一种天然、高效、安全的抗氧化剂.它还具有抗衰老,抗癌,抗辐射,消除口臭,减少口腔牙垢形成,抗菌灭菌以及降血糖,防治心血管疾病等作用[1].茶多酚抗氧化成分是其中的儿茶素类,它们也是茶多酚中主要的成分,主要是EGCG(表没食子儿茶素没食子酸酯)、EGC(表没食子儿茶素)、EC(表儿茶素)和ECG(表儿茶素没食子酸酯),各儿茶素的抗氧化能力不尽相同,因此测定茶叶中各儿茶素含量对评价茶叶功能品质具有重要意义.咖啡碱在茶叶中含量较高,其药理功能人们已熟知,它具有强心、利尿、提神醒脑、刺激中枢神经系统等作用.本文采用高效液相色谱法(HPLC)建立茶叶中各儿茶素及咖啡碱含量测定方法,现报告如下.

鄂西茶末提取物中抗病毒活性成分含量测定

目的 建立用高效液相色谱法测定鄂西茶末提取物中活性成分表没食子儿茶素(EGCG)含量的方法 .方法 用HPLC法,以水-甲醇-乙酸(98∶1∶1)为流动相,流速为1.00mL/min,紫外检测波长为280nm.结果 EGCG在0.338μg-3.039μg范围内呈良好的线性关系,回收率为99.95%,RSD为0.87%.结论 该法快速、准确、可靠,可作为本品表没食子儿茶素的含量测定方法 .

心脑健片中3种儿茶素的含量测定

目的:考察HPLC法同时检测心脑健片中儿茶素、没食子儿茶素和表没食子儿茶素的含量.方法:色谱条件为BenetnachTMC18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相:A:水:乙腈:磷酸=95.0∶4.5∶0.5,B:水:乙腈:磷酸=49.0∶0.5∶0.5,梯度洗脱;流速:1.0 mL/min;检测波长:270 nm;柱温:25℃;进样量:20 μL.结果:4个批号的心脑健片中儿茶素、没食子儿茶素和表没食子儿茶素的含量分别为24.1～27.7 mg/片、15.9～ 18.5 mg/片和12.2～17.3 mg/片.结论:儿茶素、没食子儿茶素和表没食子儿茶素的HPLC同时检测为心脑健片的质量控制提供了参考.

表没食子儿茶素对缺氧损伤PC12细胞的保护作用

目的 研究表没食子儿茶素(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对化学缺氧损伤PC12细胞的保护作用.方法 建立氯化钴(CoC12)诱导PC12细胞化学缺氧损伤模型,实验分为对照组、EGCG组、缺氧组和联合组,通过测定细胞活力、细胞凋亡率、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、细胞上清液中乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)含量及Bcl-2、Akt蛋白表达,探讨EGCG对受损细胞的保护作用.结果 氯化钴作用后,缺氧组细胞存活率较对照组降低(P＜0.05),联合组细胞存活率较缺氧组升高(P＜0.05);缺氧组细胞凋亡增加至34.2％,EGCG干预后,细胞凋亡率降至23.5％;缺氧组细胞SOD活性较对照组降低(P＜0.05),EGCG干预后可提高氯化钴诱导的细胞SOD活性降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).缺氧组细胞上清液中的LDH活力增高,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜ 0.05);EGCG处理后能降低氯化钴引起的上清液中LDH活力增加(P＜0.05).缺氧组细胞Bcl-2表达降低(P＜0.05),EGCG处理后能抑制氯化钴诱导的Bcl-2表达降低(与缺氧组比较P＜0.05),并提高细胞p-Akt的表达(与缺氧组比较P＜ 0.05),各组总的Akt表达量均无改变.结论 本缺氧模型可诱导PC12细胞凋亡,EGCG对缺氧损伤PC12细胞具有明显的保护作用.

儿茶素类化合物增强β-内酰胺类抗生素抗MRSA的作用

目的 确定儿茶素类化合物——儿茶素(C)、袁儿茶素没食子酸酯(ECG)、表没食子酸儿茶素(EGC)联合增强β-内酰胺类抗生素对耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)产生抗菌增敏作用的佳配伍比并对其可能的抗菌增敏作用的机制进行初步探讨.方法 以微量稀释法测定C、ECG、EGC和几种β-内酰胺类抗生素单独对MRSA WHO-2菌株的小抑菌浓度(MIC),以棋盘法测定C、ECG和EGC联合β-内酰胺类抗生素后对MRSA WHO-2菌株和25株MRSA临床分离株的小抑菌浓度(MIC):以荧光分光光度计法和激光共聚焦扫描显微镜法观察C、ECG、EGC单独、两两联合、三者联合后对柔红霉素在MRSA WHO-2菌株菌体聚集的影响.结果 C、ECG、EGC三者联用时可以增强苯唑西林抗MRSA WHO-2菌株的能力,其中C、ECG、EGC按照1∶1∶1的比例配伍后可以取得佳的抗菌增敏效果,后续实验选用此药物配伍.药物总浓度为16μg/mL的C2E(C+ ECG+ EGC)与苯唑西林、头孢唑林、氨苄西林联合时对 于 MRSA WHO-2菌株可产生抗菌增敏作用,对应的FIC指数均为0.38,同样浓度的C2E联合苯唑西林、氨苄西林、头孢唑林、头孢吡肟、泰能后对25株MRSA临床分离株中可产生抗菌增敏作用的菌株数所占比例分别为80％、76％、88％、80％、92％,说明C2E在MRSA临床分离株中同样存在广泛的抗菌增敏作用.经过均为16μg/mL的C、ECG、EGC三者联合处理后,MRSA WHO-2菌株菌体内的柔红霉素在荧光分光光度计下测得的A值为9.26±0.16,大于单独或两两联合处理时的A值(P＜0.05),提示三者联合处理后增强了柔红霉素在MRSA WHO-2菌体内的聚集；激光共聚焦扫描显微镜法也显示出相同的结果.结论 C、ECG、EGC三者联合后可显著增强β-内酰胺类抗生素抗MRSA的作用,其佳配伍比为1∶1∶1.抗菌增敏作用机制可能与其增加药物在菌体内的聚集有关.

绿茶多酚抑制血管形成作用的研究现状

茶是世界范围内的主要饮料之一.绿茶多酚是绿茶中的主要物质,包括儿茶素、黄烷双醇、类黄酮醇和酚酸;其中儿茶素约占70%,主要有表儿茶素(Epicatechin,EC),表没食子儿茶素(Epigallocatechin,EGC),表儿茶素没食子酸酯(Epicatechin gallate,ECG),表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatecin gallate,EGCG)等成分[1].流行病学研究揭示,摄入绿茶多酚能降低冠心病和肿瘤等疾病的发生率[2].这种良性作用部分来源于其抑制血管形成的能力.