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杉顿全自动脱水机不融蜡等故障检修
美国杉顿全自动脱水机是按设定程序把组织固定、透明、脱水、脱脂,使细胞壁变硬,不发生凹陷,然后再进行侵蜡的自动化医用仪器.现将该机在使用维修中遇到的两种特殊故障分析介绍如下,供同行参考.
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有关影响常规病理制片质量几个问题的探讨
标本的收取病理科工作人员收验标本时,必须严格执行查对制度,若发现疑问时,应立即向送检方提出并在申请单上注明情况.验收标本人员不得对申请单中临床医师填写的各项内容进行改动.组织固定组织固定的好坏是影响制片质量的关键因素.但在实际工作中,由于临床手术标本体积大,组织表面黏附的血液和黏液又没有及时清除,而实质性脏器的肿瘤多数位于脏器中央,再加上固定液量不足不能完全覆盖组织,造成组织固定不佳.
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两种不同缓冲系统的多聚甲醛对鼠脑组化结果的影响
哺乳动物大脑皮质的发育长期以来都是发育生物学研究的焦点和热点.目前用于研究大脑发育的组织化学技术主要有原位杂交技术和免疫荧光染色,而这些技术均需要前期的标本制备,尤其是取材后的组织固定.组织固定的主要目的是尽可能保持组织内待检测物的原位性、完整性和免疫活性[1],所以组织固定的效果往往决定着组化实验终结果的成败.4％多聚甲醛(paraformaldehyde,PFA)因其优良的理化性质成为目前固定标本组织的常用固定剂之一[2-3],而关于其配制方法,尤其是用于溶解它的溶剂的选择目前还未有定论.本研究以此问题为出发点,比较不同溶剂的4％PFA对鼠脑组织的固定效果,探讨佳的组织固定方法.
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HE染色细胞核发灰的处理方法
常规石蜡切片及细胞学涂片时,HE染色镜检出现细胞核发灰,即细胞核内染色质及核仁显示不清,呈一片淡兰色云雾状,此现象严重时影响病理诊断.细胞核发灰的原因,一是石蜡切片的组织固定不及时,或组织块取材太厚,影响组织固定、脱水、透明和浸蜡所致.二是细胞学涂片中细胞脱落时间过久,或在制片过程中人为造成涂片干涸.
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增强免疫细胞化学染色敏感性的新技术研究及应用
近年来,原位杂交、PCR等分子病理学新技术有了很大发展,在一些疾病的诊断和研究中显示出巨大的优势,但是免疫细胞化学染色(ICS)技术以其突出的优点,广泛应用于肿瘤临床病理诊断和鉴别诊断.针对ICS时间长、敏感性差、抗原修复方法单一、组织固定、制片和染色等流程对抗原性均有不同程度的破坏,终影响ICS结果等缺点,我们在实践中不断探索,对影响抗原性的主要因素:抗原修复、骨组织ICS、冷冻厚切片及HBP增敏等方面进行了研究,为一些疑难肿瘤的诊断提供了准确、快速的技术保障.现简介如下.
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标本离体后不同时段固定对胃癌HER2检测的影响
目的 探讨胃癌标本离体后在两个不同时段内固定对其HER2检测结果影响,进一步强调胃癌HER2检测操作流程规范性的实践意义.方法 参照中国2011年版的《胃癌HER2检测指南》,收集2012年11月至2013年5月期间的胃癌根治性手术切除标本41例,每一病例收集标本离体30 min内(＜30 min)及1～2h内(＞30 min)固定的胃癌组织配对蜡块(共82个),应用免疫组织化学(IHC)和荧光原位杂交(FISH)技术检测胃癌组织中HER2的表达.结果 41例不同时段内固定的配对胃癌组织蜡块行IHC检测发现＜30 min与＞30 min固定标本的HER2蛋白表达比较差异有统计学意义(P＜0.05),＜ 30 min固定标本的IHC检测到的HER2阳性率高;对其中所有的配对蜡块行FISH检测,＜30 min与＞30 min固定标本的HER2基因扩增状态比较差异无统计学意义(P＞0.05).＜30 min固定标本的IHC和FISH检测结果正相关(系数为0.724,P＜0.05),HER2阳性及阴性病例的检测符合率均为100.0％;＜30 min固定标本的HER2蛋白表达与肿瘤的Lauren组织学分型、分化程度、TNM临床分期及患者的性别等临床病理学参数有关(P＜0.05).结论 胃癌标本离体后＜ 30 min对IHC和FISH检测HER2没有影响,而＞30 min(1～2 h)固定使IHC检测到标本的HER2蛋白水平降低.
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甲醛固定石蜡包埋标本不同二代测序平台性能比较
目的 应用甲醛固定石蜡包埋(FFPE)标本,以相同的建库方法,比较二代测序(NGS)技术Illumina公司的Miseq和Thermo公司的Ion Torrent PGM两个平台的性能和一致性,探讨临床应用价值.方法 收集2013年1月至2016年12月的204例肿瘤FFPE标本,包括100例非小细胞肺癌(浙江大学医学院附属第一医院)和104例结直肠癌(四川大学华西医院).采用相同的病例,一次提取DNA后,相同DNA的量采用相同试剂盒建库,质控合格后分别在Miseq和Ion Torrent PGM平台测序.使用扩增阻滞突变系统(ARMS)PCR法以及Sanger测序对双平台检测不一致的突变进行验证.结果 共纳入204个FFPE标本,两个平台共同分析了197个标本.发现Miseq平台测序标本产出的reads数目高于PGM平台(中位数:391634比298030,P<0.01).与人类参照基因组进行比对,结果显示Miseq平台测序标本的比对率高于PGM平台(中位数100.0％比99.7％,P<0.01).Miseq平台测序标本的中位测序深度高于PGM平台(中位数853×比698×,P<0.01).两个平台共检测到236个突变,其中221个突变被两者同时检出(一致率93.6％).Miseq平台比PGM多检出11个突变,而PGM平台比Miseq多检出4个突变.经ARMS?PCR方法及Sanger测序验证,Miseq平台对于低频突变的检测结果更为可靠,两者不一致的主要原因是部分假阴性是由变异频率低于试剂盒报告范围(5％)及石蜡标本保存时间较长导致.结论 与PGM平台相比,Miseq平台测序在标本产生的reads数目、比对结果以及覆盖深度方面均表现出了更高的测序质量,且检测结果更为可靠.在临床实践中,应根据标本量和实际的通量需求来选择合适的平台辅助肿瘤分子检测.
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前列腺癌根治切除标本大切片的制片技术
前列腺癌根治标本的大体检查和处理一直是病理医师的一个巨大挑战。由于离体后的前列腺癌的肿块与前列腺增生症的背景在外观形状上相差不明显，肿瘤常为多灶性，且大部分根治性切除的前列腺标本曾行1～2个疗程的内分泌治疗，肿瘤组织有一定程度退变，大体上很难辨认。此外为判断外科手术边缘是否切除干净和防止遗漏，病理医师通常将整个前列腺标本全部取材，但因受传统的包埋盒大小及厚度的限制，前列腺常被切割成40～80块左右的组织，这样不仅破坏了前列腺的完整性，更给后续的制片和阅片带来十分繁琐的工作。作者参考国外的经验［1-3］，尝试前列腺癌根治标本的大切片（4 cm ×3 cm或7 cm ×5 cm）制作，对前列腺整个切面进行分层取材，并对后续的组织固定、脱水、切片和染色等各个工作环节不断摸索和改进，成功地完成了352例前列腺癌大切片，为病理医师更准确和全面地观察前列腺癌病灶及综合性评价提供了极大的便利，也为临床治疗提供了很大的帮助。
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一项关于HER2基因检测的多中心研究
HER2基因状态对于乳腺癌患者治疗方案选择、预后评估十分重要.目前常用方法有免疫组织化学(IHC)、荧光原位杂交(FISH)和显色原位杂交(CISH).IHC在大多数病理实验室均能开展,但是所得结果对组织固定情况及其他因素较敏感,统计分析表明基层实验室用IHC方法所得出的HER2蛋白表达结果约20%被正规的中心实验室证明是错误的.
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不同固定方法对新生大鼠脑组织切片的影响
目的:观察应用与不应用多聚甲醛心脏灌注这两种不同固定方法对新生大鼠脑组织切片的影响.方法:20只新生大鼠随机化分为灌注组与非灌注组,每组各10只.灌注组经麻醉后经左心室插入灌流针,先灌注冰冻无菌生理盐水再灌注4%多聚甲醛,灌注同时切开小部分肝脏,断头取脑,多聚甲醛浸泡固定24小时,再经70%、80%、95%、100%乙醇及二甲苯浸泡,石蜡包埋.非灌注组新生大鼠经麻醉后直接断头取脑,其它固定方法同灌注组.进行石蜡切片HE染色观察鼠脑组织结构.结果:灌注组脑组织切片组织结构清晰,无共染现象, 组织切片完整均匀,皮层及海马区组织、细胞形态正常,未见扩张的毛细血管.非灌注组大脑皮层及海马区组织水肿,细胞周围间隙增宽,胞体肿胀,有些细胞境界模糊不清,核着色不良,部分视野可见扩张的毛细血管,血管内有血细胞样物.结论:应用多聚甲醛心脏灌注对新生大鼠脑组织的固定效果较好,是应用动物脑组织切片进行形态学研究实验的必不可少的步骤.
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新生鼠肠损伤时肝脏黄嘌呤氧化酶的变化
目的:探讨新生鼠肠损伤时肝脏黄嘌呤氧化酶(XO)的变化.方法:新生大鼠随机分为对照组8只,实验组每一时相点各8只.将EcoliOss:B5脂多糖5mg/kg注入新生鼠胃内,分别于灌胃后3,6,12,24,72 h处死动物.取部分肝组织固定,包埋,HE染色,光镜下观察其组织学改变.其余肝组织用于测定XO活性.结果:实验组6,12 h XO活性明显高于对照组(分别为4 719±793 nkat/g vs 3 961±387 nkat/g,4 929±477nkat/g ys 3 961±387 nkat/g,P＜0.05);3,24,72 hXO活性与对照组无显著差异(P＜0.05).内毒素治疗后随着时间的进行逐渐出现中央静脉扩张,肝窦充血、炎性细胞浸润,肝细胞水肿,胞质疏松,空泡变性.6,12 h可见大量肝细胞内出血,肝细胞坏死.24,72 h肝细胞水肿渐消失,出血坏死不明显.结论:新生鼠肠损伤时可致肝脏受累,且XO活性愈高,肝损伤愈重.
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血清心肌肌钙蛋白 T 对病毒性心肌炎小鼠心肌损伤诊断价值的研究
采用柯萨奇B3 病毒(CVB3) 所致的病毒性心肌炎小鼠模型,观察血清心肌肌钙蛋白 T (cTnT) 水平的变化,并与肌酸激酶的同工酶 MB (CK-MB)作对照,以探讨其对心肌炎的诊断价值.1.材料与方法:6～8周龄雄性纯种 BALB/C小鼠.CVB3 病毒(Nancy株),在Hela细胞上滴定其50% 组织感染率(TcD50)为109.5.实验组(A组)150 只,按处死时间第5、7、10、14、21天预设 5 组,每组30只.于实验开始当日腹腔内注射含10 TcD50 的CVB3 的缓冲液 0.2 ml.对照组(B组)共 25只,于实验开始当日腹腔注射缓冲剂 0.2 ml.A组于实验开始第5、7、10、14、21天处死各预设时间组所有存活小鼠; B组于第 5、7、10、14、21天各处死 5只小鼠.同时摘眼球取血,取心脏组织固定.上述血样分别做血清 cTnT 及 CK-MB 检测.心肌损伤界限值 cTnT为 0.13 μg/L,CK-MB 活力为7.75 U/L.统计学分析采用组间方差分析、组间 t 检验、χ2检验.
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腰椎结核寒性脓肿致腹股沟区疝一例
患者女，65岁，因发现左侧腹股沟区包块24年，包块增大伴不可回纳20年，于2013年9月8日以“腹股沟肿物”收入院。患者52年前无明显诱因于左侧大腿根部发现一黄豆大小肿块，无不适，肿块间断破溃流脓3年，于当地医院就诊行腰椎X线检查，诊断为腰椎结核伴寒性脓肿形成，予链霉素、异烟肼等抗感染治疗，脓肿逐渐愈合。24年前，患者发现左腿根部约1 cm ×1 cm大小可复性包块，表面皮肤正常，无红肿及破溃，未予以重视。随后近20年包块逐渐增大并不可回纳。患者否认结核病接触史，否认腹部外伤史。入院查体：患者髋关节右凸畸形，左侧腹股沟区可见10 cm ×4 cm大小肿物，边界清、质软，平卧后肿物不能回纳，无压痛。辅助检查：髋关节CT提示左侧髋关节骨性融合，左侧腹股沟脂肪疝出，双侧骶髂关节退变。盆腔MRI检查示左侧下腹壁有缺损，左下腹前腹壁、左腹股沟区见不规则脂肪组织突出于腹腔之外皮下软组织内（图1～2），考虑左前下腹壁疝。入院诊断：①左侧腹股沟区腹壁疝；②腰椎结核（陈旧性）。经术前准备后于全身麻醉下行左侧腹股沟区腹壁疝无张力修补术，取左下腹经腹直肌切口，进入腹腔，术中探查腹股沟韧带中部前部分区域及韧带后方髂血管外侧局部腹壁缺损，直径5 cm，疝囊潜行于大腿肌间至近股骨，疝内容物为大网膜，因大网膜与疝囊粘连严重，无法回纳，遂于大腿外侧包块下做一弧形切口，游离切除粘连网膜。疝环缺损处置入修剪的疝修补网塞，将其与周围筋膜组织固定。用薇荞线连续缝合关闭疝环处腹膜，游离腹股沟区及盆壁处腹膜前间隙，在疝环处腹膜外间隙置入疝补平片（12 cm ×16 cm），覆盖缺损区域，与腹横筋膜组织固定。在大腿疝囊间隙置入引流管1根，关腹，缝合腹壁切口。术后切口愈合良好，随访5个月，无复发。
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医用缝合线的研究进展
医用缝合线是一种用于伤口缝合、组织结扎和组织固定的无菌线,许多世纪以来,人类在寻找新的和较好的缝合材料上做了许多尝试,希望能够找到张力强度高、弹性和可塑性好、组织反应小的材料制作缝线.一、医用缝合线的发展历史回顾缝合技术的出现可能早于现代人类,因为尼安德特人已经穿着缝制的衣服.但是,先会作缝合的应属蚂蚁,远远早于人类,一种叫做织叶蚁的蚂蚁发明了一种用夹子、缝合和胶粘三种方式联合缝合树叶的方法.缝合在原始人中是很少见到的.一部古埃及的书记载了缝线和伤口缝合,世界上古老的缝线是大约公元前1100年的一位二十一王朝的木乃伊腹部上由木乃伊制作人所放置的缝线.缝合线是外科手术不可分割的组成部分,其应用可以追溯到很早时期.
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翼点入路夹闭前循环动脉瘤两种颞肌固定方法对颞肌萎缩的影响
目的 比较经翼点入路开颅夹闭颅内前循环动脉瘤两种不同的颞肌固定方法对术后颞肌萎缩的影响. 方法 对经翼点入路开颅的32例颅内前循环动脉瘤患者行前瞻性研究,采用抽签法,随机分为骨面打孔组和留肌肉条组,每组各16例.对患者均采用相同的皮肤切口及颞肌筋膜处理方式.游离颞肌时,对骨面打孔组完全游离颞肌,在骨面上打孔固定颞肌;留肌肉条组的处理是在颞肌前缘处,留一窄条颞肌备固定用.术后6个月复查头部CT,取颧弓中点上2 cm层面,根据CT标尺比例,测量颞肌厚度. 结果 32例患者在出院时头部创口愈合良好,无红肿、积液和化脓.术后6个月32例患者均生存,11例患者头部外观有明显的颞肌萎缩,21例患者外观无明显颞肌萎缩.17例患者诉咀嚼无力.骨面打孔组和留肌肉条组术后颞肌厚度分别为(5.05±0.24)和(4.17±0.36)mm,两组比较差异有统计学意义,t＝2.42,P<0.05. 结论 采用完全游离颞肌,于骨面上打孔固定颞肌的术式能够保持恒定、有效的张力,对颞肌萎缩影响较小;而留肌肉条组的颞肌萎缩较明显.
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海水微波固定法在病理技术中的应用
1操作方法临床手术切除未经固定新鲜标本,每个标本取2cm×2cm×0.2cm,分别放入盛有不同浓度海水的聚丙烯塑料缸中,为减少实验误差,每次所用固定介质的量(50ml)、pH值(7.4)、微波辐射时间(35s×2)和室温(20℃)都一致.
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肺病理取材定量比较研究及其诊断学意义
目的 通过定性和定量的方法比较单纯气管内固定、单纯肺循环固定和气管肺循环联合固定对肺泡结构和细胞抗原的保存效果.方法 15只健康SD大鼠随机均分为单纯气管内固定组、单纯肺循环固定组和气管肺循环联合固定组.分别按3种方法固定,石蜡包埋,行HE和免疫荧光染色,采用定性观察和体视学定量分析不同方法的固定效果.结果 定性观察发现,单纯肺循环固定和气管肺循环联合固定对胞质和胞核抗原的保存效果优于单纯气管内固定.定量分析发现,气管肺循环联合固定组的肺泡线性截距大于单纯气管内固定组和单纯肺循环固定组(P＜0.05)；气管肺循环联合固定组的肺实质体积密度和肺间隔厚度小,单纯气管内固定组次之,单纯肺循环固定组大(P＜0.05).结论 气管肺循环联合固定可以更好地保存肺泡结构和细胞抗原,适合基于形态定量分析的病理基础和临床诊断研究.
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聚羟基丙烯酸和Van-clear替代传统试剂在FIS H法检测宫颈h TERC基因中的应用比较
目的：观察环保固定液（聚羟基丙烯酸、环保透明脱蜡液Van-clear单独或联合）替代传统固定液[4％（体积分数）中性缓冲甲醛、传统透明脱蜡液二甲苯]应用于荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）法检测宫颈组织中人端粒酶核糖核酸组分（human telomerase RNA component，hTERC）基因扩增的差异。方法：收集2013年3月到2015年4月于中山市博爱医院妇科住院部送检的255例宫颈组织标本，同一病变部位切取4个样本，分为4组，命名为A、B、C、D组：A组采用4％中性缓冲甲醛固定、二甲苯透明脱蜡制作切片；B组采用聚羟基丙烯酸固定、二甲苯透明脱蜡制作切片；C组采用4％中性缓冲甲醛固定、Van-clear透明脱蜡制作切片；D组采用聚羟基丙烯酸固定、Van-clear透明脱蜡制作切片。采用FISH技术检测4组宫颈标本中hTERC基因。结果：在FISH法检测宫颈各级病变组织hTERC基因时，荧光显微镜下，A、B、C、D四组的组织轮廓和背景均清晰，探针定位准确，可见耀眼的红／绿荧光信号。B、C、D组与A组阳性率相比差异均无统计学意义（P＞0．05），且FISH结果符合率高。结论：环保试剂聚羟基丙烯酸、Van-clear有潜在的可能单独或联合替代4％中性缓冲甲醛、二甲苯应用于FISH法检测宫颈hTERC基因。
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保证免疫组化染色质量的几个要点
免疫组化染色是临床病理学的重要诊断手段之一,该染色步骤繁琐且每一步都可能影响染色的终结果,因此保证染色质量是贯穿于免疫组化实验全过程的核心.欲得到一张高质量的免疫组化染色片,必须做好组织固定和制作蜡片的基础工作,准确掌握抗原修复的时间和温度,严格按照染色步骤进行操作.
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胰腺冰冻切片免疫组化中组织的固定方法比较
目的 寻找一种胰腺冰冻切片免疫组化过程中的佳组织固定方式.方法 将20例冰冻组织OCT包埋后置于冰冻机切片8-10μm,每例组织各切5张片,各分成5组,接着分别采用以下5种不同的方法进行固定10min,即丙酮4℃固定法(A组)、丙酮室温固定法(B组)、4%多聚甲醛室温固定法(C组)、10%甲醛室温固定法(D组)、Bouin液室温固定法(E组),然后0.01M PBS冲洗5minx3次,枸橼酸电炉热修复后进行免疫组化染色.结果 A组的冰冻切片免疫组化染色结果其他组好.结论 丙酮4℃固定比4%多聚甲醛、10%甲醛、Bouin液固定较好保存胰腺中PKCa抗原的活性.
