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Real-time PCR技术检测乳腺癌患者HER2和TOP2A基因的表达及相关性研究
目的:分析乳腺癌患者中HER2基因和DNA拓扑异构酶Ⅱα(TOP2A)基因表达,探究HER2和TOP2A基因的相关性在乳腺癌诊断中的应用价值.方法:选取本院2006年4月-2008年3月经病理证实的乳腺癌患者93例,乳腺良性肿瘤患者30例,另选择体检健康女性30例.应用Real-time PCR技术对乳腺癌组织HER2和TOP2A基因进行了定量分析.结果:乳腺癌患者HER2和TOP2A基因的表达量显著高于良性肿瘤患者及健康者,且乳腺癌患者中HER2和TOP2A基因的表达具有显著相关性.结论:乳腺癌患者中HER2和TOP2A基因的共同扩增可能在乳腺癌发生发展中起重要作用,联合检测HER2和TOP2A基因对于乳腺癌的靶向治疗具有重要意义.
关键词： Real-time PCR HER2基因 TOP2A基因 乳腺癌 -
亮视野原位杂交技术在乳腺癌HER2检测中的应用
随着乳腺癌分子发病机制的快速发展,乳腺癌的治疗策略发生了极大变化.个体化治疗,尤其是分子靶向治疗的快速发展使得组织分子靶点的检测成为关键环节.分子检测需求量的增加使得多种原位杂交技术应用于临床实验室.亮视野原位杂交在这方面有很多优势,检测乳腺癌HER2基因状态已成为亮视野原位杂交技术发展的主要推动力.
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乳腺及乳腺外Paget病的HER2基因扩增比较及其生物学意义
HER2基因是乳腺癌进行靶向治疗的靶点[1-3].乳腺Paget病(特殊类型的乳腺癌)是一种较少见的乳头、乳晕区恶性上皮性肿瘤[4].乳腺外Paget病是一种较少见的特殊类型的癌性疾病,它以表皮内具有透明胞质的Paget细胞为特征.我们采用荧光原位杂交(FISH)技术及免疫组织化学EnVision法检测40例乳腺Paget病及30例乳腺外Paget病的HER2基因状态,探讨HER2基因的扩增情况及其生物学意义.
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HER2的免疫组织化学诊断和ASCO/CAP指南中的几个问题
HER2基因在15%～20%的乳腺癌扩增到正常的2～20倍,导致HER2蛋白在肿瘤细胞膜上的表达大量增加.这使HER2成为理想的靶向治疗靶点[1-2].曲妥珠单抗(商品名为赫塞汀)是一个针对HER2的单克隆抗体,它对HER2阳性的乳腺癌具有明显的抗癌效应,特别是当它与其他细胞毒性抗癌药物联用时,能减少早期HER2阳性乳腺癌的复发率至50%[3-5].
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一项关于HER2基因检测的多中心研究
HER2基因状态对于乳腺癌患者治疗方案选择、预后评估十分重要.目前常用方法有免疫组织化学(IHC)、荧光原位杂交(FISH)和显色原位杂交(CISH).IHC在大多数病理实验室均能开展,但是所得结果对组织固定情况及其他因素较敏感,统计分析表明基层实验室用IHC方法所得出的HER2蛋白表达结果约20%被正规的中心实验室证明是错误的.
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双色银染原位杂交技术检测胃癌HER2基因扩增及临床意义
目的 探讨双色银染原位杂交技术(dual-color silver-enhanced in-situ hybridization,DSISH)检测胃癌人类表皮生长因子受体2(human epidermalgrowth factor receptor-2,HER2)基因扩增的可行性及其与临床病理学特征的关系.方法 应用DSISH技术检测230例患者胃癌切除组织中HER2基因扩增状态,并进行相关统计学分析.结果 DSISH检测230份胃癌标本中43例存在HER2基因扩增,HER2基因扩增率为18.7％.HER2基因扩增与胃癌的分化程度、淋巴结转移有关(P均＜0.05),与患者年龄、性别、肿瘤发生部位、浸润深度、神经以及脉管侵犯无关(P均＞ 0.05).结论 DSISH技术检测胃癌HER2基因扩增状态具有可行性;HER2基因扩增可以反应胃癌生物学行为.
关键词： 胃癌 HER2基因 双色银染原位杂交技术 基因扩增 -
胃癌组织中HER2基因扩增与化疗药物敏感性标志物的联合检测及意义
目的:探讨胃癌HER2基因扩增与化疗药物敏感性标志物的联合检测及意义.方法:采用免疫组织化学、荧光原位杂交和实时定量PCR检测技术对120例胃癌HER2蛋白表达、HER2基因扩增与ERCC1、TUBB3、TYMS基因mRNA表达水平.结果:HER2蛋白表达率40.8％(49/120),其中HER2蛋白3+,占10.8％(13/120).HER2蛋白2+,占14.2％(17/120).HER2蛋白1+,占15.8％(19/120).HER2基因扩增率38.8％(19/49).ERCCI、TUBB3、TYM基因mRNA表达检测,其中单基因中、低表达41例、双基因中、低表达45例,ERCC1、TUBB3、TYMS基因均中、低表达19例、均无中、低表达15例.HER2基因扩增49例和ERCCl、TUBB3、TYMS基因中、低表达19例的患者中有11例接受了化疗联合曲妥珠单抗治疗,随访结果显示HER2基因状态与ERCC1、TUBB3、TYMS基因低表达联合治疗效果呈正相关,其中本组5例HER2蛋白3+广泛型又是HER2基因簇状扩增、ERCC1、TUBB3、TYMS基因低表达的患者总生存期长达19.1 mo.结论:胃癌HER2检测有很大的异质性,同时检测HER2蛋白表达、HER2基因扩增和化疗药物敏感性标志物联合检测,能更好地为抗肿瘤药物治疗过程中受益提供重要的参考指标;胃癌靶向与化疗药物的联合检测来选择个体化方案有推广价值.
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乳腺浸润性导管癌17号染色体拷贝数变异与临床病理特征相关性分析
目的 乳腺癌是影响妇女健康的主要癌症之一,且发病率呈现明显上升趋势.DNA拷贝数变化(copy number variation,CNV) 能够影响基因表达,从而引起肿瘤发生,研究CNV对探索肿瘤的发病机制有很大帮助.本研究探讨乳腺癌17号染色体拷贝数变异和临床病理特征关系.方法 应用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH) 法检测2010-01-01-2011-01-01新疆医科大学附属肿瘤医院乳腺润性导管癌标本283例,观察17号染色体拷贝数情况及人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2) 基因扩增情况,并用免疫组织化学法检测HER2受体蛋白的表达水平.结果 283例乳腺癌中17号染色体拷贝数多倍体为43例(15.19%),双倍体为226例(79.86%),单倍体为 14例(4.95%),乳腺癌17号染色体多倍体HER2基因阳性率为53.49%(23/43).283例乳腺癌中HER2基因表达阳性为84例,阳性率为29.68%(84/283);17号染色体拷贝数不同在HER2基因是否扩增方面差异有统计学意义,χ2=9.564,P=0.007;乳腺癌17号染色体拷贝数变异在p53基因表达(χ2=8.181,P=0.017)、病理组织学分级(χ2=11.203,P=0.019)方面差异有统计学意义,与年龄、肿瘤大小和淋巴结转移等指标差异无统计学意义.17号染色体拷贝数不同组中预后存在差异,差异有统计学意义,χ2=241.363,P=0.001.结论 17号染色体拷贝数变异和乳腺癌病理特征及预后相关,检测乳腺癌中17号染色体拷贝数变异可作为指导临床治疗和判断预后的参考指标.
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FISH与IHC技术检测乳腺癌Her2状态的对比研究
目的 比较荧光原位杂交法(FISH)与免疫组化法(IHC)检测乳腺癌组织中Her2基因扩增和蛋白表达的差异性和相关性.方法 IHC法检测56例乳腺癌细胞膜上Her2蛋白表达情况,FISH法检测细胞核内Her2基因扩增情况,χ2检验及kappa检验对两种方法检测结果进行统计分析.结果 两种方法的检测Her2阳性率差异有统计学意义(χ2=39.867,P<0.05);IHC法检测Her2蛋白0～1+与3+之间,通过FISH法检测Her2基因扩增的一致性好(k=0.906,P<0.05);而IHC检测Her2蛋白2+与3+之间,FISH检测Her2基因扩增一致性较差(k=0.357,P<0.05).结论 IHC检测Her2蛋白为2+的需做FISH检测,以明确Her2基因扩增的情况,FISH检测法提高了诊断的准确性和特异性.
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乳腺癌HER2阳性的分子靶向治疗研究进展
乳腺癌是一个严重危害妇女健康的恶性肿瘤,全世界每年约有135万妇女患乳腺癌,约有33万妇女死于乳腺癌[1].手术、化疗、放疗及内分泌治疗可以使许多患者得到较好的疗效,但仍有25％～30％的乳腺癌患者发生远处转移[2].目前研究发现HER2基因在20％～ 30％的乳腺癌患者中扩增,其过表达与乳腺癌的发生、发展密切相关,并且这部分患者病情重、预后差[3].近年来,随着肿瘤分子生物学研究的日趋深入,乳腺癌的分子靶向治疗越来越被广泛应用,尤其是针对乳腺癌HER2阳性的分子靶向治疗更是越来越受到重视.
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曲妥珠单抗在乳腺癌中的耐药机制研究进展
HER2即人表皮生长因子受体-2(Human epidermal growth factor receptor-2,HER2),属于酪氨酸激酶受体家族成员,是细胞生长、分化和存活的重要调控因子.临床数据显示,20％～25％的乳腺癌患者存在HER2基因扩增或蛋白过表达.HER2的过表达预示着临床预后差、易转移及复发.曲妥珠单抗是HER2的人源化单克隆抗体,用于治疗HER2过表达的早期或转移性乳腺癌患者.然而曲妥珠单抗的单独治疗客观反应率仅12％～34％,并且多数转移性患者在使用1年之内出现耐药现象[1].为了更有效地治疗HER2过表达乳腺癌,需要详细理解曲妥珠单抗的作用及耐药机制.在此就有关曲妥珠单抗的耐药机制新进展进行阐述,为乳腺癌靶向治疗药物的基础研究和临床合理应用提供参考.
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老年人胃癌组织中HER2的表达及其临床意义
目的:研究原癌基因人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2,HER2)在胃癌组织中的表达及其临床意义.方法:选择未经过术前放、化疗的老年人胃癌标本67例及癌旁正常组织40例,利用组织芯片技术通过免疫组化SP法检测HER2蛋白的表达情况,分析其表达与胃癌临床病理特征的关系.结果:胃癌组织HER2阳性表达率高于癌旁正常粘膜组织(P＜0.001).HER2的表达率与胃癌浸润深度、淋巴结有无转移有显著性(P＜0.05);与组织学类型、性别差异无统计学意义(P＞0.05).结论:HER2蛋白在老年人胃癌组织中过表达,HER2的检测对于老年人胃癌的转移、患者的病情发展及预后评估有一定的参考价值,对指导临床制定个体化治疗方案有重要意义.
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HER2基因转染MCF-7细胞及生物学特性观察
目的:建立共表达HER2(Human Epidermal Growth Factor Receptor 2)基因和ER(Estrogen Receptor)基因的细胞模型,并观察转染细胞的生物学活性.方法:构建真核表达载体pcDNA3.1-HER2,利用脂质体介导将其转染ER阳性的乳腺癌MCF-7细胞,经G418筛选阳性克隆.用RT-PCR、Western blot及免疫细胞化学等方法检测HER2基因在MCF-7细胞中的稳定表达情况,并通过MTT法和肿瘤细胞侵袭实验,观察转染细胞的生物学活性.结果:在mRNA和蛋白水平证实,转染细胞内有HER2基因的高表达,转染后细胞的增殖能力和侵袭能力明显增强.结论:构建含HER2基因的重组载体,导入乳腺癌MCF-7细胞后,获得生物学活性稳定的HER2基因和ER基因高表达的细胞模型,为进一步研究奠定了基础.
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荧光原位杂交在检测乳腺癌组织HER2基因扩增的重要性
乳腺癌是女性常见的癌症之一.在乳腺癌患者中,约有25%～30%的人恶化的速度会更快,而且容易复发,其中一个重要的原因是HER2基因过度表达.目前国内外一般采用免疫组织化学(IHC)检测HER2受体蛋白表达状态,应用荧光原位杂交(FISH)和显色原位杂交(CISH)检测HER2基因扩增水平的方法.
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荧光原位杂交检测乳腺癌HER2基因的表达及其意义
目的:探讨荧光原位杂交(FISH)在检测乳腺癌组织HER2基因表达的临床意义.方法:应用FISH法对50例乳腺癌患者进行HER2基因检测,分析基因表达程度与临床特征之间的关系,比较基因和免疫组化(IHC)法蛋白表达的差异性.结果:FISH法与IHC法检测结果总符合率为88%,我院女性乳腺癌人群中HER2基因过表达率为44%,其过表达与肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期之间差异无统计学意义(P＞0.05);孕激素受体(PR)阳性组高于PR阴性组,差异有统计学意义(P＜0.01);雌激素受体(ER)阳性组与ER阴性组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:HER2基因的过表达与肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期及ER无关,与PR成负相关.FISH法检测乳腺癌HER2基因敏感性及稳定性较高,可作为终确诊HER2基因状态的方法.
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FISH在乳腺癌组织HER2/neu原癌基因检测上的应用及其临床意义的研究
目的 对比研究乳腺癌中免疫组化法检测c-erbB2蛋白表达和荧光免疫原位杂交法(FISH)检测HER2基因扩增,并评估其临床价值.方法 免疫组化染色法及FISH法分别检测42例乳腺癌组织中c-erbB2蛋白表达及HER2基因扩增状况,并进行对比分析.结果 42例乳腺癌中c-erbB2蛋白表达(+++)者22例(52.38%),表达(++)者20例(47.62%);42例乳腺癌中有20例(47.62%)出现HER2基因扩增,22例(5238%)无扩增.两种方法的检测结果差异无统计学意义(P>0.05);但二者的吻合度一般,(k=0.430,P<0.05).结论 免疫组化可以作为临床治疗是否应用赫赛汀(Herceptin)的初筛,免疫组化呈阳性或强阳性的病例有必要进一步进行HER2基因扩增的检测,来确定临床治疗是否应用Herceptin,指导化疗药物的选择及判断患者的预后.
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肿瘤特异性报告基因载体的构建
目的:构建一种能在肿瘤组织中进行肿瘤特异性表达的逆转录病毒载体,增强肿瘤基因治疗的靶向性.方法:PCR法获得HER2基因的启动子片段并将其克隆至逆转录病毒载体PLXSN中,再将突变型绿色荧光蛋白(mtGFP)基因克隆至该启动子下游.结果:质粒PLHSN经EcoR I和BamH I酶切后可切出510bp和5.8kb两条片段;质粒PLHGSN经BamH I酶切可切出520bp和6.7kb两条片段.结论:成功构建了携带HER2基因启动子和mtGFP 报告基因的逆转录病毒载体.
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FISH技术检测乳腺癌患者17号染色体与HER2基因和TOP2A基因相关性分析
目的 分析乳腺癌患者中17号染色体、HER2基因和DNA拓扑异构酶Ⅱα (TOP2A)基因的表达,探究17号染色体多体与HER2基因扩增和TOP2A基因扩增的相关性在乳腺癌治疗中的作用.方法 应用FISH技术检测60例乳腺癌患者组织中17号染色体多体、HER2基因扩增和TOP2A基因扩增状态.结果 乳腺癌患者17号染色体多体与HER2扩增及TOP2A扩增无显著相关性(P＞0.05),HER2基因扩增和TOP2A基因的扩增不具有显著相关性(P＞0.05).结论 乳腺癌患者中17号染色体多体与HER2和TOP2A基因的扩增可能在乳腺癌发生发展中独立作用,需分别检测指导化疗及分子靶向治疗等个体化治疗.
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重组质粒pcDNA3.1-Her2-hsp70的构建及其表达
目的 构建重组表达质粒pcDNA3.1-Her2-hsp 70,并筛选稳定表达Her2蛋白的细胞株.方法 采用RT-PCR法扩增人乳腺癌SKBR-3细胞中Her2和hsp70基因,插入质粒pcDNA3.1中,构建重组表达质粒pcDNA3.1-Her2、pcDNA3.1-hsp70,经双酶切后,回收hsp70基因,连接人质粒pcDNA3.1-Her2的N-末端,构建重组表达质粒pcDNA3.1-Her2-hsp 70.将质粒pcDNA3.1和pcDNA3.1-Her2-hsp70分别转染小鼠乳腺癌4T-1细胞,采用Westernblot法检测Her2蛋白的表达.结果 重组表达质粒pcDNA3.1-Her2、pcDNA3.1-hsp70及pcDNA3.1-Her2-hsp70经双酶切鉴定,证明构建;转染质粒pcDNA3.1-Her2-hsp70的4T-1细胞中可见相对分子质量约65 000的Her2蛋白的表达.结论 已成功构建了重组质粒pcDNA3.1-Her2、pcDNA3.1-hsp70及pcDNA3.1-Her2-hsp70,并获得了稳定表达Her2蛋白的小鼠乳腺癌4T-1细胞,为进一步探讨佐剂辅助异种抗原产生的抗肿瘤免疫效应奠定了基础.
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胃癌组织中HER2基因及p53蛋白表达及其临床意义
目的:研究胃癌组织中HER2基因及P53蛋白表达情况,分析其对临床诊疗的意义与价值.方法:选取2013年7月到2015年7月我院确诊的胃癌患者110例,检测患者胃癌组织中的HER2蛋白表达与基因扩增,及P53蛋白的表达情况,分析HER2基因扩增与P53蛋白表达与病理关系间的关系.结果:HER2基因扩增率为17.3％(19/110),HER2蛋白表达率为42.7％(47/110),P53蛋白表达率为58.2％ (64/110),其中HER2蛋白表达3+、2+者HER2基因的扩增比例分别为3/4、6/9与1+表达者的3/16比较具有统计学意义(P＜0.05);HER2基因扩增和P53蛋白表达与胃癌淋巴结转移以及浸润程度有关(P＜0.05);相关性分析显示:HER2基因扩增与P53蛋白表达具有正相关关系(P＜0.05).结论:胃癌组织中HER2基因扩增和P53蛋白协同表达,促进胃癌浸润和淋巴结转移,对胃癌早期诊断具有重要参考价值.
