首页 > 文献资料
-
半导体量子点-Smad2单克隆抗体探针检测大鼠牙乳头细胞内Smad2信号蛋白分子核移位过程
目的 制备半导体量子点-Smad2单克隆抗体荧光探针(QDs-Smad2),用其对大鼠牙乳头细胞内Smad2蛋白分子在TGF-β1刺激下发生的核移位过程进行检测.方法 (1)用化学偶联法制备水溶性QDs-Smad2并纯化,检测其相关光学性质;(2)分别用QDs和Smad2单抗直接标记法和QDs-Smad2直接免疫荧光成像法观察QDs-Smad2对大鼠牙乳头细胞内Smad2的特异性识别能力,并检测细胞内QDs-Smad2的光学性质;(3)在大鼠牙乳头细胞内加入TOF-β1,分别于加入前、加入后12和24h,用QDs-Smad2直接免疫荧光成像法观察Smad2在细胞内发生核移位的动态变化.结果半导体量子点与Smad2单抗通过共价结合形成稳定的QDs-Smad2,QDs-Smad2对大鼠牙乳头细胞内Smad2分子仍具有特异性的免疫识别能力,能成像显示Smad2所产生核移位的动态变化;QDs-Smad2仍具有QDs所具有的荧光度强、光化学稳定性好的光学特征.结论 半导体量子点和单抗共价结合形成分子探针后仍具有独特的光学性质和特异免疫识别能力,能长时间对细胞内蛋白质分子进行成像标记.
-
Pax9调控小鼠帽状期和钟状期牙乳头细胞的增殖和分化的初步研究
目的 观察Pax9对小鼠帽状期和钟状期牙胚牙乳头细胞的作用.方法 培养胚胎14.5d和16.5d小鼠下颌第一磨牙牙胚的牙乳头细胞.转染 Pax9 siRNA至牙乳头细胞中敲低 Pax9的表达,CCK8检测转染后24、48、72和96h细胞的增殖情况,Real-time PCR检测转染后Msx1、Bmp2、Bmp4的表达变化.在转染Pax9 siRNA的同时进行矿化诱导培养7d,然后检测Alp、Dmp1和Dspp的表达情况.结果 敲低Pax9表达后,牙乳头细胞的增殖能力减弱;Msx1的表达水平下降,而Bmp2和Bmp4的表达水平升高;牙本质形成相关基因-Alp、Dmp1和Dspp的表达水平升高,牙乳头细胞的矿化能力增强.结论 Pax9参与调控小鼠帽状期和钟状期牙乳头细胞的增殖和成牙本质分化,同时调控下游基因Msx1、Bmp2和Bmp4的表达.
-
褪黑素对大鼠牙乳头细胞和牙齿发育的影响
目的 研究褪黑素(MT)对大鼠牙乳头细胞及牙齿发育的影响.方法 新生鼠牙乳头细胞的分离培养与鉴定,应用免疫组化检测培养第4代牙乳头细胞褪黑素MT1、MT2受体,四唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度褪黑素对牙乳头细胞增殖的变化,双荧光标记检测褪黑素对SD新生大鼠牙本质生长情况的影响.结果 培养第4代牙乳头细胞存在MT1受体,主要分布于细胞膜、细胞浆和细胞核周围,呈棕黄色阳性颗粒,而MT2受体呈阴性;MTT法检测吸光度(A)值,高浓度MT组明显小于对照组(P<0.05);荧光标记检测10天牙本质生长距离褪黑素组明显小于对照组(P<0.05).结论 褪黑素能够明显抑制牙乳头细胞的增殖,对牙本质生长的早期发育起抑制作用.
-
AFMK对大鼠牙乳头细胞增殖和分化的影响
目的 探讨N1-乙酰基-N2-甲酰基-5-甲氧基犬尿氨酸(AFMK)对大鼠牙乳头细胞(RDPCs)增殖和分化的影响.方法 选用新生SD大鼠,体外分离培养RDPCs.取第4代RDPCs,分别在普通培养条件和矿化诱导条件下,采用MTT比色法检测不同浓度AFMK对RDPCs增殖的影响;矿化诱导条件下,AFMK刺激RDPCs后,PNPP偶氮法、茜素红染色法和免疫组化法分别检测RDPCs的碱性磷酸酶(ALP)活性、矿化基质形成和牙本质涎蛋白的表达.结果 在普通培养条件下,加药第2、3、4天后,AFMK低、高浓度组的吸光度(A)值均低于对照组(P＜ 0.05).在矿化诱导条件下:(1)加药第2、3、4天后,AFMK低、高浓度组的A值均高于对照组(P＜ 0.05)；(2)AFMK高浓度组ALP活性高于对照组(P＜ 0.05)；(3)AFMK高浓度组茜素红染色A值高于对照组(P＜ 0.05)；(4)牙本质涎蛋白染色在对照组呈弱阳性,在AFMK高浓度组呈强阳性.结论 普通培养条件下,AFMK抑制RDPCs的增殖;矿化诱导条件下,AFMK则促进其增殖和分化.
关键词： N1-乙酰基-N2-甲酰基-5-甲氧基犬尿氨酸 牙乳头细胞 增殖 分化 -
钟状期牙胚来源的猪牙乳头细胞培养
目的 观察新生猪牙胚的发育情况并培养猪牙乳头细胞,对传代细胞的生物学特性进行研究.方法 选择3日龄新生猪,分离牙胚,通过组织学、免疫组化等研究牙胚的发育情况.分离牙乳头组织,酶消化法培养牙乳头细胞并鉴定;观察细胞生长特性,通过牙本质涎蛋白、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原免疫组化染色比较体内外细胞的生物学性状.结果 新生猪磨牙尚未萌出,其中第二磨牙为典型的钟状期牙胚.分离培养的牙乳头细胞在体外生长良好,经鉴定细胞来源于间充质组织,免疫组化表明,牙本质涎蛋白和Ⅰ型胶原表达阳性,Ⅲ型胶原表达阴性.结论 新生猪可以提供处于钟状期的牙胚,通过酶消化法可成功培养猪牙乳头细胞,第3代细胞的生物学特性与体内细胞有一定相似性,可用于进一步深入研究.
-
牙乳头细胞对大鼠牙髓干细胞中Notch信号的影响
目的 探讨大鼠牙乳头细胞对牙髓干细胞增殖作用的影响过程中,相关牙齿发育信号通路的机制.方法 原代培养大鼠牙髓干细胞和牙乳头细胞,建立牙髓干细胞和牙乳头细胞的分层共培养体系.共培养5d后,应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测Notch信号通路中Notch2、Hes1 mRNA与蛋白的表达.结果 RT-PCR和Western blot结果显示牙髓干细胞和牙乳头细胞分层共培养组中Notch2、Hes1 mRNA和蛋白表达水平较单纯牙髓干细胞培养组显著增强(P＜0.01).结论 牙乳头细胞促进大鼠牙髓干细胞增殖可能与牙乳头细胞促进牙髓干细胞中Notch信号分子的表达有关.
-
猪牙乳头细胞与β-磷酸三钙支架构建牙髓牙本质复合体样结构
目的:牙乳头细胞是牙髓细胞、牙本质细胞的前体细胞,应用组织工程方法探讨以猪牙乳头细胞为种子细胞构建牙髓牙本质复合体的可行性. 方法:实验于2004-03/2005-11在上海市口腔医学重点实验室完成.以第1代猪牙乳头细胞为种子细胞与β-磷酸三钙为支架材料复合后接种在裸鼠皮下.移植在裸鼠皮下的β-磷酸三钙支架与牙乳头细胞复合物为实验组,同期移植牙胚作为阳性对照组,同期植入的空白β-磷酸三钙支架材料作阴性对照组.每组3个样本,在同一裸鼠皮下植入.8周后取材进行组织学(苏木精-伊红染色及Goldner'三色法染色)、牙本质涎蛋白免疫组织化学及透射电镜检测.结果:①移植物组织学切片显示在支架材料孔隙内形成了牙髓牙本质复合体样结构,由牙本质基质样物质、前期牙本质样物质及牙髓样组织组成.在牙本质样物质内部可见少量牙本质小管,牙髓样组织外层细胞较为密集且单层排列,表现出成牙本质细胞样细胞的特征.②免疫组织化学染色显示,在邻近成牙本质细胞样细胞周围的前期牙本质内牙本质涎蛋白呈阳性表达.③透射电镜结果显示,实验组局部可见牙本质小管样结构.结论:以猪牙乳头细胞为种子细胞、β-磷酸三钙为支架材料,成功构建出牙髓牙本质复合体样结构.
-
牙乳头细胞复合海藻酸钠-聚乳酸羟基乙酸共聚物构建组织工程牙根
背景：牙胚组织工程重建研究表明牙齿结构可用组织工程方法构建，牙齿存活及行使功能的关键在于牙根及其牙周附着，那么是否可以绕开具有复杂组织结构的完整牙齿组织工程概念的束缚，而将组织工程构建目标仅仅指向结构单一的牙根组织？
目的：采用组织工程方法，以牙乳头细胞为种子细胞，海藻酸钠-聚乳酸羟基乙酸共聚物为支架材料构建兔组织工程牙根。
方法：分离、培养扩增兔牙乳头细胞，离心收集细胞混于海藻酸钠水凝胶，制成浓度6×109 L-1的细胞悬液，接种到人牙根状聚乳酸羟基乙酸共聚物支架中，用CaCl2固化后，构建出细胞-支架复合物，然后移植于裸鼠背部皮下，植入后4，8周取材，进行大体标本、X射线、三维CT、组织学及免疫组织化学染色观察。
结果与结论：经4-8周体内移植后获得的组织定型于牙根形状。植入4周后，标本密度较低；牙根移植物出现矿化，但矿化不完全，海藻酸钠水凝胶已降解，聚乳酸羟基乙酸共聚物支架未降解；标本中出现了大量类牙本质结构，在标本表面具有纤维膜结构，与根面平行，结构不连续，没有明显髓腔形成。植入后8周，标本密度增高，更为接近自然生长的牙根组织；牙根移植物矿化基本完成，聚乳酸羟基乙酸共聚物支架已大部分降解；标本中出现了大量类似于成熟牙本质的结构，在标本表面形成连续的纤维膜结构，与根面平行，在其下方开始有类似牙骨质样结构的形成。表明采用工程方法可建出具有基本组织学类型和结构的类似人工牙根组织。 -
牙乳头细胞对大鼠牙髓干细胞增殖的影响及机制研究
目的 探讨大鼠牙乳头细胞在体外与牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)分层共培养对DPSCs增殖的影响及相关机制.方法 建立DPSCs和牙乳头细胞的共培养体系,观察细胞矿化结节形成情况,并利用流式细胞术检测DPSCs的细胞周期;给予Notch信号通路抑制剂异硫氰酸苯己酯(PHI)干预DPSCs,检测DPSCs中Notch1、Jagged1 mRNA和蛋白的表达变化.结果 分层共培养14 d后,DPSCs中可观察到明显的矿化结节.流式细胞术结果显示共培养可促进DPSCs的增殖.DPSCs和牙乳头细胞的分层共培养下,DPSCs中Notch1、Jagged1mRNA和蛋白表达较对照组(单纯DPSCs培养)显著增强.结论 牙乳头细胞与DPSCs共培养可能通过激活Notch信号通路,促进DPSCs的矿化与增殖.
-
牙乳头细胞促进大鼠牙髓干细胞中Wnt信号分子的表达
目的 探讨牙乳头细胞对大鼠牙髓干细胞(DPSC)中Wnt信号分子表达的影响.方法 建立大鼠DPSC和牙乳头细胞的分层共培养体系,采用免疫组化方法分别鉴定DPSC和牙乳头细胞,应用RT-PCR和Western bl.t方法检测Wnt信号中的重要因子Wnt1、腺瘤样息肉蛋白(APC)、β-连环蛋白(β-catenin)mRNA与蛋白的表达.结果 分层共培养5d后,RT-PCR和Western blot结果显示分层共培养组中Wnt 1、β-catenin mRNA和蛋白表达较DPSC培养对照组显著增强(P＜0.01).而APCmRNA和蛋白表达和对照组比较无统计学差异(P＞0.05).结论 牙乳头细胞和DPSC分层共培养可促进DPSC中Wnt信号分子的表达.
-
大鼠牙乳头细胞旁分泌效应对巨噬细胞分泌炎症因子的调控作用
目的:研究大鼠牙乳头细胞(rat dental papilla cells,RDPCs)对LPS活化的巨噬细胞分泌免疫因子的影响.方法:分离SD大鼠牙胚,酶消化法原代培养牙乳头细胞并进行矿化诱导和成脂诱导,茜素红染色观察矿化结节形成.油红O染色观察脂滴形成.CCK8法检测大鼠牙乳头细胞条件培养基(rat dental papilla cells' conditioned medium,RDPC-CM)对巨噬细胞增殖能力的影响,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定RDPC-CM对巨噬细胞分泌炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-6的影响,Griess reagent法检测RDPC-CM对巨噬细胞分泌炎症因子NO的影响.采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析.结果:原代培养24 h后,大鼠牙乳头细胞从组织块中爬出,传代后可得到纯化大鼠牙乳头细胞;茜素红染色见矿化诱导组中出现散在的红色矿化结节;油红O染色后可见经成脂诱导的牙乳头细胞中脂滴形成;CCK8结果表明,RDPC-CM对巨噬细胞增殖能力无影响;ELISA结果显示,大鼠牙乳头细胞条件培养基可对LPS活化巨噬细胞分泌细胞因子产生作用,表现为条件培养基作用于巨噬细胞24h可减少细胞分泌TNF-α,而对IL-1β和IL-6分泌无影响;Griess reagent法结果显示,RDPC-CM对LPS活化的巨噬细胞分泌NO无影响.结论:大鼠牙乳头细胞条件培养基作用于LPS活化的巨噬细胞,可使巨噬细胞分泌TNF-α下降,提示牙乳头细胞具有一定的免疫调控作用.
-
afgf和TGFβ1联合诱导猪牙乳头细胞向成牙本质样细胞分化
目的 建立猪牙乳头细胞向成牙本质样细胞分化的体外诱导方案.方法 联合应用aFGF和TGFβ1对体外培养的猪牙乳头细胞进行平面诱导,观察诱导后细胞的形态学变化,通过Von Kossa 染色检测诱导后细胞的矿化能力,并采用免疫荧光染色和RT-PCR检测成牙本质细胞特异性标志物--DSP蛋白和DSPP mRNA在诱导后细胞中的表达. 结果诱导后部分细胞出现细长的单侧细胞突起,在矿化液培养2周后形成典型的矿化结节,并且表达DSP蛋白和DSPP mRNA. 结论 联合应用aFGF和TGFβ1可以诱导体外培养的猪牙乳头细胞向成牙本质样细胞分化.
关键词： 牙乳头细胞 酸性成纤维细胞生长因子 转化生长因子β1 分化 -
单独或联合应用酸性成纤维细胞生长因子与转化生长因子对猪牙乳头细胞增殖的影响
目的 研究酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)和转化生长因子(TGF)β1单独或联合应用后对猪牙乳头细胞(pDPCs) 增殖的影响.方法 通过体外细胞培养技术,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测aFGF、TGF β1不同浓度、不同时间单独及联合应用后对pDPCs增殖的影响,所得数据用单因素方差进行分析.结果 aFGF在5～100 ng/ml和8 d范围内能促进pDPCs增殖,强效应浓度为10 ng/ml和25 ng/ml,强效应时间为8 d;TGF β1在5～50 ng/ml和8 d范围内能抑制pDPCs增殖,其中以5 ng/ml和10 ng/ml抑制作用较弱;以aFGF强效应浓度与TGF β1较弱抑制浓度交互联合后对pDPCs有显著的促进增殖作用,其中以aFGF 25 ng/ml+TGF β1 10 ng/ml的效果明显.结论 在一定的浓度范围内,aFGF促进pDPCs增殖,TGF β1抑制pDPCs增殖,两者联合可以促进pDPCs增殖.
关键词： 牙乳头细胞 酸性成纤维细胞生长因子 转化生长因子β1 -
骨形成蛋白4对大鼠牙乳头细胞生物学行为的影响
目的观察骨形成蛋白4(BMP4)对体外培养的大鼠牙乳头细胞增殖及分化的影响,为探讨BMP4在牙胚发生发育中的调控作用奠定基础.方法体外培养胚胎13d的大鼠牙乳头细胞,利用MTT法和测定细胞内碱性磷酸酶含量检测BMP4对大鼠牙乳头细胞增殖及分化的影响.结果 BMP4能抑制牙乳头细胞的增殖,并能促进细胞分泌碱性磷酸酶(P<0.01).结论 BMP4具有抑制大鼠牙乳头细胞增殖,并促进牙乳头细胞成熟分化的调控作用.
-
体外诱导培养大鼠牙乳头细胞碱性磷酸酶和Ⅰ型胶原的表达
目的:观察体外诱导培养的大鼠牙乳头细胞碱性磷酸酶和Ⅰ型胶原蛋白合成的变化.方法:原代培养法获得大鼠牙乳头细胞,在条件培养基中进行诱导培养,在不同时间进行钙结节染色,ALP染色和定量测定,ELISA法和RT-PCR法测定细胞Ⅰ型胶原蛋白的量和mRNA表达水平.结果:体外诱导培养的大鼠牙乳头细胞形成含钙化物的细胞结节,体外培养至12 d的诱导组细胞ALP高于对照组(P＜ 0.05),细胞内1型胶原表达量高于对照组(P＜0.05),且Ⅰ型胶原mRNA表达水平上调(P＜0.05)；培养15d后诱导组细胞分泌的Ⅰ型胶原高于对照组(P＜0.05).结论:大鼠牙乳头细胞在体外分化的过程中碱性磷酸酶活性明显增高,矿化能力增强,并不断合成和分泌Ⅰ型胶原形成胞外基质.
-
Calbindin-D28k与肌动蛋白在培养人牙乳头细胞中的共定位
目的 观察Calbindin-D28k与肌动蛋白在体外培养人牙乳头细胞中的共定位情况.方法 采用细胞培养技术和免疫荧光双标记结合激光共聚焦显微镜技术对体外培养人牙乳头细胞中Calbindin-D28k与肌动蛋白进行检测.结果 Calbindin-D28k与肌动蛋白在培养人牙乳头细胞中均有表达,且染色均主要位于胞浆,Calbindin-D28k较肌动蛋白更具普遍性,胞核偶有弱阳性.二者的共定位只发生于核周及近核胞浆,其范围和密度在细胞之间有所差异.结论 Calbindin-D28k与肌动蛋白可能通过相互作用来行使某些特定功能.
关键词： Calbindin-D28k 肌动蛋白 牙乳头细胞 免疫荧光双标记 -
大鼠牙乳头细胞与纳米羟基磷灰石的体外复合培养
目的:初步探讨多孔纳米羟基磷灰石(nano-hydroxyapatite,nano-HAP)对体外培养的大鼠牙乳头细胞(rat dental papilla cells,RDPC)增殖和分化功能的影响,以及nano-HAP作为牙组织工程支架材料的可行性.方法:实验组为RDPC与nano-HAP复合培养,对照组为RDPC常规培养.通过电镜观察RDPC在nano-HAP表面生长与附着状态,同时检测细胞增殖状况、细胞蛋白含量和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)等,评价RDPC生长情况和细胞活性.结果:实验组生长良好,6 d和8 d时实验组RDPC增殖明显高于对照组;6 d和9 d时实验组细胞总蛋白含量高于对照组;各时间点两组细胞ALP差异无统计学意义.结论:nano-HAP具有良好的生物相容性,能使RDPC细胞增殖,并可使其活性明显增强,可作为牙组织工程备选的支架材料;RDPC与牙组织工程支架材料复合培养可作为体外评价牙组织工程支架材料生物相容性的方法之一.
-
半导体量子点单克隆抗体荧光探针对牙乳头细胞内Smad4信号蛋白分子核移位过程的检测
目的:制备半导体量子点-smad4单克隆抗体荧光探针(semiconductor quantum dots,QDs-Smad4),并用其对大鼠牙乳头细胞内smad4蛋白分子在TGF-β1的刺激下发生的核移位过程进行检测.方法:①用化学偶连法制备水溶性的QDS-Smad4单抗荧光探针并纯化;②测定QDS-smad4单抗荧光探针的吸收光谱、发射光谱并用激光共聚焦显微镜对QDs-smad14单抗荧光探针的光学性质进行检测;③采用SP免疫组化法、QDS直接标记法、smad4单抗直接标记法和QDS-Smad4单抗荧光探针直接免疫荧光成像法比较观察QDS-smad4单抗荧光探针对大鼠牙乳头细胞内Smad4的特异性识别能力,并检测细胞内ODs-Smad4单抗荧光探针的光学性质;④在大鼠牙乳头细胞内加入TGF-β1,分别于加入前、加入后12 h和24 h,采用SP免疫组化法和QDS-Smad4单抗荧光探针直接免疫荧光成像法观察比较Smad4在细胞内发生核移位的动态变化.结果:半导体量子点与Smad4单抗通过共价结合形成稳定的QDs-Smad4单抗荧光探针,QDS-Smad4单抗荧光探针对大鼠牙乳头细胞内smad4分子仍具有特异性的免疫识别能力,能成像显示Smad4所产生核移位的动态变化;QDS-Smad4单抗荧光探针仍具有QDS 所具有的激发光谱宽,发射光谱窄,荧光度强,光化学稳定性好等光学特征.结论:半导体量子点和单抗共价结合形成分子探针后仍具有独特的光学性质和特异免疫识别能力,能长时间对细胞内蛋白质分子进行成像标记,这为半导量子点用于可视化研究活细胞内蛋白质分子的运动和相互作用等过程提供了科学依据.
-
牙乳头细胞基本特征及其研究进展
牙乳头细胞来源于外胚间充质,具有多向分化潜能,是体内唯一分化为成牙本质细胞的前体细胞.该细胞在牙发育和牙体牙髓损伤修复过程中起重要作用.牙乳头细胞相关的组织工程化研究是近年来的热点.下面就牙乳头细胞的形态及其功能特征、三维细胞培养、组织工程化牙研究进展等方面的研究作一综述.
-
人类牙乳头细胞的体外培养及细胞生物学性状研究
目的体外分离培养人类牙乳头细胞,并对传代细胞的生物学特性进行研究.方法选择3～4月胎龄的自然流产人胚胎,分离牙乳头,组织块法培养人类牙乳头细胞并鉴定.观察细胞的生长特性,经Ⅰ型胶原、纤维粘连蛋白和层粘连蛋白免疫细胞化学染色及细胞矿化诱导后的钙盐染色对细胞的生物学性状进行研究.结果分离培养的人类牙乳头细胞在体外生长良好,细胞及分泌基质中的Ⅰ型胶原、纤维粘连蛋白和层粘连蛋白表达阳性.将培养细胞行矿化诱导后,细胞可形成钙化基质.结论通过机械分离及贴壁法可获得人类牙乳头细胞,其传代细胞在基质形成和矿化能力方面与体内人牙乳头细胞有相似性,有潜力作为牙组织工程的种子细胞.
