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神经匀浆激活的巨噬细胞条件培养基对鸡胚背根节神经突起生长的影响
为探讨巨噬细胞在神经再生中的作用机制,本研究用溃变的神经匀浆激活巨噬细胞,将该巨噬细胞条件培养基作用于神经细胞,以观察溃变神经能否激活和诱导巨噬细胞参与神经再生.切取预溃变1d的大鼠自体坐骨神经并放入无血清DME/F12培养基中磨成匀浆,然后注回大鼠腹腔.
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大鼠肝硬化门腔静脉分流术后皮质脊髓束变化的研究
采用铜银法溃变纤维染色技术,研究大鼠肝硬化门腔静脉分流术后皮质脊髓束的变化.结果表明,肝硬化门脉分流术后大鼠脊髓后索腹侧部可见黑色溃变纤维,大鼠肝硬化门脉分流可引起皮质脊髓束的脱髓鞘变化.
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肥大性下橄榄核变性
肥大性下橄榄核变性(HOD)为一种特殊类型的跨突触神经元变性,是小脑齿状核-中脑红核-延髓下橄榄核神经元联系环路受损而引起的下橄榄核神经元的继发性变性改变.其主要病理变化包括神经元肥大、空泡样变性和胶质细胞增生,特征性病理表现基于以下两点:(1)与神经元溃变不同,肥大性下橄榄核变性被称为"跨突触变性",即下位神经元损伤引发的上位神经元的数量、结构和功能改变.
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皮质脊髓束半横断损伤模型大鼠皮质脊髓束的超微结构改变
背景:有关皮质脊髓束受损后损伤附近及远处超微结构的整体变化的报道甚少.目的:观察大鼠皮质脊髓束半横断损伤后皮质脊髓束超微结构的变化.方法:选择性切割SD大鼠延髓左侧锥体,建立皮质脊髓束半横断损伤模型,于造模后4,14,28 d取受损皮质脊髓束,制备电镜标本.结果与结论:透射电镜观察发现受损皮质脊髓束髓鞘和轴索发生肿胀,形态不规则.随着时间的延长,溃变进行性加重,受损皮质脊髓束主要表现为髓鞘破坏、溶解及轴索脱髓鞘病变、胞浆浓缩、细胞器增多及空泡样变性.脊髓颈、胸、腰段受损皮质脊髓束的溃变比损伤部位严重.
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脊髓损伤修复机制和治疗展望
脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的治疗一直是医学界的难题之一.它所造成的生活不能自理和严重并发症等问题,给家庭和社会造成沉重负担.国外报道其年发病率为(20~40)/100万[1],在我国据北京地区2002年调查,脊髓损伤年发病率为60/100万[2].脊髓全横断损伤是脊髓损伤中严重的类型,损伤后脊髓溃变的面积大,后果严重,损伤平面以下的所有运动及感觉功能随即丧失,常伴发自主神经功能障碍,其病死率约为4.4%~16.7%.
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巴斯德处理周围神经后的溃变和再生的实验研究
目的:为了研究本法的实用性,在组织学和定量方面评价巴斯德处理小白鼠坐骨神经后的神经溃变和再生.方法:将Wistar糸雄性小白鼠左侧坐骨神经10mm的长度,进行60℃,30min的巴斯德处理.评价了对照部、处理部以及末梢部.评价时间在处理后1周(1周群),6周(6周群),各群分别为11只.结果:(1)有髓轴突数:末梢部的比较中,6周群的数比1周群显著增加了(P<0.01).(2)有髓轴突直径:末梢部的比较中,6周群的直径比1周群显著增加了(P<0.01).(3)有髓轴突面积比:末梢部的比较中,6周群的面积比比1周群显著增加了(P<0.05).(4)透射电子显微镜所见:1周群的处理部中,髓鞘陷入凝固坏死,雪旺细胞基底膜发生溃变.6周群的末梢部中,发现了多数的再生有髓轴突.结论:从以上结果足能证明,巴斯德温热处理小白鼠的坐骨神经一旦发生溃变但是再生是可能的.因此,在恶性骨、软组织肿瘤的手术之际,巴斯德温热处理法作为神经保存的方法是极为有用的.
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铜银法镀银漂白复染技术
多年来神经追踪技术一直受到人们广泛的关注.人们用各种追踪技术及镀银染色对中枢神经系统损伤后神经纤维和终末的溃变进行了研究.其中镀银技术的出现对溃变纤维的镀染又作出了重大的贡献并较好地显示了溃变纤维的全貌.早期的镀银染色较难区分溃变纤维和正常纤维,追踪溃变纤维很不容易.因此以后又出现了不少改良方法,旨在增加溃变纤维的特异性,从而区分溃变纤维和正常纤维及鉴定轴突的终末.而铜银法为此改良法之一,由De Olmos首次报道.在国内,作者首次用于实验中,证明是一种追踪溃变纤维较好的方法.在此法的基础上增加了漂白复染技术.
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脊髓损伤后周围神经病理改变的初步研究及临床观察
1992年以来,我们开展了带血管肋间神经转位、阴部神经、股外侧皮神经、髂腹股沟神经吻接术和脊髓神经根桥接术等方法重建截瘫患者的部分功能,取得较好的效果〔1〕。但脊髓损伤截瘫后,截瘫平面以下的周围神经和其支配的感觉、运动效应器官是否和周围神经损伤后一样随着时间延长而溃变,目前尚无明确的结论,为此,我们进行了初步的实验研究和临床观察。
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急性高眼压后大鼠视网膜突触囊泡素的表达变化
目的 研究急性高眼压后大鼠视网膜突触囊泡素(synaptophysin, SYN)的表达变化.方法 SD大鼠左眼眼压升高至闪光视网膜电图b波消失并维持60 min,右眼为正常对照,动物存活1、3、7、14、21 d后处死,冰冻切片行SYN免疫组织化学及原位杂交检测.结果 正常情况下SYN蛋白分布于视网膜内、外网层,外网层染色较深,急性高眼压后SYN阳性产物除外网层分布外,还出现于外核层的内侧部分,存活7 d时,阳性产物在外网层及外核层的分布范围宽,至14 d时又恢复至与正常相似的分布模式.SYN mRNA阳性产物主要分布存在于内核层与节细胞层的神经元胞体,急性高眼压后1、3、7 d时内核层SYN mRNA阳性细胞数逐渐增多,均高于正常水平,14 d时又恢复至正常水平.结论 急性高眼压后大鼠视网膜SYN的表达先增强后减弱,且出现空间分布的改变,提示急性高眼压损伤后视网膜内突触溃变前可能存在突触功能增强的时期.
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新调素受体(ErbB2/Neu)mRNA在坐骨神经损伤后的表达
为了解新调素(neuregulins,NRGs)受体,在周围神经的损伤、溃变和再生中的作用,我们研究了当外周神经损伤后,其受体ErbB 2/Neu在坐骨神经中的表达变化.10-13周龄的大鼠20只,分A,B两组 ,每组10只.A组手术暴露右侧臀区的坐骨神经后,并切除1.5cm长的坐骨神经;B组手术暴露右侧臀区的坐骨神经后,使用平钳钳夹挤压坐骨神经10秒钟两次;两组左侧均为正常对照组.分别在4天、8天、1 2天、24天和58天处死动物,取材坐骨神经置液氮中,并提取坐骨神经的RNA,做R NAse protection方法的分析.结果:ErbB2/Neu mRNA在成年大鼠的坐骨神经正常侧表达水平低.但在坐骨神经损伤侧,ErbB2/Neu mRNA的表达水平4天后开始增高,高峰从第8 天一直维持到第58天.横切断坐骨神经组(A组)比挤压坐骨神经组(B组)表达较高的水平.挤压神经组伴随神经的再生其表达水平增加.新调素受体在成年大鼠周围神经中有表达,并与周围神经的损伤和再生相关,可能是神经损伤和再生的一种调节信号.
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TGF-β1mRNA在坐骨神经损伤后的表达
为了解T GF-β1在周围神经的损伤、溃变和再生中的作用,我们研究了当外周神经损伤后,TGF-β1mRNA在坐骨神经中的表达变化.10-13周龄的大鼠 12只,分A,B两组,每组六只.A组手术暴露右侧臀区的坐骨神经后,并切除1.5c m长的坐骨神经;B组手术暴露右侧臀区的坐骨神经后,使用平钳钳夹挤压坐骨神经10 秒钟两次;两组左侧均为正常对照组.分别在8天、24天和58天处死动物,取材坐骨神经置液氮中,提取坐骨神经的RNA,做RNAse protection方法的分析.TGF-β1mRNA在大鼠的周围神经中表达.当其坐骨神经被损伤后,引起其轴索溃变和再生的发生,在切除坐骨神经组中,远侧断端的TGF-β1mRNA水平明显增高,并一直维持其较高的水平;在挤压坐骨神经组中,早期TGF-β1mRNA的水平升高,后期TGF-β1mRNA的水平则下降.TGF-β1在大鼠周围神经的损伤、溃变和再生过程中,起着重要的传递信号作用,似乎与神经的损伤程度呈正相关.
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改良溃变神经纤维镀染方法经验介绍
对于溃变神经纤维的镀染,Nute法是较可靠的形态学方法之一,但存在着程度较为复杂、烦锁等问题.为此我神经切片研究室在实际应用中,对于一些实验步骤,大胆地进行了改良和简化,结果与改良前相比没有显著差异,但操作过程却比原方法简便、易行、结果稳定 ,使实验者的工作量明显下降.现将改良的关键处介绍如下:一、固定:原方法:灌注固定先灌0.9%生理盐水冲出血液,再以5%重铬酸钾和2.5%铬酸钾的水溶液500ml灌注固定.取出组织固定于10%中性福尔马林1w或更长至3m.改良后,我们增加了取材后组织再浸泡于灌流液中2~4hr这一步骤,它可防止灌流时灌流液不能完全达到周缘神经组织部位,同时缩短了组织后固定的时间,只将组织再浸入4% 多聚甲醛固定1~7d即可.二、包埋和切片:原方法:取5~10mm厚的组织流水冲洗24hr,放入装有25%明胶水溶液的培养皿中(加盖),于37℃温箱浸泡12~18hr进行明胶包埋,置于10%福尔马林中6 hr或更长.改良后我们在切片前增加了将组织浸入10%或20%的蔗糖液中过夜这一步骤,次日再将组织骤冷,在恒冷箱中切片,并且将切片置于0.05M磷酸缓冲液,贴至挂过明胶的载玻片上行染色操作.这样我们省略了明胶包埋这一复杂程序,使实验单位易行.三、封固:原法是将切片浸入10%明胶水溶液与等量95%酒精中5min,切片摊于载玻片上,使载片倾倾斜倒出多余水,勿使切片完全干燥,再用95%酒精,浸泡吸水纸压平浸入95% 酒精使明胶凝固、脱水、透明封片.改良后我们在染色后将片直接用梯度酒精快速脱水,二甲苯透明,树胶封固,可省去明胶贴片、压片、凝固等步骤.
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改良镀银染色在大鼠脑缺血选择性神经元及轴突溃变中的应用
常规染色难以直接证实所有坏死或溃变的神经元,但镀银染色可显示溃变的神经元及轴突和轴突终末.本文介绍一种研究海马缺血性神经元死亡及其轴突溃变程度和时间过程的改良镀银染色方法.
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游离神经末梢和感觉小体溃变过程的实验研究
目的 研究神经损伤后,感觉神经末梢的溃变过程。 方法 选用恒河猴9只,除拇指外随机选择20个手指,其中15指切断指神经,另外5指作为正常手指,不进行任何手术。于术后2,4,12,20,32和48周采用镀银染色技术对神经末梢进行形态学观察。 结果 失神经后2周,游离神经末梢和感觉小体开始溃变;20周,游离神经末梢结构消失;48周,触角小体、环层小体全部失神经支配。 结论 周围神经损伤后,原有神经成分首先溃变,非神经成分随之溃变,终被胶原替代。