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不同粒径颗粒物对人双核淋巴细胞微核率的影响
大气颗粒物成分复杂,含有较多的化学物质,有机物是其中主要的一类.国内外已有不少资料表明,颗粒物有机提取物中含有诱变、致癌的遗传毒物[1,2],但以人双核淋巴细胞微核试验检测大气颗粒物有机提取物的遗传毒性还罕见报道.本研究目的是用此法检测不同粒径颗粒物有机提取物的致突变性.
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1-20 两种带色样品对SOS反应的影响
目的 SOS显色试验是一种通过显色测定大肠杆菌SOS反应强度的遗传毒性试验,遗传毒物可诱导大肠杆菌SOS反应.通过本实验可了解带色样品对SOS反应的影响.方法37℃活化培养大肠杆菌PQ37 8～10 h,转接培养2 h,加样品后培养2 h,加入B缓冲液300 μl,混匀,水浴5 min,加入显色剂一定时间后测定A420(吸光度)值,求出诱导比值,大于2.0时为阳性.结果 (见表1).结论带色样品对SOS显色试验结果影响较大,去除本底色也不能消除带色样品对结果的影响,但可通过离心减少带色样品对结果的影响.表1 带色样品对SOS反应的影响(-x±s)┏━━━━━━┳━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓┃┃二羟蒽醌(S9) ┃敌克松┃┃分组┃┃┃┃┣━━━━━━━━━┳━━━━━━━┳━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┳━━━━━━━┳━━━━━━━━━┫┃┃不离心┃离心┃不离心减本底┃不离心┃离心┃不离心减本底┃┣━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━┫┃ 20mg ┃ 3.05±0.07 ┃2.13±0.62 ┃ 0.16±0.01 ┃ 5.37±0.01 ┃ 2.18士0.01 ┃ 0.72±0.01 ┃┃ 4mg ┃ 2.85±0.24 ┃ 2.15±0.01 ┃ 0.55±0.01 ┃ 4.28±0.01 ┃ 2.22±0.01 ┃ 0.70±0.01 ┃┃ 800μg ┃ 2.63±0.02 ┃ 2.44±0.01 ┃ 1.45±0.01 ┃ 2.43±0.0 ┃ 2.33±0.01 ┃ 0.49±0.01 ┃┃ 160 μg ┃ 2.64±0.01 ┃ 2.25±0.0 ┃ 2.22±0.01 ┃ 2.45±0.01 ┃ 3.04±0.01 ┃ 1.55±0.01 ┃┃ 33μg ┃ 2.55±0.07 ┃ 1.42±0.01 ┃ 1.80±0.01 ┃ 1.97±0.01 ┃ 1.77±0.01 ┃ 1.53±0.01 ┃┗━━━━━━┻━━━━━━━━━┻━━━━━━━┻━━━━━━━━━┻━━━━━━━━━┻━━━━━━━┻━━━━━━━━━┛
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1-06 遗传毒物阈值的研究进展
众所周知,制定安全限值的前提是通过人群流行病学调查和动物实验获得的观察到有害作用的低剂量(LOAEL)或未观察到有害作用的剂量(NOAEL).但长期以来人们对致突变物和遗传毒性致癌物的剂量-反应关系是否存在阈值一直有争议,通常认为无阈值或零阈值.据此,认为这类化合物在零以上的任何剂量都有某种程度的危险度,因而不能利用安全限值的概念,并为此建立了危险度评定方法.阐明致突变物和遗传毒性致癌物是否存在阈值既是一个重要的理论问题,也是一个有重要意义的实际问题.本研究从遗传毒物阈值的概念,产生阈值的机制,管理机构的要求和发展趋势几方面扼要介绍了目前的研究进展.
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人肝癌细胞系HepG2在遗传毒物检测中的应用及其进展
外来化合物的体外遗传毒性实验常用于各种致癌物和致突变物的快速筛选.HepG2是一种分化好的人肝胚细胞瘤细胞系,保留了较完整的代谢酶及其活性.以HepG2细胞作为实验系统检测各种致癌及非致癌物,在多个观察终点均获得相应的阳性及阴性结果.
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利用原代肝细胞模型检测细胞内磷酸化组蛋白H2AX表达筛选遗传毒物的方法验证
目的：验证以原代小鼠肝细胞为受试细胞，以细胞内磷酸化组蛋白H2AX（γH2AX）表达改变为检测指标的体外检测化学物遗传毒性的实验方法。方法采用改良的两步胶原酶灌注法分离获取小鼠肝细胞，并运用三明治法体外培养肝细胞。选择4种已知的遗传毒物平阳霉素、苯并芘、苯乙烯和氧化苯乙烯及2种非遗传毒物硫唑嘌呤和环孢素A作为受试物，用受试物0~40μmol·L-1处理原代培养肝细胞0~24 h， CCK-8法检测细胞毒性，并用流式细胞术检测γH2AX的表达水平。结果利用所建立的方法筛选上述4种遗传毒物均获得阳性结果，2种非遗传毒物均呈阴性反应。直接遗传毒物平阳霉素和氧化苯乙烯作用3 h，间接遗传毒物苯并芘和苯乙烯作用6 h时，γH2AX表达量高（P<0.01）。4种遗传毒物处理组在适时间点（直接遗传毒物：3 h；间接遗传毒物：6 h）及适作用浓度（10μmol·L-1）诱发细胞γH2AX的表达水平依次为25.7，18.4，12.4和14.2（平均荧光强度），分别为DMSO溶剂对照组的18，12，8和10倍（P<0.01），且γH2AX的表达水平与遗传毒物浓度呈显著正相关（P<0.01）。非遗传毒物硫唑嘌呤和环孢素A处理组与DMSO溶剂和空白对照组相比，γH2AX的水平均无明显变化。结论利用原代肝细胞模型检测γH2AX表达水平可在无S9的情况下有效区分遗传毒物与非遗传毒物和直接遗传毒性与间接遗传毒性。γH2AX表达水平可作为鉴别遗传毒物与非遗传毒物的有效参考指标。
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胞浆分裂阻滞微核试验的研究进展及其应用
19世纪末20世纪初,Howell和Jolly在人体网状细胞中发现了一种富尔根阳性反应的核小体,称之为Howell-Jolly小体,即为微核试验中的微核[1].微核来自染色体断片或在细胞核分裂后期滞后的整条染色体,是细胞受遗传毒物作用后的一种遗传学终点.微核试验已成为检测遗传毒性标准的细胞试验[2].微核试验出现于上世纪70年代,1976年,Countryman和Heddle[3]报道培养人外周血淋巴细胞的微核试验方法,并用于快速评估染色体损伤.
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微核试验的应用进展
微核(micronuclei)简称(MN)是真核类生物细胞中的一种异常结构,往往是细胞径辐射或化学药物的作用而产生的.在细胞间期,微核呈圆形或椭圆形,游离于主核之外、大小在主核1/3以下.
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甲基硝基亚硝基胍诱导CHL细胞中γH2AX焦点的形成
背景与目的: 研究甲基硝基亚硝基胍(MNNG)是否可诱导中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)中γH2AX焦点的形成,以及是否有细胞系依赖性.材料与方法: 应用MTT试验检测不同浓度MNNG对鼠CHL细胞的生存率的影响;应用免疫荧光实验检测细胞中γH2AX焦点的形成.结果: MTT检测表明MNNG对CHL细胞的细胞毒性有明显的时间和剂量效应;免疫荧光实验发现1 mg/L MNNG处理2 h、8 h、24 h的CHL细胞中含有γH2AX焦点的细胞比例及焦点数均较对照组显著增加(P＜0.05),含有超过30个γH2AX焦点的细胞比例分别达到56%,92%和91%.结论: MNNG可以诱导CHL细胞中γH2AX焦点的形成,并且有明显的时间效应.
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涑水河闻喜河段污水及其沿岸井水遗传毒物污染状况的研究
目的与方法:应用蚕豆和大蒜根尖细胞微核技术对涑水河闻喜河段污水及其沿岸井水遗传毒物的污染状况进行了检测.结果:蚕豆检测结果表明,涑水河闻喜河段5个采样点河水都受到了遗传毒物的污染,污染程度依次为东桥＞吕庄水库＞店头＞孙村＞苏村;在近岸5个样点中店头、孙村、吕庄水库和东桥4个样点的井水被污染,在远岸5个样点中吕庄水库和东桥2个样点的井水被污染.用大蒜检测河水的结果与蚕豆检测的结果一致,呈高度正相关(r=0.9503, P＜0.01).大蒜检测沿岸井水的结果表明,近岸的店头和东桥2个样点的井水被污染,远岸的东桥样点的井水被污染,与蚕豆检测结果呈正相关(r=0.8790, P＜0.025).结论:以上结果显示,涑水河闻喜河段河水及其沿岸的部分井水均受到了遗传毒物不同程度的污染.大蒜可作为检测细胞遗传损伤的植物加以开发利用.
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微核与微核试验在遗传毒理学中的应用
细胞分裂中染色单体或染色体的无着丝粒断片或滞后染色体不包被于主核中,独立存在于细胞质中,类似细胞核,但体积较小,称为微核.微核形成是细胞受遗传毒物作用后的一种遗传学终点.以观察细胞中微核的形成来检测遗传毒物,称为微核试验.微核试验因其快速,简便成为广泛使用的遗传毒理学试验之一.
