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Delta阿片受体、β-arrestin1、Bcl-2在溃疡性结肠炎大鼠脾脏组织中的表达及乌梅丸的干预作用
目的:观察溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠脾脏组织Delta阿片受体、β-arrestinl、Bcl-2 mRNA和蛋白表达及乌梅丸的干预作用,旨在研究乌梅丸治疗结肠炎的机制.方法:56只SD大鼠随机分成空白对照组、结肠炎模型组、美沙拉嗪组、乌梅丸组(每组14只).除空白对照组外,其他3组均应用2,4,6-三硝基苯磺酸灌肠.模型建成2d后,空白对照组和结肠炎模型组分别以蒸馏水3 mL/只灌胃,美莎拉嗪组用美莎拉嗪混悬液(浓度50 g/L)、乌梅丸组用乌梅丸液(浓度0.51 g/L)以3 mL/只灌胃,连续给药15d后取脾脏组织,应用Real time-PCR检测Delta阿片受体、β-arrestinl、Bcl-2 mRNA的表达,应用Western blot技术检测Delta阿片受体、β-arrestin1、Bcl-2蛋白的表达.结果:空白对照组Delta阿片受体、β-arrestin1 及Bcl-2 mRNA的相对表达分别为1.11±0.10、1.05±0.06及1.06±0.04;蛋白的相对表达分别为0.48±0.08、0.62±0.07及0.76±0.10.结肠炎模型组Delta阿片受体、β-arrestin1及Bcl-2的mRNA的相对表达分别为2.50±0.25、3.27±0.41及2.48±0.43;蛋白的相对表达分别为1.04±0.17、1.50±0.15及1.26±0.20.美沙拉嗪组Delta阿片受体、β-arrestin1及Bcl-2 mRNA的相对表达分别为1.52±0.09、1.63±0.27及1.56±0.09;蛋白的相对表达分别为0.68±0.17、0.77±0.15及0.96±0.16.乌梅丸组Delta阿片受体、β-arrestin1及Bcl-2 mRNA的相对表达分别为1.54±0.13、1.54±0.14及1.57±0.15;蛋白的相对表达分别为0.68±0.14、0.74±0.19及0.93±0.11.与空白对照组相比,结肠炎模型组Delta阿片受体、β-arrestin1、Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著升高(P＜0.05);与结肠炎模型组相比,乌梅丸组、美沙拉嗪组Delta阿片受体、β-arrestin1、Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著下降(P＜0.05),且乌梅丸组和美沙拉嗪组Delta阿片受体、β-arrestin1、Bcl-2 mRNA和蛋白表达均无显著差异(P＞0.05).结论:乌梅丸下调UC大鼠脾脏组织Delta阿片受体、β-arrestin1、Bcl-2 mRNA和蛋白表达发挥治疗结肠炎的作用.
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复方苦参汤对溃疡性结肠炎DOR-β-arrestin1-Bcl-2信号转导通路的干预作用
目的:探讨复方苦参汤对溃疡性结肠炎大鼠DOR-β-arrestinl-Bcl-2信号转导通路的干预作用.方法:SD ♂大鼠84只(体质量200 g±20 g)随机分为空白对照组、模型组、美沙拉嗪组、复方苦参汤大剂量组、复方苦参汤中剂量组和复方苦参汤小剂量组,每组14只.除对照组外,其余5组均依据Morris等三硝基苯磺酸(trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS)建立大鼠溃疡性结肠炎模型.造模后观察记录大鼠的大便和精神状态,并于第3天随机处死2只造模大鼠,取结肠镜下观察其病理组织学变化发现:大鼠结肠糜烂、充血及溃疡,证明造模成功.建立大鼠溃疡性结肠炎模型后给予美沙拉嗪组大鼠3mL/d(0.5g/L)美沙拉嗪混悬液灌胃,复方苦参汤大、中、小剂量组分别按不同含生药浓度的复方苦参汤液3 mL/d(0.67、0.34、0.17 g/L)灌胃,对照组和模型组给予等量的生理盐水3 mL/d灌胃,连续灌胃15 d后,禁食24 h,处死大鼠,取结肠组织石蜡包埋切片,HE染色比较各组结肠组织病理组织学改变,Real time-PCR和免疫组织化学技术检测实验大鼠结肠组织的Bcl-2、β-arrestin1及δ阿片受体(delta opioid receptor,DOR) mRNA和蛋白表达表达变化.结果:各组大鼠结肠组织中Bcl-2、β-arrestin1 和DOR表达有显著差异(P＜0.05).与对照组比较,模型组的大鼠结肠黏膜组织Bcl-2、β-arrestin1和DOR表-达明显升高(24.11±12.61vs 11.88±5.90,38.90±5.30 vs 14.34±8.97,23.57±9.96 vs 9.68±3.94,均P＜0.05)；与模型组比较,美沙拉嗪组和复方苦参汤大、中、小剂量组的大鼠结肠黏膜组织Bcl-2、β-arrestin1、DOR表达均显著下降,但美沙拉嗪组和复方苦参汤大、中、小剂量组之间比较Bcl-2、β-arrestin1、DOR表达无显著差异.结论:在实验性溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中DOR、β-arrestin1和Bcl-2的表达升高,DOR-β-arrestin1-Bcl-2信号转导通路可能参与了溃疡性结肠炎的病理过程,复方苦参汤可改善溃疡性结肠炎大鼠的结肠组织病理学改变,机制可能与调节该信号通路有关.
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β-Arrestin1介导低氧诱导的大鼠皮层CRFR1内在化
目的:探讨β-Arrestin1在低氧后诱导大鼠皮层促肾上腺皮质激素释放激素1型受体(CRFR1)内在化的机制.方法:利用低压低氧舱模拟高原低氧,将SD大鼠分别暴露于急性低氧7 km(8.2％ O2,41.02 kPa)8 h和24h,连续慢性低氧5 km(10.8％O2,54.02 kPa)5 d和15 d,采用实时定量PCR研究低氧对大鼠大脑前额叶皮层促肾上腺皮质激素释放激素(CRF)、CRFR1、G蛋白偶联受体激酶(GRK3)和β-Arres血1基因表达的影响.结果:急性低氧7km8h上调CRF、GRK3基因表达,而7 km24 h严重低氧抑制CRFR1和GRK3基因表达；慢性连续低氧促进β-Arrestin1 mRNA增加,下调CRFR1基因表达.结论:皮层CRF分泌和基因表达的减少以及β-Arrestin1 mRNA的增加可能使CRFR1脱敏,这可能是机体对慢性连续低氧反应性降低的机制之一.
关键词： 低氧 β-arrestin1 CRF CRFR1 -
β-arrestin1激活 STAT3信号通路影响白血病细胞 K562体外迁移侵袭能力
目的：：探讨β-arrestin1对白血病细胞生物学功能的影响及相关机制的研究。方法：特异性的β-Arrestin1-siRNA和阴性对照siRNA转染K562细胞,形成β-Arrestin1-siRNA组、阴性对照siRNA组和空白组对照组。以此为实验分组,应用transwell小室法检测各组细胞的迁移侵袭能力变化,Western blot检测pSTAT3蛋白的表达。结果：β-Arrestin1-siRNA处理组细胞的迁移和侵袭能力较对照组分别下降43%及52%( P<0.05)；且pSTAT3蛋白表达减少；STAT3抑制剂能抑制K562细胞体外迁移侵袭能力。结论：白血病细胞K562中β-arrestin1蛋白高表达激活STAT3信号通路,从而促进细胞的迁移侵袭能力。
关键词： β-arrestin1 STAT3 迁移侵袭 -
兰茵凤扬化浊解毒方治疗大鼠溃疡性结肠炎的作用机制
目的 观察兰茵凤扬化浊解毒方对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠组织中δ阿片受体(DOR)、β-arrestin1、Bcl-2 mR-NA表达的影响.方法 60只Wistar大鼠随机分为正常组10只与造模组50只.采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇联合造模法造模.造模组大鼠按照随机数字表分为模型组9只、中药高、中、低剂量组各9只,美沙拉嗪组9只,予相应药物灌胃2 w,观察大鼠疾病活动指数(DAI)评分、结肠黏膜病理学改变,结肠组织中δ阿片受体(DOR)、β抑制蛋白(β-arrestin1)及Bcl-2 mRNA的表达情况.结果 DAI评分:与空白组比较,其余各组均升高,与模型组比较,各治疗组均降低(P<0.05).DOR mRNA与β-arrestin1 mRNA:与模型组相比,各治疗组DOR mRNA及β-arrestin1 mRNA表达均明显降低(P<0.05),而中药中剂量组与美沙拉嗪组比较无明显差异(P>0.05).Bcl-2 mRNA:与模型组相比,各治疗组Bcl-2 mRNA表达均明显降低(P<0.05),中药高剂量组与空白组比较无明显差异(P>0.05).结论 兰茵凤扬化浊解毒方可能通过对DOR-β-arrestin1-Bcl-2信号转导通路活化环节的干预,促进肠黏膜中T细胞凋亡,从而恢复肠道免疫稳态达到治疗UC的目的.
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β-arrestin1在非小细胞肺癌中的表达及其对肺癌细胞增殖的影响
目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系和组织中β-arrestin1的表达及β-arrestin1对肺癌细胞增殖能力的影响.方法 收集该院经手术治疗的30例NSCLC患者的癌组织标本(NSCLC组)和肺良性病变边缘正常肺组织标本(对照组),培养NSCLC细胞系(SPC-A-1、H460、H520、H1975)和人正常肺上皮细胞系16HBE,分别提取NSCLC组、对照组及细胞系总RNA,逆转录后,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)用于检测β-arrestin1 mRNA的表达,蛋白印迹法(Western印迹)和免疫组化(IHC)分别检测细胞系和组织中的β-arrestin1蛋白的表达水平.MTT实验检测分别转染sh-β-arrestin1质粒和对照质粒sh-control到SPC-A-1细胞后对NSCLC细胞SPC-A-1增殖能力的影响.结果 β-arrestin1 mRNA和蛋白表达水平在NSCLC组织和细胞系中分别高于对照组和16HBE细胞(P<0.05).转染sh-β-arrestin1质粒后,β-arrestin1 mRNA和蛋白表达水平均显著下调,且在MTT实验中可显著抑制ASPC-A-1的增殖能力(P<0.05).结论 β-arrestin1在NSCLC组织和细胞系中呈高表达,且可以抑制肺癌细胞的增殖.
关键词： 非小细胞肺癌 β-arrestin1 -
β-arrestin1在胃癌细胞BGC-823中的生物学功能
目的 探讨β-arrestin1对胃癌细胞BGC-823增殖、迁移、侵袭及凋亡能力的影响.方法 用实时定量PCR技术及Western印迹法检测人胃黏膜上皮细胞GES和人胃癌细胞株BGC-823、MKN-28、SGC-7901中β-arrestin1的表达水平.应用RNA干扰技术构建稳定干扰β-arrestin1和阴性对照组(pU6空载体)的BGC-823细胞株.进一步应用细胞计数法、划痕实验、Transwell小室实验及流式细胞术分析干扰β-arrestin1和阴性对照组的BGC-823细胞株的增殖、迁移、侵袭能力及凋亡水平的变化.统计学处理采用t检验.结果 β-arrestin1在GES表达量为0.001±0.001,MKN-28表达量为0.002±0.000,SGC-7901表达量为0.003±0.002,BGC-823中表达量为0.005±0.000.干扰β-arrestin1和阴性对照的BGC-823细胞增殖抑制率分别为-30.2％和100.0％.迁移能力受到抑制,穿过基质膜细胞数分别为126.25±3.24和213.50±6.27(t=0.000,P＜0.01),凋亡率为(41.350±1.053)％和(11.497±0.589)％(t=0.015,P＜0.05).结论 β-arrestin1在胃癌细胞中高水平表达,并且随着胃癌细胞恶性度增高而表达量增加,在BGC-823细胞中干扰β-arrestin1后能抑制细胞的生长、迁移、侵袭,并提高凋亡水平.
关键词： β-arrestin1 胃肿瘤 RNA干扰 肿瘤细胞 培养的 -
儿童急性淋巴细胞白血病β-arrestin1表达升高的临床意义
目的 探讨β-arrestin1在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及临床意义.方法 收集155例初发ALL患儿的骨髓样本(ALL组),分离单个核细胞,以51例非恶性血液疾病患者作为对照(Ctrl组),将ALL患者分成高危、中危和标危组,采用实时荧光定量RT-PCR法检测β-arrestin1 mRNA的表达,采用蛋白质印迹法和免疫荧光法检测β-arrestin1蛋白表达的变化.用Spearman统计分析β-arrestin1表达与ALL患者临床和生物学特点之间的相关性.结果 ALL组β-arrestin1 mRNA和蛋白表达均高于Ctrl组(P值均<0.01).高危组和中危组β-arrestin1 mRNA表达高于标危组,且高危组β-arrestin1 mRNA表达高于中危组,差异具有统计学意义(P<0.05).Spearman相关分析显示,β-arrestin1表达与外周血白细胞数(r=0.458,P=0.002)和危险分级(r=0.344,P=0.022)正相关.结论 儿童ALL患者骨髓β-arrestin1表达水平与患者的危险分级密切相关,对ALL诊断、治疗策略和预后具有重要意义.
关键词： 急性淋巴细胞白血病 β-arrestin1 单个核细胞 -
乌梅丸对TNBS诱导的溃疡性结肠炎大鼠脾脏组织β-arrestin1表达的影响
目的 观察乌梅丸对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的溃疡性结肠炎大鼠脾脏组织β-arrestin1表达的影响.方法 将56只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、美沙拉嗪组、乌梅丸组各14只,除空白对照组外,其余三组均应用TNBS灌肠;溃疡性结肠炎模型建成2d后,空白对照组和模型组以蒸馏水、美沙拉嗪组以美沙拉嗪混悬液(50 g/L)、乌梅丸组以乌梅丸液(0.51 g/L)灌胃,均为每只3 mL,连续灌胃15 d后取脾脏组织,采用RT-PCR法检测β-arrestin1 mRNA,Western blot法检测β-arrestin1蛋白.结果 与空白对照组比较,模型组β-arrestin1 mR-NA、蛋白表达均升高(P均＜0.05);与模型组比较,乌梅丸组、美沙拉嗪组β-arrestin1 mRNA、蛋白表达均下降(P均＜0.05).结论 乌梅丸可下调TNBS诱导的溃疡性结肠炎大鼠脾脏组织β-arrestin1 mRNA、蛋白表达.
关键词： 乌梅丸 溃疡性结肠炎 β-arrestin1 -
肝细胞癌中β-arrestin1、MMP-9表达的相关性
目的 探讨β-arrestin1和MMP-9在肝细胞癌组织中的相关表达及意义.方法 收集不同临床分期与病理分级的肝细胞癌组织标本35例,其中Ⅱ期23例,Ⅲ期12例,同时收集这些病人的癌旁组织作为对照,以非肝癌患者的肝组织15例为正常对照.采用实时荧光定量RT-PCR法检测β-arrestin1 mRNA的表达,并用Western blot方法检测β-arrestinl蛋白水平变化,ELISA方法检测MMP-9蛋白浓度.结果 正常肝、肝细胞癌和癌旁组织中均有β-arrestin1 mRNA和蛋白的表达.与正常和癌旁组相比,不同分期的肝细胞癌组织中的β-arrestin 1 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P＜0.05),且其表达水平随临床分期增加而增加;其表达水平与MMP-9的浓度密切相关(P＜0.05).结论 肝细胞癌组织中β-arrestin1和MMP-9呈现明显相关表达,这对肝癌血管生成和转移可能具有重要作用.
关键词： 肝细胞癌 β-arrestin1 MMP-9 -
β-arrestin1激活JNK信号通路促进慢性髓细胞白血病细胞K562增殖
目的：以CML K562细胞为研究对象，探索β-arrestin1促进CML细胞增殖的相关信号通路。方法以β-arrestin1慢病毒载体感染CML K562细胞，形成稳定的K562-siβ1和K562-β1细胞，及非特异性siRNA对照K562-Ctrl细胞。以此为研究对象，利用细胞计数与CCK-8实验检测细胞增殖能力；Western blot检测蛋白表达；免疫共沉淀（Co-IP）实验检测蛋白间的相互作用。结果细胞计数与CCK-8实验结果显示K562-β1细胞增殖与细胞存活率能力显著高于K562-Ctrl，而K562-siβ1显著低于K562-Ctrl。Western blot结果表明β-arrestin1特异性增强磷酸化JNK表达，JNK抑制剂SP600125能抑制p-JNK表达和K562细胞增殖；免疫共沉淀实验表明β-arrestin1能与Src结合。结论 CML K562细胞中β-arrestin1与Src结合，促进JNK信号通路激活，从而促进细胞增殖。
关键词： β-arrestin1 CML 细胞增殖 JNK -
系统性红斑狼疮患者血清中β抑制蛋白质-1水平及其与疾病活动性的关系
目的:探讨β抑制蛋白质-1(β-arrestin1)在系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中的水平及其与疾病活动性的关系.方法:收集临床确诊的31例SLE患者及31例健康体检者的血清.根据SLEDAI评分≥10或<10,将31例SLE患者分为活动期和缓解期,ELISA测定健康对照与31例SLE患者血清中β抑制蛋白质-1(β-arrestin1)的水平,并采用SPSS13.0软件对各组数据进行差异性比较和相关分析.结果:SLE患者血清中β-arrestin1的水平(0.252 μg/L)低于健康人(0.501 μg/L),具有统计学意义(P<0.05);SLE活动期(SLEDAI评分≥10)患者血清中β-arrestin1水平(0.133 μg/L)低于缓解期(SLEDAI评分<10)(0.342 μg/L),亦具有统计学意义(P<0.01);抗核抗体滴度1:80 SLE患者血清中β-arrestin1的水平低于抗核抗体1:40,(0.214μg/L vs 0383 μg/L,P<0.05).结论:血清β-arrestin1水平在SLE患者中明显降低,且与疾病的活动性呈一定程度负相关.
关键词： SLE β-arrestin1 ELISA -
β-arrestin1在实验性自身免疫性葡萄膜炎中的表达
目的:初步探讨β-arrestin1在实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)中的表达.方法:成功建立EAU动物模型后,通过免疫组织化学和RT-PCR的方法检测β-arrestin1在EAU小鼠脾脏细胞中的表达.结果:免疫组织化学和RT-PCR均提示β-arrestin1在EAU小鼠脾脏细胞中的表达较正常小鼠增高.结论:β-arrestin1可能在EAU的发生发展中起着重要作用.
关键词： 实验性自身免疫性葡萄膜炎 β-arrestin1
