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苯环壬酯对海马神经元谷氨酸突触传递的影响
苯环壬酯是我所开发的抗胆碱药,在体研究表明它能对抗胆碱酯酶抑制剂诱发的惊厥.除与M、N受体有关外,惊厥的发生与中枢谷氨酸能神经元的过度兴奋有关.本实验用膜片箝全细胞记录方法观察了苯环壬酯(phencynonate,8021)对培养的大鼠海马神经元谷氨酸突触传递的影响,结果如下:
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5-HTR2C重组质粒电转染至大鼠海马神经元对细胞活性的影响
目的:5-羟色胺2C受体在抑郁症的发病及治疗机制中发挥重要的作用,模拟5-HTR2C表达的异常升高,建立5-HTR2C高表达的细胞模型,为抑郁症治疗药物的开发提供平台.方法:采用课题组前期已构建5-HTR2C真核表达载体;按试剂盒方法提取5-HTR2C重组质粒;并取新生24 h内Wistar乳鼠海马,制备海马神经元,按试剂盒方法对质粒进行电转染,并于荧光显微镜下观察转染效果;将所培养细胞分为:非转染细胞(NTC)和转染细胞(TC),转染细胞分为:转染组(TC+5-HTR2C质粒)、空质粒组(TC+空质粒)、激动剂组(TC +激动剂);为确定激动剂组细胞提取蛋白的时间,分别于加入激动剂后0、5、10、20、40、60 min提取蛋白,Western- blot检测;待各组细胞处理后,采用Western-blot检测5-HTR2C以及MEK/P-MEK的表达,以验证5-HTR2C重组质粒转染后是否仍有活性.结果:海马神经元电转染后48 h后,神经元数量较多,电转染率及生存率高;体外培养的海马神经元中加入激动剂mCPP后5 min至60 min, MEK磷酸化水平逐渐升高,在20 min时MEK磷酸化水平已较高;与NTC相比,TC+5-HTR2C质粒和TC +激动剂组中P-MEK的蛋白水平明显升高.结论:5-HTR2C重组质粒导入海马神经元后48 h细胞生长良好,死亡率低,细胞饱满,电转染率较高,可于此时收集细胞.激动剂组可在mCPP与细胞共培养后20-60 min间收集细胞.通过比较TC+5-HTR2C质粒组及TC +激动剂组,发现加入激动剂的细胞中MEK磷酸化水平较前者要强.因此,5-HTR2C重组质粒转染至海马神经元中后仍具有生理活性,说明5-HTR2C重组质粒的转染比较成功.
关键词: 5-HTR2C重组质粒 电转染 大鼠海马神经元 抑郁症 -
吗啡对大鼠海马神经元钾、钙通道的作用
吗啡是常见的阿片类镇痛药,长时间应用可导致吗啡耐受和依赖,其作用机制十分复杂.海马中同时包含μ,κ,δ阿片受体[1],与吗啡耐受及依赖有一定的关系,并参与机体的痛觉调制过程,因而了解吗啡对海马神经元离子通道的作用对阐明吗啡的镇痛、耐受及依赖机制具有重要的理论及实际意义.
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氯贝丁酯抑制大鼠海马神经元HMG还原酶表达和胆固醇外流
氯贝丁酯广泛用于高脂血症及其继发症动脉粥样硬化的治疗.研究证实高脂血症还是阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)发生的重要因素.β-淀粉样蛋白前体蛋白(amybid precursor protein,APP)代谢产生β-淀粉样蛋白(β-amyloid peptide,Aβ),是AD发生的关键,APP的3种同功体即APP695、APP751和APP770均能生成AB.高胆固醇水平促进APP生成AB,降低神经元胆固醇合成和/或促进胆固醇排出均可抑制AB的生成[1].
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铅对离体海马神经元代谢型谷氨酸受体基因表达的影响
铅具有很强的神经发育毒性,主要表现为铅对未成熟脑学习记忆的损害[1],围生期铅暴露可明显抑制海马长时程增强(LTP)的功能.铅对中枢神经细胞信号传递的影响已成为目前铅神经毒性机理研究的热点.胚胎大鼠海马神经元表达的NMDA受体是铅神经毒性作用的主要靶位点之一[2],代谢型谷氨酸受体(metabotropic glutamate receptors,mGluRs)可诱导产生LTP[3],且其诱导维持LTP的过程中有NMDA受体参与.
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吡虫啉对原代培养的大鼠海马神经元的影响
吡虫啉是一种新型的高效硝基亚甲基类内吸杀虫剂,作用于昆虫神经系统的烟碱型乙酰胆碱受体(nAchR)[1].吡虫啉对实验动物的急、慢性毒性研究已有报道[2],但其对神经系统的影响国内尚未见报道.为探讨吡虫啉对中枢神经系统的作用,我们研究了吡虫啉对原代培养的大鼠海马神经元的影响.
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低温对二氮嗪预处理减轻大鼠海马神经元缺氧复氧损伤的作用
脑缺血再灌注损伤是一个多因素、多环节的恶性级联过程,针对不同环节发挥作用的保护措施联合应用比单一保护措施更有效.低温简单易行,安全范围大,是当前较为重要的脑保护措施,但低温并不能完全消除脑损伤.有研究表明,选择性线粒体内膜ATP敏感性钾通道(Mito-KATP)开放剂二氮嗪可减轻缺氧复氧性脑损伤[1].但低温对二氮嗪预处理减轻大鼠海马神经元缺氧复氧损伤的作用尚需进一步探讨.本研究拟观察低温对二氮嗪预处理减轻大鼠海马神经元缺氧复氧损伤的作用,为临床研究提供理论依据.
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氯胺酮对新生大鼠海马神经元NMDA受体表达的影响
氯胺酮是临床常用的麻醉药,具有镇痛效果好,对呼吸和循环功能抑制较轻等优点,尤其在小儿麻醉中应用广泛.氯胺酮作为N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体非竞争性拮抗剂,可阻断神经递质谷氨酸和NMDA受体的结合,使谷氨酸不能发挥作用,从而产生麻醉作用.
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大鼠海马神经元的体外原代培养
细胞镇痛是生物镇痛的主要方法,以前曾将研究主要集中于能分泌镇痛物质的嗜铬细胞[1],但微囊化的嗜铬细胞仍无法完全避免免疫反应[2],神经元细胞是大脑中枢的主要细胞之一,其作为镇痛细胞移植入大脑可以减少以往的体细胞移植所带来的免疫反应[3].本试验旨在探索大鼠海马神经元的培养过程,观察细胞的生长情况,为转基因的时机提供依据.
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加巴喷丁对癫痫大鼠海马神经元及 P75 NTR 表达的影响
加巴喷丁(gabapentin ,GBP)是近几年应用于临床的新型抗癫痫药,国外一些研究已证实了加巴喷丁具有神经保护作用。本研究通过腹腔注射戊四氮建立癫痫持续状态大鼠模型,观察大鼠行为学改变,海马神经元组织学改变和凋亡相关基因P75N T R的表达变化,探讨加巴喷丁的抗癫痫作用及可能的神经保护机制。
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刺五加对衰老大鼠海马神经元的恢复
衰老是生命过程中正常的生理现象,大量实验表明,自由基及其引起的脂质过氧化反应是引起生物衰老的主要原因。是机体各器官功能普遍的、逐渐降低的过程。表现为精神不振、健忘、形寒肢冷、纳差少眠、腰膝无力、气短乏力,甚则面浮肿等。海马与空间学习记忆功能密切相关,还对记忆各种新知识起关键调节作用。本文探讨刺五加对D-半乳糖致衰老大鼠海马神经元损伤保护的形态学改变。
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正加速度暴露对大鼠海马神经元形态结构的影响
正加速度(+Gz)引起急性脑功能障碍及其防护是航空医学研究的重要课题之一.随着科学技术的不断发展,飞机的性能越来越高,在实际飞行中飞行员所承受的G值越来越高.
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共聚焦激光扫描显微镜技术在研究大鼠海马神经元胞内钙超载中的应用
目的观察抑制性氨基酸牛磺酸对兴奋性氨基酸谷氨酸所致胞内钙超载的影响.方法选择Fluo-3/AM对培养的海马神经元进行着色后,用共聚焦激光扫描显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)实时扫描,动态显示海马神经元二维图像,以计算机相应软件对胞内钙的荧光强度变化进行分析统计.结果在0.5 mmol/L谷氨酸作用下,胞内钙荧光强度迅速升高(P<0.001);0.5 mmol/L谷氨酸与3 mmol/L牛磺酸共同作用于海马神经元时,胞内钙荧光强度明显降低(P<0.001);灌流液中去除牛磺酸后,胞内钙荧光强度上升(P<0.001).结论抑制性氨基酸牛磺酸可抑制由兴奋性氨基酸谷氨酸所致神经元的胞内钙超载;CLSM以其独特的优势,在高清晰度地显示海马神经元形态的同时,也可动态地观察活细胞在不同环境下胞内钙的快速变化以及定量分析.该技术在动态观察和二维图像的高分辨率上比传统测钙方法有更大的优越性.
关键词: 共聚焦激光扫描显微镜 Fluo-3 牛磺酸 胞内钙 大鼠海马神经元 -
5-羟甲基糠醛对过氧化氢致大鼠海马神经细胞损伤的保护作用研究
目的观察山茱萸活性成分5-羟甲基糠醛(5-HMF)对H2O2诱导损伤的大鼠海马神经细胞增殖、凋亡及LDH、SOD表达的影响.方法 常规方法进行乳大鼠海马神经元的原代培养,建立体外H2O2氧化损伤模型,采用光镜和电镜进行形态学观察,MTT法对比不同浓度5-HMF对大鼠海马神经元增殖的影响,黄嘌呤氧化酶法检测各组细胞上清波中LDH、SOD的活力.结果 光镜结果显示5-HMF大、中剂量组的细胞形态基本正常;电镜结果显示5-HMF大剂量组对细胞有一定程度保护作用.MTT结果显示5-HMF大、中剂量组OD值比H2O2模型组明显增高(P<0.05);LDH 和SOD检测结果表明5-HMF大、中剂量组能明显降低培养液中LDH活性、升高SOD活性.结论 山茱萸活性成分5-HMF大、中剂量组对H2O2损伤的大鼠海马神经元有一定保护作用.
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大鼠海马神经元缺氧/复氧后caspase-3活性的变化/硫氧还蛋白对缺氧/复氧海马神经元生长与凋亡的影响
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硫氧还蛋白对缺氧/复氧海马神经元生长与凋亡的影响
本研究诱导原代培养10 d的新生SD大鼠海马神经元,在神经元缺氧/复氧前,先用硫氧还蛋白处理,检测在不同时点的神经元存活率及Caspase-3蛋白酶活性,探讨硫氧还蛋白在神经元生长及凋亡中的可能作用机理.
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内质网应激与吸入麻醉药引起的认知功能障碍的研究进展
内质网(ER)广泛存在于真核细胞中,其内环境的稳定是实现ER功能的基本条件,ER内未折叠或错折叠蛋白积聚和钙平衡失调均可导致内质网应激(ERS),而长期、严重的ERS则会诱导细胞凋亡及死亡.ERS在神经退行性疾病病理机制中的作用已成为近年来的热点,国内外关于ERS与临床疾病的相关研究报道已有很多.吸入麻醉药是一类低分子量气体,具有很快通过胎盘的能力.大量相关动物实验研究表明该类气体能够造成新生大鼠海马神经元膜蛋白的异常,影响突触形成及发育,引起神经元退行性变,从而改变成年鼠的学习记忆功能.
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慢性脑缺血大鼠海马质子磁共振波谱分析
慢性脑缺血损伤是多种慢性脑血管病共同的病理过程,可导致神经中枢系统的器质性病变和认知功能障碍[1-2],已有研究从病理形态学的角度证实慢性脑缺血后海马神经元的损伤缺失[3-5].磁共振波谱(MRS)技术,可以在体、无创性地针对脑血管病的组织细胞代谢水平、生化变化进行定量分析,反映脑血管疾病的机能变化和演变进程.本研究运用质子磁共振波谱(1H-MRS)在体检测慢性脑缺血大鼠海马神经元的总体活性状态,旨在从生理机能学的角度探讨慢性脑缺血的损伤机制.
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益智仁对慢性束缚应激致大鼠海马神经元内Ca~(2+)浓度的调节作用
海马作为应激损伤的重要靶区,已被研究者广泛关注.有研究表明慢性应激可以损伤海马神经元~([1-2]),进一步研究其损伤机制发现,可能与在慢性应激条件下,下丘脑-垂体-肾上腺轴的持续激活和糖皮质激素的高水平分泌,导致海马神经元突触间隙Glu大量堆积,NMDA受体持续激活,Ca~(2+)过量内流有关.
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腹腔注射卡因酸对大鼠海马神经元和胶质细胞的影响
本实验通过腹腔注射卡因酸建立模型,7d后观察大鼠海马神经元及胶质细胞活性改变的情况,以探讨兴奋性氨基酸过多对胶质细胞活性和神经元的影响.