首页 > 文献资料
-
脑内局部应用神经节苷脂GM-1治疗脑出血的实验研究
一、材料和方法采用大鼠尾动脉抽血,自体血注入模型.共分为6组,每组n=12.模型组:抽取50μl尾动脉血,注入右侧尾状核;局部给药组:再分为大、中、小剂量组.制作模型后6h分别于血肿腔注入GM-1 2mg/kg,0.8mg/kg和0.32mg/kg,液量按0.2ml/kg计算,并经尾静脉注入相等体积对照液;或于尾静脉注入GM-1 2mg/kg,同等体积对照液注入右侧尾状核,即全身给药组;同时设立假手术组.术中控制大鼠肛温在36℃~37℃之间.以上各组动物均于注血后72h处死,采用干湿重法测定脑水含量(n=8),或在灌注固定后行组织学检查(n=4),并作相对损失神经元计数,后将实验结果进行统计学分析处理.
-
颅脑损伤后转移生长因子β1表达的研究
一、材料与方法1.研究对象:大鼠70只,随机分为对照组、伤后30min、1h、6h、24h、48h、168h等7组.2.研究方法:采用改进后Feeney's自由落体装置造成大鼠脑创伤模型.对照组不做处理.大鼠颅脑损伤后于相应观测时间点进行镧醛固定液灌注,取大鼠损伤区组织块,对照组取材部位同脑创伤,电镜观察血脑屏障变化.大鼠颅脑损伤后于相应观测时间点采用含有4%多聚甲醛的磷酸缓冲液原位灌注固定,取损伤区脑组织,免疫组织化学染色观察.
-
脑组织灌注固定脱水后去除冰晶方法的建立及其在微波辐射致脑损伤中的应用
目的 探讨微波辐射后脑组织灌注固定脱水后3种去除冰晶的方法及其应用,寻找冰冻切片防止冰晶形成的佳方法.方法 二级雄性Wistar大鼠12只,采用30 mW/cm2微波辐射后6 h用1%戊巴比妥钠(3 ml/kg)麻醉,4%多聚甲醛50~80 ml,灌注10~15 min,开颅取海马组织,于4%多聚甲醛固定液中固定24 h后置于20%~30%的蔗糖溶液中,4℃过夜,待其沉底后取出,分别采用直接OCT胶包埋、液氮骤冷复温5 min OCT包埋及异戊烷-液氮速冻复温5 min OCT包埋处置,冰冻切片,Timms染色,光镜观察大鼠海马组织结构改变及冰晶产生情况.结果 直接OCT胶包埋镜下观察,大鼠海马组织切片平整,出现较多、较大的冰晶网眼,细胞结构出现变形.液氮骤冷防冰晶法见大鼠海马组织结构完整,冰晶网眼较少且较小.异戊烷-液氮速冻防冰晶法大鼠海马组织未见冰晶组织,结构完整.结论 异戊烷-液氮速冻防冰晶法是佳的脑组织冰冻切片防冰晶方法,可客观反映微波辐射后脑组织结构变化.
-
一种改进的大鼠脑组织灌注固定方法
目的:改进常规脑灌注固定方法存在着的一些不足,使其组织结构更佳,提高灌注效率.方法:改进灌注针头和灌注液,改变灌注的循环通路.结果和结论:提高了灌注效率,节省灌注时间和灌注液,结构更加清晰,结果可靠.为有关脑组织的各种常规病理形态、免疫组化、原位杂交、原位PCR的实验研究提供了一种更加简便、快捷、有效可行的方法.
-
大鼠肺组织制片方法的改进
肺为含气器官,固定液难以渗透.目前采用的气管灌注固定法虽然在一定程度上克服了传统的浸泡固定法、血管全身灌注固定法导致的肺泡萎陷、肺组织结构不清等缺点,但仍存在肺淤血和肺泡腔红细胞污染的弊端[1,2].作者经过反复实验发现先结扎气管后迅速断头放血,再行气管灌注固定,可收到理想效果.
-
大动物灌注固定方法的探讨
在动物实验结束后取材过程中,为了避免抗原的损失,需要对动物进行灌注固定,由于大动物作为实验对象相对来说比较少,其固定方法 一直没有完善,本文将就大动物的灌注固定方法 做一探讨.
-
经颈总动脉灌注固定大鼠海马组织30例体会分析
目的 观察经颈总动脉灌注固定对大鼠海马组织灌注效果的影响.方法 30只SD大鼠经颈总动脉插入灌注针,灌注生理盐水后再灌注4%多聚甲醛,断头取脑,4%多聚甲醛中浸泡固定24 h后制作石蜡切片,HE染色及免疫组化染色后观察海马组织形态.结果 经颈总动脉灌注固定大鼠海马组织,具有灌注时间短、灌注液体量少、灌注效率高等优点;固定后的海马组织切片染色效果良好,切片染色清晰,染色满意;海马组织中的神经元排列紧密有序,形态规则正常.结论 经颈总动脉灌注固定海马组织是一种可以应用于基础研究的组织灌注固定方法.
-
灌注固定大鼠的技术操作及常见问题
在组织学取材和科研活动中常常要用到大鼠,取材时组织材料一要尽量保持活体时的状态,二要尽量避免使动物长时间处于痛苦和濒死状态,引起病理假象,干扰科研结果.灌注固定是使动物在麻醉状态下,先灌入生理盐水,再灌入固定液,即组织材料还是活体的时候即被初步固定,这样能够大限度地保持组织细胞活体时的状态,避免抗原的丢失.动物在被处死时没有痛苦,组织器官的结构更加清晰.现将多年来进行灌注固定大鼠的技术操作和常见问题分析如下.
-
钌红染色在显示肺泡表面活性物质超微结构中的作用
采用戊二醛和锇酸浸没、或经支气管灌注固定肺组织,很难显示肺泡衬里层肺表面活性物质(PS)超微结构,其原因是固定剂取代肺泡内空气时,PS常被移位[1].
-
eGFP标记肿瘤细胞小鼠模型的建立与应用
目的:以携带绿色荧光蛋白基因(eGFP)的重组逆转录病毒(RV)标记肿瘤细胞,建立小鼠体内长期、系统肿瘤细胞研究模型,并初步探讨其应用.方法:制备高滴度eGFP-RV,感染小鼠白血病P388细胞,有限稀释法获得eGFP+的单细胞克隆;在体外和DBA/2小鼠体内,分别以流式细胞术、荧光倒置显微镜、冰冻切片和普通病理切片、半固体集落培养和PCR等方法,观察小鼠体内eGFP标记肿瘤细胞的效率、定位和时效.结果:eGFP基因导入率达80.2%,经克隆筛选后eGFP+率>99.2%.P388-eGFP细胞体外传代3个月后eGFP+率为95.2%,体内序贯接种(56.3±1.25)d后eGFP+率为(93.3±0.50)%(n=3).eGFP基因导入未影响P388细胞的体内外生物学特性.多聚甲醛灌注固定法和液氮速冻法可有效保存组织中的荧光,灌注固定法制备的标本适用于多种病理和组化染色观察;外周血、肝、脾、脑等脏器中eGFP+细胞的分布、增殖,可用流式细胞仪和荧光显微镜等动态、定量观察,并可通过外周血的荧光细胞变化动态观察肿瘤细胞对治疗的反应;无菌获得的eGFP+细胞可用于体外培养或体内序贯移植;PCR等技术可提高微量肿瘤细胞检测的敏感性.结论:成功建立的模型可在体内外以多种方法长期、动态、敏感地追踪观察荧光标记的肿瘤细胞,可广泛应用于肿瘤和细胞组织工程等领域.
-
大鼠脑组织灌注固定方法的改进
目的:免疫荧光等实验研究中良好的组织灌注固定效果对实验结果至关重要。改进大鼠脑组织灌注固定操作方法,提高灌注固定效果。方法改变以往开胸术式,沿腹中线自剑突剪开皮肤至下颌部,暴露两侧胸廓,游离胸前壁;处理灌注针头,剪除针尖,左手捏持心脏,右手持眼科剪在心尖部剪开一小口,将灌注针沿小口插入左心室并推送至升主动脉,固定使之不能退出;夹闭胸主动脉后灌注固定,打开调节阀,灌注等渗盐水,剪开右心耳,当流出液体清亮时,不拔出灌注针,更换输液管,4%多聚甲醛进行固定,先快后慢,颈部僵硬后,完成固定。结果采用此方法,大鼠只有头颈部和双上肢完成固定,较传统方法省时、省液,免疫荧光图片清晰。结论改进后的操作,提高了灌注固定效果,值得推广。
-
断层影像解剖学标本的制作与封装
随着各种影像诊断技术的飞速发展及临床的广泛应用,作为形态学基础的断层影像解剖学已形成一门新的学科.为适应临床影像诊断、治疗的需要,近年来我室开展了断层影像解剖学的教学和科研工作,我们在标本制作和封装方面进行了有益的探索.1 标本制作1.1 材料选择制作断层影像解剖学教学标本,选用传统防腐固定的成人尸体,以中青年为好,外观体态均称,皮下脂肪少,无特殊疾病与生理缺陷,淹死或中毒死亡的尸体是制作标本的佳材料[1].如进行正常断层影像解剖学研究,则选用新鲜尸体,按正常解剖位置放置,进行灌注固定,固定2~3个月即可使用.此外,尚可根据科研课题的实际需要,进行管道填充、造影等灌注[2].
-
边缘系统相关膜蛋白mRNA在纹状体边缘区的转录分析
纹状体边缘区(Marginal djvision,MrD)由舒斯云教授于1988年首先发现并进行了大量研究,发现该区域与学习、记忆有关,并提出其可能为边缘系统的一部分.为证实这一假设,本研究在大鼠脑组织切片中对边缘系统特定标记分子-边缘系统相关膜蛋白(Limbic system-associated mcmbrane protein.LAMP)mRNA在该区域的转录进行了测定.实验取雄性SD大鼠10只,10%水合氯醛腹腔麻醉后,剖开胸腔,切开右心房,将穿刺针通过左心室进入升主动脉,4℃生理盐水冲洗后,4%多聚甲醛灌注固定,30%蔗糖中沉底后,应用冰冻切片机-20℃下切片,厚度为30μm.采用核酸分子原位杂交技术对LAMP的mRNA转录进行测定.原位杂交所用探针由含53个碱基的寡核苷酸构成,其序列取自大鼠LAMP的cDNA第918至970个核苷酸,由中科院上海生化所DNA合成室合成,应用地高辛标记,杂交完毕后,应用NBT显色,光学显微镜下观察.
-
对经腹主动脉灌注固定兔睾丸的实验探讨
组织固定是组织染色的一个重要步骤,固定好,切片染色效果才可能好,实验的定性、定量结果才可能准确[1、2].组织固定有浸润固定和灌注固定两种方法,灌注固定又分全身灌注固定和局部灌注固定,有作者认为局部灌注固定效果比全身灌注固定好[3],兔睾丸组织的灌注固定采用的是全身灌注[4、5],尚未见采用经腹主动脉灌注固定睾丸的报道.本实验对睾丸组织进行了经腹主动脉的局部灌注固定,现将灌注方法报道如下,以与同行商榷.
-
改良溃变神经纤维镀染方法经验介绍
对于溃变神经纤维的镀染,Nute法是较可靠的形态学方法之一,但存在着程度较为复杂、烦锁等问题.为此我神经切片研究室在实际应用中,对于一些实验步骤,大胆地进行了改良和简化,结果与改良前相比没有显著差异,但操作过程却比原方法简便、易行、结果稳定 ,使实验者的工作量明显下降.现将改良的关键处介绍如下:一、固定:原方法:灌注固定先灌0.9%生理盐水冲出血液,再以5%重铬酸钾和2.5%铬酸钾的水溶液500ml灌注固定.取出组织固定于10%中性福尔马林1w或更长至3m.改良后,我们增加了取材后组织再浸泡于灌流液中2~4hr这一步骤,它可防止灌流时灌流液不能完全达到周缘神经组织部位,同时缩短了组织后固定的时间,只将组织再浸入4% 多聚甲醛固定1~7d即可.二、包埋和切片:原方法:取5~10mm厚的组织流水冲洗24hr,放入装有25%明胶水溶液的培养皿中(加盖),于37℃温箱浸泡12~18hr进行明胶包埋,置于10%福尔马林中6 hr或更长.改良后我们在切片前增加了将组织浸入10%或20%的蔗糖液中过夜这一步骤,次日再将组织骤冷,在恒冷箱中切片,并且将切片置于0.05M磷酸缓冲液,贴至挂过明胶的载玻片上行染色操作.这样我们省略了明胶包埋这一复杂程序,使实验单位易行.三、封固:原法是将切片浸入10%明胶水溶液与等量95%酒精中5min,切片摊于载玻片上,使载片倾倾斜倒出多余水,勿使切片完全干燥,再用95%酒精,浸泡吸水纸压平浸入95% 酒精使明胶凝固、脱水、透明封片.改良后我们在染色后将片直接用梯度酒精快速脱水,二甲苯透明,树胶封固,可省去明胶贴片、压片、凝固等步骤.
-
对改进尸体灌注方法的探讨
人体解剖学是一门重要的医学基础课程,而实验教学又是解剖教学的重要环节,实验学时又是解剖总学时的一半以上.再加上近年来我院招生人数的增加,每年都有1000多学生要上实验课.由于学生在上实验课时,对标本的反复扪摸和牵拉,每年都要损坏不少的标本.为了保证教学需要和提高教学质量,我们几位解剖实验技术人员又要不断地补充新的教学标本.要补充新的标本,就需要有尸体.在我们这样一个具有很长封建历史的国度里,自愿捐献尸体,为医学作贡献者很少,因此尸体来源很不容易.在目前全国医学院校都存在尸源紧缺的情况下,为了保证我院的解剖实验教学能顺利进行,我们几位实验技术人员不分季节、不辞劳苦,到南充市及其临近的县市去搜集无主尸体.为了提高热天尸体灌注固定的成功率,我们又改进了原来的尸体灌注方法,现介绍如下.
-
良好保存血管在体形态取材的一种方法
0 引言我们观察了动脉血管的固定方法(浸泡固定或灌注固定)、固定时血管的生理状态(处于收缩或舒张)等因素对保存血管在体形态的影响.