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香水有毒?!
香水是一种混合了香精油、固定剂与酒精或乙酸乙酯的液体,用来让物体(通常是人体部位)拥有持久且悦人的气味.精油取自于花草植物,用蒸馏法或脂吸法萃取,也可使用带有香味的有机物.固定剂是用来将各种不同的香料(包括有香脂、龙涎香以及麝香猫与麝鹿身上气腺体的分泌物等)结合在一起.酒精或乙酸乙酯浓度则决定了是香水、淡香水还是古龙水.香水的保存期限通常是五年.
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不同固定剂对冰冻切片免疫组化结果的影响
目的:探讨不同固定剂对冰冻切片免疫组化结果的影响.方法:选择从手术室送检的被检测抗体能表达的正常组织或肿瘤冰冻切片标本6例,分别为常见的组织或肿瘤6种,置于6种不同冰冻固定液,分别对6种固定剂制作完成的冰冻切片的免疫组化染色效果进行评价.结果:EAF固定剂与丙酮固定剂、EAF固定剂与AAF固定剂、EAF固定剂与95%酒精固定剂,以及甲醇固定剂与丙酮固定剂之间对冰冻切片免疫组化染色结果的影响,差异均具有统计学意义(P<0.05);EAF固定剂的冰冻切片免疫组化染色效果优于其他固定剂,差异有统计学意义(P<0.05).结论:使用EAF固定剂进行冰冻切片制作,可获得佳的免疫组化染色效果.
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固定剂及固定时间对DNA提取质量的影响
目的探讨10%福尔马林、95%乙醇、中性缓冲福尔马林、4%多聚甲醛-0.1 mol/L磷酸缓冲液4种固定剂对新鲜组织DNA质量及PCR的影响.方法选取16例单纯性扁桃体炎组织标本的冷冻切片,进行不同时段的固定,比较提取物OD260nm/OD280nm比值、DNA浓度和PCR结果.结果各组之间同一时间、同一组内不同时间OD260nm/OD280nm比值比较差异不显著(P＞0.05);而同一固定时间段,个别组间DNA浓度以及同一组内不同时间DNA浓度差异显著(P＜0.05).固定72h后,各组的PCR阳性率分别为66.7%、100%、93.3%、80%、100%.结论95%乙醇固定效果佳,其余3组固定剂随固定时间的延长,PCR阳性率逐渐降低.
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不同固定剂对肾穿刺冷冻切片免疫荧光染色的影响
肾穿刺冷冻切片荧光染色是明确肾脏疾病病理检查的基本手段之一,通过荧光染色可以判断有无免疫复合物沉积,以及沉积的形态、部位和强度等.如果固定剂选择不适宜,就会导致组织破坏、结构不清晰,对随后的免疫荧光染色产生很大影响,假阳性率高,定位不准确,易造成误诊[1].为此,我科近2年来,对938例肾穿组织冷冻切片选择了不同固定剂固定,并进行了免疫荧光染色的观察,寻求一种佳的固定剂.
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固定剂在快速形成细胞凝块中的作用与效果
细胞凝块经固定脱水制成的细胞学蜡块可用于细胞涂片比对、免疫组化及分子学检测,已成为细胞学诊断的一项重要途径[1-3].细胞凝块的制作需要考虑2个条件:①保证细胞微细结构完好性;②尽量缩短细胞的凝集时间;这样可使细胞学蜡块真正成为细胞学的常规制作方法.4％中性缓冲甲醛、95％乙醇均为细胞常用的固定剂,因其固定原理不同,对细胞的固定状态亦有差异.我们在工作中一般采用95％乙醇制作细胞凝块,或先用4％中性甲醛固定15 min后再用95％乙醇制细胞凝块,本文对两种方法做了比对试验,发现用后者形成的细胞凝块在HE染色、免疫组化染色中均优于前者.
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不同固定剂对铁染色效果的影响
普鲁士蓝铁染色对各种血液病的诊断和鉴别诊断具有重要的辅助意义省在骨髓活检塑料包埋中,常规使用的重铬酸钾、升汞、甲醛(PCF)混合固定液影响铁染色效果的报道尚未见到.为了探讨小同固定剂对铁染色的影响,本文用6种不同的固定剂分别对多种血液病患者脾冷冻切片固定,进行铁染色半定量观察.
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环保型超声组织处理试剂在超声组织处理仪中的应用
目前国内应用超声处理仪制备快速石蜡切片,多使用传统的组织固定剂、脱水剂、透明剂来处理组织,操作步骤多,影响切片质量的因素较多.我们在超声处理仪中应用集固定、脱水、透明于一体的环保型生物组织处理试剂处理组织,方法简单,切片质量好,不影响免疫组织化学染色效果.
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免疫细胞化学中不同固定剂对核蛋白检测效果的影响
目的:观察免疫细胞化学中不同固定剂对乳癌易感基因(brca1)和表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)在MCF-7细胞中的亚细胞分布的影响.方法:采用免疫细胞化学的方法,按照ABC试剂盒提供的操作步骤观察用不同固定剂及不同缓冲液时BRCA1和EGF在MCF-7细胞中定位情况.结果:如果细胞用3.7%的甲醛-PBS溶液固定,抗体稀释液及细胞冲洗液皆用PBS,则BRCA1和EGF均着色于细胞浆;若用3.7%的甲醛-PBS溶液固定细胞, 而抗体稀释液及细胞冲洗液更换为含有0.1%吐温20或0.05%TritonX-100的PBS,则BRCA1和EGF均主要着色于细胞核.结果还表明,用纯甲醇、95%乙醇或冰醋酸∶甲醇(1∶3)固定细胞,无论是单用PBS或是含有化学去垢剂的PBS作为抗体稀释液及细胞冲洗液, BRCA1和EGF均主要着色于细胞核.结论:用免疫细胞化学技术检测细胞核蛋白时,好选用甲醇作为固定剂.如果用甲醛固定细胞,建议用能给核膜打孔的化学去垢剂进一步处理细胞,否则会导致错误结果出现.
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固定液及抗原修复液pH值对免疫组化染色的影响
目的:研究固定液pH值和抗原修复液pH值对免疫组化染色结果的影响.方法:取正常皮肤、胃粘膜、子宫肌瘤、乳腺癌组织,分别用pH值3.0,5.0,7.0,8.0,10.0的缓冲福尔马林固定液固定. 选用EMA、SMA、ER、CK(AE1/AE3)为一抗, Evinsion二步法免疫组化染色.染色时分别用pH值6.0,7.0,8.0的抗原修复液或用市售pH值8.0的EDTA作微波抗原修复. 结果:不同条件可造成阳性细胞数量及染色强度变化,本实验得知CK(AE1/AE3)、ER是以阳性细胞数目改变为主,SMA、EMA是以染色强度改变为主.结论:(1)使用10%中性或微碱性缓冲福尔马林固定液,固定效果佳.(2)本实验所用的4种组织,抗原修复液选择pH值7.0、8.0均优于pH值6.0,皮肤组织选择EDTA(pH值8.0),雌激素受体选择pH值8.0时染色效果佳.(3)固定液pH值>8.0容易造成背景染色,修复液>8.0影响切片附着,造成脱片.
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固定时间对碱性磷酸酶染色积分的影响
目的 中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)染色为常用血液细胞化学方法.多种因素影响 NAP积分.遂探讨10%甲醛甲醇固定时间对NAP染色积分影响. 方法血液病患者35例.取每例患者骨髓涂片3张,分别用4℃的10% 甲醛甲醇固定15s、30s及60s;水洗后,进行Kaplow偶氮偶联法 NAP染色及计算积分.结果 115s、30s及60s三组积分均数及中位数基本呈依次降低,差别不大;但同一患者,3种固定时间积分相差较大.Friedman秩和检验示校正x2=8.0000, P=0.0183.以15s为对照组,两两比较q'检验示15s与30s比较, q'=1.3148,P＞0.05;15s与60s比较,q '=2.6295,P＜0.05.结论 NAP染色时,骨髓涂片固定时间统一为15s或30s,有助于积分稳定及观察疾病疗效.
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头发中氟化物测定方法的改进
建立了一种氟离子选择电极测定头发中氟的方法.用0.4%乙酸镁10 ml作为头发中氟的固定剂,550℃灰化2 h,加入10 ml TISAB溶液后用氟离子选择性电极测定,回收率在96.0%～101.0%之间,变异系数为0.16%～1.20%;固定剂中Mg2+≤250 mg/L 对测定不产生干扰;取发样2 g,低检出浓度为0.5μg/g.
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血小板过氧化物酶影响因素及超微结构定位
原始巨核细胞缺乏特异的形态特征,给急性巨核细胞白血病(AML-M7)的临床诊断带来一定困难[1].电镜血小板过氧化物酶(PPO)检测技术对AML-M7的诊断及鉴别诊断有重要作用,我们比较了固定剂作用前后骨髓细胞PPO活性,并用快速包埋方法,透射电镜下作了观察.现报告如下.
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不同固定剂及渗透方法对免疫荧光技术中EGFR内吞转运观察效果的影响
目的：探索适合表皮生长因子受体（EGFR）内吞转运免疫荧光观察的固定和渗透方法。方法：采用OLYMPUS BX61荧光显微镜及成像系统，对不同固定剂（4％多聚甲醛，甲醇，4％多聚甲醛＋甲醇，丙酮，丙酮与甲醇体积比1∶1的混合液）配合不同渗透方法（0．04％saponin，0．1％TritonX－100）得到的EGF刺激后0 min和15 min两个时间点的EGFR免疫荧光图像进行对比分析。结果：0 min时EGFR主要定位于细胞质膜，4％多聚甲醛＋甲醇的固定方法，配合使用0．04％saponin，可以观察到细胞膜上明显、清晰、连续的EGFR信号。针对EGF刺激15 min后内吞进入细胞的EGFR，不同固定方法对观察效果没有明显影响。但与配合使用0．04％saponin相比，0．1％TritonX－100进行渗透能充分暴露EGFR在细胞核内的信号。结论：温和的固定和渗透方法可获得较好的EGFR膜定位信号。针对内吞转运中的EGFR需要较强的渗透剂，以确定EGFR在细胞内准确的定位。
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显示组胺阳性细胞免疫组化技术的方法
目的选择光镜下显示组胺阳性细胞免疫组织化学技术所适用的固定液及组胺抗体的佳稀释度.方法在4种常用固定液中用免疫组化SP法选择效果佳的固定液,将组胺浓缩型抗体稀释十个等级梯度,从中选取佳抗体稀释度.结果4%多聚甲醛液固定效果好,组胺抗体以1:400稀释度佳.结论确定了显示组胺阳性细胞免疫组化技术佳的固定液和组胺抗体稀释度,为进一步研究组胺细胞的形态和功能提供实验技术方面的资料.
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电镜样品制备过程中四氧化锇的改进保存法
在医学、生物学电镜研究工作中,四氧化锇是一种几乎必不可少而又很昂贵的固定剂.四氧化锇是一种强氧化剂,容易被热和光促进氧化,须于冷暗处保存,并有强烈的挥发性,其蒸气有剧毒作用,极易挥发.因此平时不易保存,一般电镜技术著作,都介绍用密合的暗色磨口瓶冰箱内保存四氧化锇固定液.但有时瓶口稍有不严或关闭时疏忽,即有蒸气逸出,使固定液内四氧化锇含量下降,又易与冰箱内其它物品发生化学作用,还可将冰箱内壁熏黑后溶液没用完就变色失效,造成浪费,尤其规模较小的实验室,工作量很少,但又必须用此固定液,配制后又不能立即用完,所以溶液的保存问题,尤为重要.
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标本固定对组织总RNA和病毒RNA的影响
目的:探讨固定剂、固定时间及温度对RNA病毒感染组织总RNA的完整性、得率及病毒RNA扩增的影响.方法:实验于2004-01/2006-09在武汉大学公共卫生学院流行病学实验室及武汉大学医学院病毒研究所实验室完成.取汉坦病毒76-118株接种乳鼠的感染组织,以沉淀脱水类固定剂体积分数为1的甲醇、体积分数为0.75的乙醇、体积分数为1的丙酮以及醛类固定剂4%的多聚甲醛磷酸缓冲液(4%PFA)、体积分数为0.1的甲醛共5种固定剂,分别在4 ℃和室温下固定病毒感染组织6,12,24 h和48 h.从固定后的标本中直接提取组织总RNA,检测RNA完整性及组织总RNA得率.用巢式RT-PCR扩增病毒RNA序列,电泳检测PCR产物并行灰度扫描.对RNA得率及PCR产物电泳所测灰度值进行统计学分析,反映各种固定方式对病毒RNA和细胞总RNA降解的影响.结果:①RNA完整性:与立即冰冻或新鲜组织比较,体积分数为1的甲醇固定24 h,RNA完整性损伤不明显;体积分数为0.75的乙醇、体积分数为1的丙酮固定12 h后RNA开始出现损伤带,24 h出现明显的损伤;而体积分数为0.1的甲醛、4%PFA固定6 h就开始出现明显的损伤,固定24 h几乎很难看清RNA条带.②RNA得率析因分析结果显示,不同固定剂、固定时间、固定温度下固定的组织中所提RNA的得率差异有显著性(P＜0.01),并有显著性交互作用(P＜0.01).4 ℃甲醇固定6 h的RNA得率高,体积分数为0.1的甲醛在室温下固定48 h得率低.③固定后标本巢式RT-PCR,除体积分数为0.1的甲醛固定48 h后扩增结果不稳定外,其余各固定方式均能扩增出特异性带.对电泳结果进行灰度扫描时,与甲醛相比,甲醇、乙醇和丙酮固定的标本中扩增的产物电泳条带更亮,灰度值更高(P＜0.01).结论:①对RNA完整性的保存沉淀脱水类固定剂明显优于醛类固定剂.②对RNA病毒感染组织固定时间不宜偏长,固定过程的温度宜选用4 ℃.
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组织固定的探讨
固定是将新鲜组织浸人某种固定剂内,使细胞内蛋白质凝固,从而防止组织的死后变化,将生活时的结构保存下来,使组织的形态结构与生前相仿.
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固定剂、封片剂、温度及除菌方式对量子点标记细胞的影响
目的:观察不同固定剂、封片剂、温度及除菌方式对3种量子点标记小鼠腹腔巨噬细胞和正常皮肤的影响.方法:利用发射波长为610、 523和576 nm的3种量子点,以具有吞噬能力的小鼠腹腔巨噬细胞及正常皮肤为载体,观察不同的固定剂、封片剂、温度及除菌方式对量子点标记细胞及组织的影响.结果:3种量子点对小鼠腹腔巨噬细胞和皮肤组织没有明显的毒性,并且在6～72 h内保持荧光不衰减.高于56℃的温度会使量子点失去发射荧光的特性.较好的除菌方式为 60Co照射和微孔滤膜过滤.稳定的封片剂为水溶性的ClearmountTM.吞噬了量子点523的巨噬细胞,可使用多种固定液固定.结论:不同波长量子点标记小鼠腹腔巨噬细胞和皮肤组织的效能受固定剂、封片剂、温度和除灭菌方式的影响.
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小鼠肾发育过程中增殖与凋亡相关蛋白在树脂切片上的表达
在石蜡切片或冷冻切片上做免疫组织化学实验经常遇到组织结构不全的问题.树脂包埋的组织可以展示保存良好的形态结构,但树脂包埋所采用的醛类固定剂可以和组织抗原交联,同时环氧树脂也掩盖了抗原的共价键,因此树脂切片上的抗原表达很弱[1].采用适当浓度的强碱溶液(2 g KOH溶于15ml甲醇与环氧丙烷溶液)蚀刻环氧树脂可以充分暴露与固定剂交叉结合并被树脂覆盖的抗原2-4],同时采用高温高压加热可以提高其抗原性[5].但是,在树脂切片上应用强碱溶液或许能极大地影响抗原、固定剂和树脂包埋成分的分子和空间结构.因此,对于形态学和病理学研究者来说,改善树脂切片的免疫显色是一项长期而困难的任务.
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钌红染色在显示肺泡表面活性物质超微结构中的作用
采用戊二醛和锇酸浸没、或经支气管灌注固定肺组织,很难显示肺泡衬里层肺表面活性物质(PS)超微结构,其原因是固定剂取代肺泡内空气时,PS常被移位[1].
