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百事乐胶囊对慢性应激抑郁模型大鼠行为活动及海马突触素表达的影响
目的：探讨百事乐胶囊对慢性应激抑郁模型大鼠行为活动、学习记忆及海马CA3区突触素玉（SYN玉）和突触囊泡素（SYNA）表达的影响。方法：SD大鼠随机分为6组，即空白对照组、抑郁模型组、氟西汀组、百事乐胶囊（2.88 g·kg-1、1.44 g·kg-1、0.72 g·kg-1）组，采用慢性温和不可预见性应激加孤养的方式建立抑郁模型，造模同时灌胃给药，每日1次，连续给药21天，对照组、模型组等量蒸馏水灌胃，观察大鼠Open-field、1%蔗糖偏食度、水迷宫及体质量变化率的影响，免疫组化和原位杂交观察各组大鼠SYN玉和SYNA的表达变化。结果：行为学表明，百事乐高剂量治疗2周后可显著提升模型大鼠水平及垂直活动次数（P<0.01），百事乐中剂量治疗3周后可明显提升模型大鼠水平活动次数（P<0.05）。高剂量治疗第1周后、中剂量治疗3周后可明显提高模型大鼠的蔗糖偏食度（P<0.01或P<0.05）。高剂量治疗2周、中剂量治疗3周可明显提高模型大鼠的体质量变化率（P<0.01或P<0.05）。百事乐高、中剂量可以缩短模型大鼠的寻找并爬上平台的持续时间（EL），并能明显升高模型大鼠穿越目标象限的次数；同时高剂量可明显缩短目标象限潜伏时间（P<0.05）。免疫组化和原位杂交结果显示，与模型组比较，百事乐高剂量能明显促进模型大鼠海马CA3区SYN玉和SYNA的表达，中剂量可明显提升SYNA的表达（P<0.05或P<0.01）。结论：百事乐胶囊能改善抑郁模型大鼠的抑郁行为及海马CA3区SYN玉和SYNA的表达。
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脑源性神经营养因子对急性高眼压大鼠视网膜突触囊泡素表达的影响
目的:探讨脑源性神经营养因子(BDNF)在急性高眼压后大鼠视网膜突触可塑性中的作用.方法:SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、单纯高眼压组、溶媒预处理急性高眼压组、BDNF预处理急性高眼压组和BDNF抗体预处理急性高眼压组.预处理后2d,制作急性高眼压模型.动物存活1、3、7或14d后处死,冷冻切片行突触囊泡素(SYN)免疫组织化学检测.结果:SYN蛋白的免疫阳性产物主要分布于视网膜外网层和内网层,SYN在高眼压3d后在外网层分布增宽,7d时宽,14d时又回复到与正常相似的模式；BDNF预处理后,在急性高眼压早期,SYN在视网膜外网层分布范围增宽的现象延后,至14 d阳性产物分布面积达到高峰；BDNF抗体预处理后,SYN阳性产物分布范围增宽现象前移,在3d时达到高峰,但与正常水平差异无统计学意义,至7d和14 d SYN回落.结论:急性高眼压后外源性BDNF干预延后了视网膜逆行性跨神经元突触改变的发生时间.
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急性高眼压后大鼠视网膜突触囊泡素的表达变化
目的 研究急性高眼压后大鼠视网膜突触囊泡素(synaptophysin, SYN)的表达变化.方法 SD大鼠左眼眼压升高至闪光视网膜电图b波消失并维持60 min,右眼为正常对照,动物存活1、3、7、14、21 d后处死,冰冻切片行SYN免疫组织化学及原位杂交检测.结果 正常情况下SYN蛋白分布于视网膜内、外网层,外网层染色较深,急性高眼压后SYN阳性产物除外网层分布外,还出现于外核层的内侧部分,存活7 d时,阳性产物在外网层及外核层的分布范围宽,至14 d时又恢复至与正常相似的分布模式.SYN mRNA阳性产物主要分布存在于内核层与节细胞层的神经元胞体,急性高眼压后1、3、7 d时内核层SYN mRNA阳性细胞数逐渐增多,均高于正常水平,14 d时又恢复至正常水平.结论 急性高眼压后大鼠视网膜SYN的表达先增强后减弱,且出现空间分布的改变,提示急性高眼压损伤后视网膜内突触溃变前可能存在突触功能增强的时期.
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呼吸道合胞病毒感染大鼠脊髓背根节突触囊泡素的表达与气道反应性的关系
目的 研究呼吸道合胞病毒(RSV)感染后大鼠脊髓背根节感觉神经元结构蛋白的表达变化,阐明气道神经可塑性改变的分子机制.方法 1～2周龄SD大鼠共30只,区组随机分为空白对照组、RSV感染组和神经生长因子(NGF)抗体干预组,每组10只.RSV感染组和NGF抗体干预组采用每周1次RSV滴鼻法制作RSV感染模型,NGF抗体干预组先腹膜腔内注射山羊抗大鼠β-NGF抗体,3 h后按照RSV感染组相同的方法进行RSV感染.在第8周进行气道反应性测定,并留取C7-T5脊髓背根节组织,采用免疫组化和RT-PCR检测C7-T5脊髓背根节突触囊泡素的表达.结果 RSV感染组对不同浓度组胺(0.01～0.16 mg/mL)的气道反应性均显著高于空白对照组(P均＜0.05),NGF抗体干预组在≥0.08 mg/mL组胺刺激后气道反应性显著低于RSV感染组,在≥0.04 mg/mL组胺刺激后显著高于正常对照组(P均＜0.05).RSV感染后突触囊泡素表达较对照组显著升高;NGF抗体干预后突触囊泡素的表达虽低于RSV感染组,但仍高于正常对照组.突触囊泡素mRNA表达亦呈现类似改变.相关分析显示C7-T5脊髓背根节突触囊泡素的蛋白表达与气道反应性呈正相关关系(r=0.813,P＜0.05).结论 反复RSV感染后脊髓背根节感觉神经元突触囊泡素的表达增高,并与气道反应性增高密切相关.
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胸髓半横断引起腰髓前角钙网蛋白阳性中间神经元突触联系的变化
为检测大鼠胸髓半横断后后肢运动功能状况和腰髓前角中间神经元的突触联系的变化,并分析其相关关系,本实验通过BBB评分、钙网蛋白(CR)和突触囊泡素(SYN)免疫荧光双标记及相关分析方法进行了研究.结果显示:大鼠胸髓半横断后12 h时,后肢运动功能完全丧失,BBB分值下降,从第3 d开始后肢功能逐渐恢复,BBB分值逐渐增加,至第21 d基本恢复正常;同时观察到腰髓损伤侧12 h时CR免疫反应阳性(CR-IR)神经元周围的SYN-IR降低,第3 d时恢复至正常水平,至第21 d时升高;相关分析显示后肢运动功能BBB评分与CR-IR中间神经元周围的SYN表达水平呈正相关(r=0.45,P＜0.05).上述结果提示大鼠胸髓半横断后,与腰髓CR-IR中间神经无形成的突触联系出现可塑性改变,这种可塑性变化可能足后肢运动功能自发性恢复的形态学基础.
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大鼠视神经切断后视网膜外网层突触可塑性研究
应用闪光视网膜电图(fERG)、细胞色素c氧化酶(CO)组织化学染色及突触囊泡素免疫荧光染色方法检测视神经切断术后,视网膜外网层相关神经元的功能活动及突触可塑性变化.结果显示:fERG b波峰潜伏期在视神经损伤后均显著延长;b波振幅在损伤第3、5 d组增高.此后逐渐下降并在7、14、21 d组低于正常.外网层CO活性在视神经切断第3、5 d上调,此后逐渐下降,至第14、21 d低于正常.外网层突触囊泡素阳性颗粒在视神经切断第5 d增多,此后逐渐下降,至第14、21 d低于正常.本研究结果提示视神经切断后,视网膜内外网层神经元的功能在早期将出现一过性的增强,结构也有相应的代偿性改变,随后即发生跨神经元的逆行性溃变.
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BDNF对体外培养的大鼠脊髓前角神经元内突触素Ⅰ与突触囊泡素表达的影响
探讨BDNF对体外培养的大鼠脊髓前角神经元内突触素Ⅰ与突触囊泡素(SYN)表达的影响.取孕14 d大鼠子宫内胎鼠的脊髓腹侧部分神经元,体外有血清培养.在培养7 d后,随机分成对照组、BDNF组和抗BDNF组.BDNF组培养液中加入BDNF(20 ng/ml),抗BDNF组培养液中加入BDNF抗体(20μg/ml),对照组加入等量Hanks液.3 d后在倒置显微镜下计数三组神经元存活数,并用NF-200、MAP-2、NSE的免疫组化反应对神经细胞进行鉴定.行突触素Ⅰ与SYN免疫组化反应,对部分细胞行突触素Ⅰ mRNA原位杂交反应,运用图像分析系统对突触素Ⅰ与SYN免疫组织反应阳性产物以及突触素Ⅰ原位杂交反应阳性产物作光密度分析.结果发现有血清培养时各组脊髓前角神经元的存活数无显著差异(P＞0.05);BDNF组突触素Ⅰ与SYN免疫反应阳性产物的平均光密度值高于其它两组,抗BDNF组低(P＜0.01).BDNF组突触素ⅠmRNA阳性产物的平均光密度值明显高于其它两组,抗BDNF组突触素Ⅰ mRNA阳性产物的平均光密度值低(P＜0.01).本研究结果提示BDNF对有血清培养时脊髓前角神经元的存活没有明显影响,但BDNF可明显上调培养的脊髓前角神经元内突触素Ⅰ与SYN的表达.
